本发明属于分析化学领域，具体涉及基于银纳米紫外可见分光光度法测定工业提取大麻二酚含量的方法。
背景技术：
大麻二酚是一种从工业大麻中提取分离鉴别的非成瘾性生物组分，现代生物医学研究表明，其能阻碍大麻中成瘾性组分四氢大麻酚对人体神经系统影响，并具有抗痉挛、抗风湿性关节炎、抗焦虑、抗抑郁、抗失眠等药理活性。
对大麻二酚含量的测定方法中现报道的有气相色谱-质谱联用(gc-ms)、液相色谱-质谱联用(lc-ms)、气相色谱(gc-fid)、高效液相色谱法(hplc)等。在这些方法中均需要用到色谱方法进行分离后测定，方法繁琐，仪器设备硬件条件要求高。
对工业高纯度提取物中大麻二酚含量的测定需要快速、简便、准备的检测方法，为此有必须寻找操作简单，准确快速可行的方法。
技术实现要素：
本发明目的在于针对现有技术的不足，提供一种方法简单、准确性高、易操作的基于紫外可见分光光度法测定大麻二酚含量的方法。该方法具有灵敏度高、选择性好、方法简便快捷、成本低廉等有点，在工业高纯度提取物中大麻二酚含量的测定有良好的应用前景。
实现本发明目的的技术方案是：
基于银纳米紫外可见分光光度法测定工业提取大麻二酚含量的方法，包括如下步骤：
(1)制备大麻二酚的标准溶液体系：于10ml比色管中，依次加入1.0ml质量百分比为0.1～1.0％的1-辛烷磺酸钠溶液、1.0ml0.1～1.0g/l的硝酸银溶液、0.5ml0.1～1.0g/l的氢氧化钠溶液和0.5ml质量百分比为0.1～1.0％的氨水溶液，混匀后再加入1.0ml0.001～0.020mg/ml大麻二酚标准溶液，用蒸馏水定容混匀后于50～90℃水浴中反应40min；
(2)按照步骤(1)的方法制备不加大麻二酚的空白对照体系；
(3)取标准溶液体系和空白对照体系的溶液分别置于石英比色皿中，在紫外可见分光光度计上，以步骤(2)制备的空白对照体系溶液为空白，步骤(1)制备的大麻二酚标准溶液为样液，扫描紫外可见吸收光谱，测定435nm处标准溶液的吸收峰强度为a；
(4)以a对大麻二酚标准溶液浓度关系作标准曲线；
(5)取mmg工业提取大麻二酚样品用分析纯乙醇溶解定容于vml容量瓶，按照步骤(1)的方法制备待测样品溶液，其中加入的大麻二酚标准溶液替换为样品溶液，并按步骤(3)的方法测定样品溶液的紫外可见吸收峰强度a样；
(6)根据步骤(4)的工作曲线，计算出样品溶液中大麻二酚的浓度c样，通过公式：含量(％)＝c样×v÷m×100，可计算出提取物中大麻二酚含量。
原理：在本发明的条件下，大麻二酚中酚羟基在碱性条件下转化为醌从而有还原性，这种还原性能够将银氨溶液中的银离子还原为银纳米微粒，从而在435nm左右出现银纳米微粒的特征吸收峰，且随着大麻二酚浓度的增加而吸收峰线性增加。采用紫外可见分光光度计对该反应得到的溶液进行吸收扫描得到紫外可见分光光度光谱，依照紫外可见分光光度光谱峰值与大麻二酚浓度的线性关系，快速测定工业高纯度提取物中大麻二酚含量。
本发明的优点是：与已有的方法相比，本测定方法仪器要求简单，操作简便，试剂易得，选择性好，成本低廉。
附图说明
图1为实施例1中大麻二酚标准溶液体系的紫外可见吸收光谱图；
图2为实施例1中大麻二酚标准溶液体系的标准曲线图；
图3为实施例1中0.018mg/ml大麻二酚标准溶液反应生成的银纳米微粒的透射电镜图。
具体实施方案
以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为本发明的限制。
实施例1
基于银纳米紫外可见分光光度法测定提取物中大麻二酚含量的方法，包括如下步骤：
(1)大麻二酚的标准溶液体系制备：取9支10ml比色管，每支比色管中均依次加入1.0ml质量百分比为0.1％的1-辛烷磺酸钠溶液、1.0ml0.1g/l的硝酸银溶液、0.5ml0.1g/l的氢氧化钠溶液和0.5ml质量百分比为0.1％的氨水溶液，分别摇匀，再向9支比色管中分别加入1.0ml浓度不同的大麻二酚标准溶液，每支比色管中所加大麻二酚标准溶液的浓度分别为0.002、0.004、0.006、0.008、0.010、0.012、0.014、0.016、0.018mg/ml，用蒸馏水定容混匀后，于50℃水浴中反应40min(0.018mg/ml大麻二酚标准溶液反应生成的银纳米微粒的透射电镜图如图3所示)；
(2)按照步骤(1)的方法制备不加大麻二酚的空白对照体系；
(3)取标准溶液体系和空白对照体系的溶液分别置于石英比色皿中，在紫外可见分光光度计上，以步骤(2)制备的空白对照体系溶液为空白，步骤(1)制备的大麻二酚标准溶液为样液，扫描紫外可见吸收光谱(标准溶液体系的紫外可见吸收光谱图如图1所示)，测定435nm处标准溶液的吸收峰强度为a；
(4)以a对大麻二酚标准溶液浓度关系作标准曲线：a＝31.917c-0.0082(r2＝0.9987)，大麻二酚浓度c的单位为mg/ml，线性范围为0.002～0.018mg/ml，标准曲线图如图2所示；
(5)取5.0mg工业提取大麻二酚样品用分析纯乙醇溶解定容于500ml容量瓶制得大麻二酚样品乙醇溶液，取10ml比色管，依次加入1.0ml质量百分比为0.1％的1-辛烷磺酸钠溶液、1.0ml0.1g/l的硝酸银溶液、0.5ml0.1g/l的氢氧化钠溶液、0.5ml质量百分比为0.1％的氨水溶液和1.0ml大麻二酚样品乙醇溶液，用蒸馏水定容混匀后，于50℃水浴中反应40min，制得待测的样品溶液，按步骤(3)的方法测定样品溶液的紫外可见吸收峰强度a样＝0.2704；
(6)根据步骤(4)的标准曲线，计算出样品溶液中大麻二酚的浓度c样＝0.00873mg/ml，通过公式：含量(％)＝c样×500÷5.0×100，可计算出提取物中大麻二酚含量为87.3％，6个平行样品的rsd(n＝6)为5.7％。
(7)用步骤(5)制备的样品溶液为样本，制备浓度为0.01240mg/ml的回收率考察溶液，计算回收率为94.7％，rsd(n＝6)为3.4％。
实施例2
基于银纳米紫外可见分光光度法测定提取物中大麻二酚含量的方法，包括如下步骤：
(1)大麻二酚的标准溶液体系制备：取10支10ml比色管，每支比色管中均依次加入1.0ml质量百分比为1.0％的1-辛烷磺酸钠溶液、1.0ml1.0g/l的硝酸银溶液、0.5ml1.0g/l的氢氧化钠溶液和0.5ml质量百分比为1.0％的氨水溶液，分别摇匀，再向10支比色管中分别加入1.0ml浓度不同的大麻二酚标准溶液，每支比色管中所加大麻二酚标准溶液的浓度分别为0.002、0.004、0.006、0.008、0.010、0.012、0.014、0.016、0.018、0.020mg/ml，用蒸馏水定容混匀后，于90℃水浴中反应40min；
(2)按照步骤(1)的方法制备不加大麻二酚的空白对照体系；
(3)取标准溶液体系和空白对照体系的溶液分别置于石英比色皿中，在紫外可见分光光度计上，以步骤(2)制备的空白对照体系溶液为空白，步骤(1)制备的大麻二酚标准溶液为样液，扫描紫外可见吸收光谱，测定435nm处标准溶液的吸收峰强度为a；
(4)以a对大麻二酚标准溶液浓度关系作标准曲线：a＝29.574c-0.0103(r2＝0.9991)，大麻二酚浓度c的单位为mg/ml，线性范围为0.002～0.020mg/ml；
(5)取2.0mg工业提取大麻二酚样品用分析纯乙醇溶解定容于200ml容量瓶制得大麻二酚样品乙醇溶液，取10ml比色管，依次加入1.0ml质量百分比为1.0％的1-辛烷磺酸钠溶液、1.0ml1.0g/l的硝酸银溶液、0.5ml1.0g/l的氢氧化钠溶液、0.5ml质量百分比为1.0％的氨水溶液和1.0ml大麻二酚样品乙醇溶液，用蒸馏水定容混匀后，于90℃水浴中反应40min，制得待测的样品溶液，按步骤(3)的方法测定样品溶液的紫外可见吸收峰强度a样＝0.2541；
(6)根据步骤(4)的标准曲线，计算出样品溶液中大麻二酚的浓度c样＝0.00894mg/ml，通过公式：含量(％)＝c样×200÷2.0×100，可计算出提取物中大麻二酚含量为89.4％，6个平行样品的rsd(n＝6)为4.5％。
(7)用步骤(5)制备的样品溶液为样本，制备浓度为0.01534mg/ml的回收率考察溶液，计算回收率为91.3％，rsd(n＝6)为5.4％。
实施例3
基于银纳米紫外可见分光光度法测定提取物中大麻二酚含量的方法，包括如下步骤：
(1)大麻二酚的标准溶液体系制备：取10支10ml比色管，每支比色管中均依次加入1.0ml质量百分比为0.2％的1-辛烷磺酸钠溶液、1.0ml0.5g/l的硝酸银溶液、0.5ml0.7g/l的氢氧化钠溶液和0.5ml质量百分比为0.8％的氨水溶液，分别摇匀，再向10支比色管中分别加入1.0ml浓度不同的大麻二酚标准溶液，每支比色管中所加大麻二酚标准溶液的浓度分别为0.002、0.004、0.006、0.008、0.010、0.012、0.014、0.016、0.018、0.020mg/ml，用蒸馏水定容混匀后，于70℃水浴中反应40min；
(2)按照步骤(1)的方法制备不加大麻二酚的空白对照体系；
(3)取标准溶液体系和空白对照体系的溶液分别置于石英比色皿中，在紫外可见分光光度计上，以步骤(2)制备的空白对照体系溶液为空白，步骤(1)制备的大麻二酚标准溶液为样液，扫描紫外可见吸收光谱，测定435nm处标准溶液的吸收峰强度为a；
(4)以a对大麻二酚标准溶液浓度关系作标准曲线：a＝35.141c-0.0064(r2＝0.9974)，大麻二酚浓度c的单位为mg/ml，线性范围为0.002～0.020mg/ml；
(5)取5.0mg工业提取大麻二酚样品用分析纯乙醇溶解定容于500ml容量瓶制得大麻二酚样品乙醇溶液，取10ml比色管，依次加入1.0ml质量百分比为0.2％的1-辛烷磺酸钠溶液、1.0ml0.5g/l的硝酸银溶液、0.5ml0.7g/l的氢氧化钠溶液、0.5ml质量百分比为0.8％的氨水溶液和1.0ml大麻二酚样品乙醇溶液，用蒸馏水定容混匀后，于70℃水浴中反应40min，制得待测的样品溶液，按步骤(3)的方法测定样品溶液的紫外可见吸收峰强度a样＝0.3017；
(6)根据步骤(4)的标准曲线，计算出样品溶液中大麻二酚的浓度c样＝0.00877mg/ml，通过公式：含量(％)＝c样×500÷5.0×100，可计算出提取物中大麻二酚含量为87.7％，6个平行样品的rsd(n＝6)为4.3％。
(7)用步骤(5)制备的样品溶液为样本，制备浓度为0.01871mg/ml的回收率考察溶液，计算回收率为90.1％，rsd(n＝6)为3.3％。