本发明属于生物医学诊断
技术领域：
，具体涉及一种标记白带及宫颈脱落细胞病原菌的荧光染色试剂。
背景技术：
：阴道炎是目前临床在常见的由致病菌引起的妇科疾病，根据病原菌的种类不同，临床典型的分为以下三类：细菌性阴道炎，念珠菌性阴道炎，滴虫性阴道炎。细菌性阴道炎患者主要表现为阴道分泌物增多，有鱼腥味，尤其性交后加重，可伴有轻度外阴瘙痒或灼热感。主要由阴道内乳杆菌减少、加德纳菌及厌氧菌等增加所致的内源性混合感染引起的。念珠菌性阴道炎表现为外阴红斑、水肿、白色膜状物。分泌物白色稠厚呈凝乳或豆渣样。80%～90%病原体为白色念珠菌。常见诱因包括妊娠、糖尿病、大量应用免疫抑制剂及广谱抗生素。滴虫性阴道表现为炎阴道黏膜充血，散在出血斑点，“草莓样”宫颈后穹隆多量白带，呈灰黄色、黄白色稀薄液体或黄绿色脓性分泌物，常呈泡沫状。主要致病菌为阴道毛滴虫感染。阴道分泌物病原菌检查的主要目的是诊断女性有无念珠菌性阴道炎、滴虫性阴道炎及细菌性阴道病。传统的阴道分泌物病原菌检测方法主要包括直接镜检法、格兰染色法、分离培养法以及酶学检测方法。下面分别罗列传统的细菌性阴道炎，念珠菌性阴道炎，滴虫性阴道炎检测方法。细菌性阴道炎：1.线索细胞检查通过普通光学显微镜结合格兰染色，镜下见线索细胞可判定为细菌性阴道炎。线索细胞为脱落的阴道鳞状上皮细胞表面覆盖着许多球杆菌，使细胞呈斑点状、颗粒状外观，细胞边缘模糊不清呈锯齿状。缺点：阳性率低，形态不典型容易造成漏诊，检验人员主观误差较大。2.唾液酸酶测定法细菌性阴道病时出现的一些微生物可产生唾液酸酶，通过显色反应测定阴道分泌物中该酶的活性从而间接诊断bv。缺点：阴道分泌物取材后需立即检测，否则酶会失去活性；检测过程中多需要37℃孵育过程，操作过程略显繁琐，且酶学反应结果不直观，容易造成假阳性。真菌性阴道炎：1.直接镜检法直接涂片镜检是将所取标本直接置于玻片上,用染色或加10％koh溶液,在光镜下检查。但是真菌与组织细胞之间的反差不大，鉴别真菌非常困难，还需要进一步培养鉴定。另外,直接镜检阴性也不能排除真菌感染的可能性。2.分离培养方法从临床标本中对真菌进行培养，目的在于从临床标本中分离真菌,以确定是否有真菌感染,特别是在直接镜检为阴性时。缺点：培养法虽然检测结果准确性高，但由于真菌生长缓慢,培养常需要数天甚至数周才有结果，常会延误患者病情。滴虫性阴道炎：1.直接镜检法将阴道分泌物拭子标本放入1ml生理盐水试管内，混匀后吸取一滴于载玻片，盖上盖玻片，显微镜下查找滴虫。缺点：标本取材后需要立即检测，否则时间过长滴虫容易死亡而不易观察；对检验人员有一定的技术要求，有较大的主观误差。2.抗原检测法检测阴道分泌物中是否存在阴道毛滴虫抗原来判断是否有阴道毛滴虫。阴道毛滴虫抗原检测试剂，其原理为免疫层析法，敏感性高，但结果不直观，存在一定的假阳性。阴道病原菌联合检测：通过测定阴道分泌物和宫颈脱落细胞的多种生化或酶学指标，包括ph值、过氧化氢酶，白细胞脂酶，唾液酸苷酶，乙酰氨基葡萄糖苷酶，通过这些酶学指标综合判断患者的微生物感染情况。缺点是有些指标的判断价值有待进一步论证，有的指标没有明确的科学依据，临床的实际使用结果也不理想。尤其对于混合型感染情况的判断，存在很大的误差。技术实现要素：本发明针对现有技术不足，研发出一种双剂型的妇科快速荧光染色液，结合免疫学和荧光标记的原理，能够在同一张载玻片上同时检测细菌、真菌和滴虫，病原菌通过本试剂染色后，通过双波段荧光显微镜进行观察，在uv波段下观察有无真菌，切换b波段，观察有无厌氧菌和毛滴虫。本发明产品操作简单，只需两步操作即可完成染色；染色时间短，一分钟以内即可进行观察；相较于传统的镜检法，敏感性和阳性率更高；相较于干化学酶法，结果更直观、准确，同时能更好的解决混合型感染的情况。临床使用更加方便、快捷，大大提高阴道炎和宫颈炎的诊断效率。本发明具体技术方案如下：一种标记白带及宫颈脱落细胞病原菌的荧光染色试剂，包括两种试剂a液和b液。a液包含水、盐、结合蛋白、特异性抗体、荧光增白剂、促溶剂、保湿剂以及背景复染剂。b液包含水、荧光素。本发明所述盐为无机盐，优选氯化钾或氯化钠。优选碱的浓度为0.5%-1.0%（w/v），更优选0.9%（w/v）。本发明a液所述荧光增白剂选自选二苯乙烯类型荧光增白剂，优选双三嗪氨基二苯乙烯类型荧光增白剂，更优选荧光增白剂28。优选荧光增白剂的浓度为0.1%-1%（w/v）。荧光增白剂28结构如下所示：。本发明a液所述结合蛋白为特异性结合蛋白，优选β-d-葡聚糖结合蛋白，优选浓度为0.01%-0.05%（w/v）。本发明a液所述抗体为抗β-d-葡聚糖结合蛋白的抗体，优选羊抗兔多克隆抗体，优选浓度为0.01%-0.3%（w/v）。本发明a液所述背景复染剂为实验室常规使用的染料，优选酚蓝类染料或蓝色偶氮类染料，更优选溴酚蓝、百里酚蓝、台酚蓝、伊文思蓝、番红中的一种或几种，优选背景染料的浓度为0.1%-0.8%（w/v）。本发明a液所述促溶剂选自水溶性有机溶剂，优选二甲基亚砜。促溶剂的作用是染料的溶解度和稳定性。优选促溶剂的浓度为5-15%（v/v）。本发明a液所述保湿剂选自甘油，丙二醇，丁二醇中的一种或几种，优选甘油。保湿剂的作用是增加染液整体的保湿度，防止片子干掉。优选保湿剂的浓度为10-20%（v/v）。本发明b液所述荧光素选自核酸结合类荧光素，优选吖啶橙。优选吖啶橙的浓度为0.1%-1%（w/v）。本发明结合免疫学和荧光标记的原理，能够在同一张载玻片上同时检测细菌、真菌和滴虫，病原菌通过本试剂染色后，通过双波段荧光显微镜进行观察。本发明产品操作简单，只需两步操作即可完成染色；染色时间短，一分钟以内即可进行观察。临床使用更加方便、快捷，大大提高阴道炎和宫颈炎的诊断效率。附图说明图1为本发明试剂1的妇科白带标本的真菌染色结果，图2为试剂1细菌的染色结果，图3为试剂1滴虫的染色结果）。图4为本发明试剂2的妇科白带标本的真菌染色结果，图5为试剂2细菌的染色结果，图6为试剂2滴虫的染色结果）。具体实施方案以下通过实施例说明本发明的具体步骤，但不受实施例限制。在本发明中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实施例并参照数据进一步详细描述本发明。应理解这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。实施例1妇科荧光染色试剂的配制试剂1：a液配置：将荧光增白剂28溶于浓度为1.0％（w/v）氯化钾的溶液中，溶解充分，使荧光增白剂染料的浓度为0.2%（w/v），加入伊文思蓝染料和二甲基亚砜，伊文思蓝染料的浓度为0.2%（w/v），二甲基亚砜浓度为20%（v/v）。b液配置：将吖啶橙溶于水中，使吖啶橙的浓度为0.1%（w/v）。试剂2：a液配置：将荧光增白剂28溶于浓度为1.0％（w/v）氯化钾的溶液中，溶解充分，使荧光增白剂28的浓度为0.2%（w/v），加入伊文思蓝染料、二甲基亚砜、甘油和β-d-葡聚糖结合蛋白，羊抗兔多克隆抗体，使伊文思蓝染料的浓度为1%（w/v），二甲基亚砜浓度为10%（v/v），甘油浓度为15%（v/v），β-d-葡聚糖结合蛋白浓度为0.05%（w/v），羊抗兔多克隆抗体的浓度为0.01%（w/v）。b液配置：将吖啶橙溶于水中，使吖啶橙的浓度为0.1%（w/v）。实施例2白带标本的染色对比选取3份有病原菌感染的白带标本，分别放置于载玻片上，分别用试剂1,2进行染色染色2分钟，加上盖玻片，将多余的染料用纸吸掉，而后在荧光显微镜下观察。在uv波段下观察真菌，真菌将显示出蓝色或蓝绿色。然后切换b波段下观察细菌和滴虫，细菌被显示出橙色，且观察到细菌粘附在线索细胞上。滴虫虫体标记为红色，在1/3处有特异性斜杠黄色核形态。结果显示两种试剂都能将白带标本中的病原菌染色。但试剂1效果差，且显色时间短，而试剂2效果好，且显色时间长。表1试剂1试剂2染色效果差好显色时间短长实施例3溶液稳定性考察将试剂1和试剂2放置于室温6个月，然后对白带标本进行染色。从染色效果判断试剂的稳定性。结果如表2所示。表2试剂1试剂2染色效果差好沉淀无无外观颜色不变不变结果表明，室温放置放置6个月后，试剂1、试剂2外观颜色均不变，无沉淀结晶现象，试剂能保持稳定。试剂1染色效果差，而试剂2效果好。当前第1页12