本发明涉及生物检测
技术领域：
，尤其涉及一种妊娠期糖尿病的妊娠中期诊断标志物及其检测方法。
背景技术：
妊娠期糖尿病（gestationaldiabetesmellitus,gdm）是妊娠期间发生的不同程度的糖代谢异常，是妊娠期最常见的并发症之一，常伴发先兆子痫、巨大儿、胎儿发育畸形、围产儿死亡等不良妊娠结果，并与子代发生代谢综合征、母亲产后发生2型糖尿病密切相关。该病病因迄今尚未阐明，发病率逐渐增高，对母亲和婴儿健康造成严重危害。目前，对妊娠期糖尿病的临床诊断时间为妊娠24-28周，通过75g葡萄糖耐量试验（glucosetolerancetest，ogtt）确定。然而，临床实践表明，ogtt在实施时，存在以下不足：(1)诊断标准不统一，甚至同一国家不同地区或医院使用的标准也不一样，常用的国际糖尿病与妊娠研究组（iadpsg）标准尚存争议，诊断临界值相对偏低，假阳性率高，增加了疾病负担；(2)需不同时间点采血几次，等待时间长；(3)部分孕妇因早孕反应口服葡糖存在不适等。因此，现有技术还有待于改进和发展。技术实现要素：鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种妊娠期糖尿病妊娠中期诊断标志物及其检测方法，旨在解决现有技术中没有协助ogtt诊断或单独用于妊娠期糖尿病妊娠中期诊断的生物标志物问题。本发明的技术方案如下：一种妊娠期糖尿病妊娠中期诊断标志物，其中，所述标志物为血清差异蛋白，所述血清差异蛋白包括α1抗胰蛋白酶、载脂蛋白c-iii、载脂蛋白e、凝血因子9、凝血因子10、补体c1r亚组分、补体c1s亚组分、补体c5、补体c6、补体c9、c反应蛋白、血纤维蛋白α链、纤维蛋白原β链、纤维蛋白原γ链、凝溶胶蛋白、血红蛋白β亚基、胰岛素样生长因子结合蛋白复合物酸不稳定亚基、基膜聚糖、甘露聚糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶1、甘露聚糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶2、血浆激肽释放酶、血浆蛋白酶c1抑制剂、蛋白聚糖4、血清对氧磷酶/芳酯酶1、维生素k依赖的蛋白质s和血管性血友病因子中的三种或三种以上的蛋白。所述的妊娠期糖尿病妊娠中期诊断标志物，其中，所述血清差异蛋白为α1抗胰蛋白酶、载脂蛋白c-iii、载脂蛋白e、凝血因子9、凝血因子10、补体c1r亚组分、补体c1s亚组分、补体c5、补体c6、补体c9、c反应蛋白、血纤维蛋白α链、纤维蛋白原β链、纤维蛋白原γ链、凝溶胶蛋白、血红蛋白β亚基、胰岛素样生长因子结合蛋白复合物酸不稳定亚基、基膜聚糖、甘露聚糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶1、甘露聚糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶2、血浆激肽释放酶、血浆蛋白酶c1抑制剂、蛋白聚糖4、血清对氧磷酶/芳酯酶1、维生素k依赖的蛋白质s和血管性血友病因子。所述的妊娠期糖尿病妊娠中期诊断标志物，其中，所述血清差异蛋白为α1抗胰蛋白酶、载脂蛋白c-iii、补体c1r亚组分、补体c5、c反应蛋白、血纤维蛋白α链、纤维蛋白原β链、纤维蛋白原γ链、血红蛋白β亚基、胰岛素样生长因子结合蛋白复合物酸不稳定亚基、基膜聚糖、甘露聚糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶1、甘露聚糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶2、血浆激肽释放酶、血浆蛋白酶c1抑制剂、维生素k依赖的蛋白质s和血管性血友病因子。所述的妊娠期糖尿病的妊娠中期诊断标志物，其中，所述血清差异蛋白为α1抗胰蛋白酶、胰岛素样生长因子结合蛋白复合物酸不稳定亚基和血浆激肽释放酶。所述的妊娠期糖尿病的妊娠中期诊断标志物，其中，所述血清差异蛋白为纤维蛋白原β链、纤维蛋白原γ链、血红蛋白β亚基、维生素k依赖的蛋白质s和血管性血友病因子一种妊娠期糖尿病的妊娠中期诊断标志物的检测方法，其中，检测待测目标的血清差异蛋白中每种蛋白的浓度变化。所述的妊娠期糖尿病的妊娠中期诊断标志物的检测方法，其中，检测血清差异蛋白中每种蛋白浓度变化的方法为高通量蛋白质组学方法、酶联免疫技术及蛋白芯片技术中的一种或几种。有益效果：本发明采用高通量蛋白质组学方法、酶联免疫技术或蛋白芯片技术对妊娠期糖尿病的妊娠中期诊断标志物（血清差异蛋白）的浓度变化进行检测，该标志物诊断准确性高，且检测方法操作简单、快速。具体实施方式本发明提供了一种妊娠期糖尿病的妊娠中期诊断标志物及其检测方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。本发明提供了一种妊娠期糖尿病的妊娠中期诊断标志物，其中，所述标志物为血清差异蛋白，所述血清差异蛋白包括α1抗胰蛋白酶、载脂蛋白c-iii、载脂蛋白e、凝血因子9、凝血因子10、补体c1r亚组分、补体c1s亚组分、补体c5、补体c6、补体c9、c反应蛋白、血纤维蛋白α链、纤维蛋白原β链、纤维蛋白原γ链、凝溶胶蛋白、血红蛋白β亚基、胰岛素样生长因子结合蛋白复合物酸不稳定亚基、基膜聚糖、甘露聚糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶1、甘露聚糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶2、血浆激肽释放酶、血浆蛋白酶c1抑制剂、蛋白聚糖4、血清对氧磷酶/芳酯酶1、维生素k依赖的蛋白质s和血管性血友病因子中的三种或三种以上的蛋白。在本实施例中，所述差异蛋白是指妊娠期糖尿病患者与健康孕妇(正常糖耐量孕妇)在妊娠24-28周时，血清中的差异蛋白。所述妊娠期糖尿病的妊娠中期诊断标志物可以为上述26中蛋白中三种或三种以上；优选的，作为诊断标志物所述血清差异蛋白为上述所有26种蛋白，该26种蛋白对妊娠期糖尿病的诊断准确率达到90%以上。本发明还提供了一种妊娠期糖尿病妊娠中期诊断标志物的检测方法，其中，检测待测目标血清差异蛋白中每种蛋白的浓度变化。所述浓度变化是指每种蛋白表达的上调和下调；进一步的，所述上调是指，针对同一种蛋白，妊娠时间为24-28周时，妊娠期糖尿病患者血清中该蛋白的浓度为健康孕妇血清中该蛋白浓度的1.5倍以上；所述下调是指，针对同一种蛋白，妊娠时间为24-28周时，健康孕妇血清中该蛋白浓度为妊娠期糖尿病患者血清中该蛋白浓度的1.5倍以上。在本实施例中，针对妊娠时间为24-28周的待测目标，采集其血清样本后，检测其血清中所述血清差异蛋白浓度的变化。该方法能够较为准确的对待测目标妊娠时间为24-28周的血清中是否存在所述血清差异蛋白进行检测，检测方法简单、检测准确性高，能够大大方便临床应用。可以采用高通量蛋白质组学法、酶联免疫技术或蛋白芯片技术中的一种或两种对血清差异蛋白的浓度变化进行检测，优选的，采用两种方法分别对血清差异蛋白的浓度变化进行检测，并将检测结果进行比对分析，从而提高检测结果的准确性。实施例1采集妊娠时间为24-28周待测目标1的血清样本，采用高通量蛋白质组学方法及酶联免疫技术对妊娠期糖尿病患者血清和健康对照血清进行比较分析。结果得到：与健康孕妇的血清相比，在妊娠期糖尿病患者血清中获得了血清差异蛋白26个，其中18个蛋白表达上调，8个蛋白表达下调，详见下表1。表待测目标1与健康孕妇妊娠中期(24-28周）血清差异蛋白对照表蛋白英文名基因名蛋白中文名表达变化alpha-1-antitrypsinserpina1α1抗胰蛋白酶下调apolipoproteinc-iiiapoc3载脂蛋白c-iii上调apolipoproteineapoe载脂蛋白e上调coagulationfactorixf9凝血因子9上调coagulationfactorxf10凝血因子10上调complementc1rsubcomponentc1r补体c1r亚组分上调complementc1ssubcomponentc1s补体c1s亚组分上调complementc5c5补体c5下调complementcomponentc6c6补体c6下调complementcomponentc9c9补体c9下调c-reactiveproteincrpc反应蛋白上调fibrinogenalphachainfga血纤维蛋白α链上调fibrinogenbetachainfgb血纤维蛋白α链上调fibrinogengammachainfgg血纤维蛋白α链上调gelsolingsn凝溶胶蛋白下调hemoglobinsubunitbetahbb血红蛋白β亚基下调insulin-likegrowthfactor-bindingproteincomplexacidlabilesubunitigfals胰岛素样生长因子结合蛋白复合物酸不稳定亚基下调lumicanlum基膜聚糖上调mannan-bindinglectinserineprotease1masp1甘露聚糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶1上调mannan-bindinglectinserineprotease2masp2甘露聚糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶2上调plasmakallikreinklkb1血浆激肽释放酶上调plasmaproteasec1inhibitorserping1血浆蛋白酶c1抑制剂上调proteoglycan4prg4蛋白聚糖4上调serumparaoxonase/arylesterase1pon1血清对氧磷酶/芳酯酶1上调vitamink-dependentproteinspros1维生素k依赖的蛋白质s上调vonwillebrandfactorvwf血管性血友病因子下调实施例2采集妊娠时间为24-28周待测目标2的血清样本，采用高通量蛋白质组学方法对妊娠期糖尿病患者血清和健康对照血清进行比较分析。结果得到：与健康孕妇的血清相比，在妊娠期糖尿病患者血清中获得了血清差异蛋白3个，其中1个蛋白表达上调，2个蛋白表达下调，详见下表2。表2待测目标2与健康孕妇妊娠中期(24-28周）血清差异蛋白对照表蛋白英文名基因名蛋白中文名表达变化alpha-1-antitrypsinserpina1α1抗胰蛋白酶下调insulin-likegrowthfactor-bindingproteincomplexacidlabilesubunitigfals胰岛素样生长因子结合蛋白复合物酸不稳定亚基下调plasmakallikreinklkb1血浆激肽释放酶上调实施例3采集妊娠时间为24-28周待测目标3的血清样本，采用酶联免疫和蛋白芯片技术对妊娠期糖尿病患者血清和健康对照血清进行比较分析。结果得到：与健康孕妇的血清相比，在妊娠期糖尿病患者血清中获得了血清差异蛋白4个，其中3个蛋白表达上调，1个蛋白表达下调，详见下表3。表3待测目标3与健康孕妇妊娠中期(24-28周）血清差异蛋白对照表蛋白英文名基因名蛋白中文名表达变化insulin-likegrowthfactor-bindingproteincomplexacidlabilesubunitigfals胰岛素样生长因子结合蛋白复合物酸不稳定亚基下调lumicanlum基膜聚糖上调mannan-bindinglectinserineprotease1masp1甘露聚糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶1上调mannan-bindinglectinserineprotease2masp2甘露聚糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶2上调实施例4采集妊娠时间为24-28周待测目标4的血清样本，采用高通量蛋白质组学方法对妊娠期糖尿病患者血清和健康对照血清进行比较分析。结果得到：与健康孕妇的血清相比，在妊娠期糖尿病患者血清中获得了血清差异蛋白5个，其中3个蛋白表达上调，2个蛋白表达下调，详见下表4。表4待测目标4与健康孕妇妊娠中期(24-28周）血清差异蛋白对照表蛋白英文名基因名蛋白中文名表达变化fibrinogenalphachainfga血纤维蛋白α链上调fibrinogenbetachainfgb血纤维蛋白α链上调fibrinogengammachainfgg血纤维蛋白α链上调gelsolingsn凝溶胶蛋白下调hemoglobinsubunitbetahbb血红蛋白β亚基下调实施例5采集妊娠时间为24-28周待测目标5的血清样本，采用高通量蛋白质组学方法和蛋白芯片技术对妊娠期糖尿病患者血清和健康对照血清进行比较分析。结果得到：与健康孕妇的血清相比，在妊娠期糖尿病患者血清中获得了血清差异蛋白6个，6个蛋白均为表达上调，详见下表5。表5待测目标5与健康孕妇妊娠中期(24-28周）血清差异蛋白对照表蛋白英文名基因名蛋白中文名表达变化apolipoproteinc-iiiapoc3载脂蛋白c-iii上调apolipoproteineapoe载脂蛋白e上调coagulationfactorixf9凝血因子9上调coagulationfactorxf10凝血因子10上调complementc1rsubcomponentc1r补体c1r亚组分上调complementc1ssubcomponentc1s补体c1s亚组分上调实施例6采集妊娠时间为24-28周待测目标6的血清样本，采用高通量蛋白质组学方法对妊娠期糖尿病患者血清和健康对照血清进行比较分析。结果得到：与健康孕妇的血清相比，在妊娠期糖尿病患者血清中获得了血清差异蛋白7个，其中4个蛋白表达上调，3个蛋白表达下调，详见下表6。表6待测目标6与健康孕妇妊娠中期(24-28周）血清差异蛋白对照表蛋白英文名基因名蛋白中文名表达变化coagulationfactorixf9凝血因子9上调coagulationfactorxf10凝血因子10上调complementc1rsubcomponentc1r补体c1r亚组分上调complementc1ssubcomponentc1s补体c1s亚组分上调complementc5c5补体c5下调complementcomponentc6c6补体c6下调complementcomponentc9c9补体c9下调实施例7采集妊娠时间为24-28周待测目标7的血清样本，采用高通量蛋白质组学方法、酶联免疫技术和蛋白芯片技术对妊娠期糖尿病患者血清和健康对照血清进行比较分析。结果得到：与健康孕妇的血清相比，在妊娠期糖尿病患者血清中获得了血清差异蛋白17个，其中12个蛋白表达上调，5个蛋白表达下调，详见下表7。表7待测目标7与健康孕妇妊娠中期（24-28周）血清差异蛋白对照表 蛋白英文名基因名蛋白中文名表达变化alpha-1-antitrypsinserpina1α1抗胰蛋白酶下调apolipoproteinc-iiiapoc3载脂蛋白c-iii上调complementc1rsubcomponentc1r补体c1r亚组分上调complementc5c5补体c5下调c-reactiveproteincrpc反应蛋白上调fibrinogenalphachainfga血纤维蛋白α链上调fibrinogenbetachainfgb血纤维蛋白α链上调fibrinogengammachainfgg血纤维蛋白α链上调hemoglobinsubunitbetahbb血红蛋白β亚基下调insulin-likegrowthfactor-bindingproteincomplexacidlabilesubunitigfals胰岛素样生长因子结合蛋白复合物酸不稳定亚基下调lumicanlum基膜聚糖上调mannan-bindinglectinserineprotease1masp1甘露聚糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶1上调mannan-bindinglectinserineprotease2masp2甘露聚糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶2上调plasmakallikreinklkb1血浆激肽释放酶上调plasmaproteasec1inhibitorserping1血浆蛋白酶c1抑制剂上调vitamink-dependentproteinspros1维生素k依赖的蛋白质s上调 vonwillebrandfactorvwf血管性血友病因子下调实施例8采集妊娠时间为24-28周待测目标8的血清样本，采用高通量蛋白质组学方法对妊娠期糖尿病患者血清和健康对照血清进行比较分析。结果得到：与健康孕妇的血清相比，在妊娠期糖尿病患者血清中获得了血清差异蛋白15个，其中10个蛋白表达上调，5个蛋白表达下调，详见下表8。表8待测目标8与健康孕妇妊娠中期(24-28周）血清差异蛋白对照表蛋白英文名基因名蛋白中文名表达变化complementc5c5补体c5下调complementcomponentc6c6补体c6下调complementcomponentc9c9补体c9下调c-reactiveproteincrpc反应蛋白上调fibrinogenalphachainfga血纤维蛋白α链上调fibrinogenbetachainfgb血纤维蛋白α链上调fibrinogengammachainfgg血纤维蛋白α链上调gelsolingsn凝溶胶蛋白下调mannan-bindinglectinserineprotease2masp2甘露聚糖结合凝集素丝氨酸蛋白酶2上调plasmakallikreinklkb1血浆激肽释放酶上调plasmaproteasec1inhibitorserping1血浆蛋白酶c1抑制剂上调proteoglycan4prg4蛋白聚糖4上调serumparaoxonase/arylesterase1pon1血清对氧磷酶/芳酯酶1上调vitamink-dependentproteinspros1维生素k依赖的蛋白质s上调vonwillebrandfactorvwf血管性血友病因子下调综上所述，本发明提供了一种妊娠期糖尿病的妊娠中期诊断标志物及其检测方法，采用高通量蛋白质组学方法、酶联免疫技术或蛋白芯片技术中的一种或几种，确定妊娠期糖尿病的妊娠中期诊断标志物血清差异蛋白，所述血清差异蛋白包括α1抗胰蛋白酶、载脂蛋白c-iii、载脂蛋白e、凝血因子9、凝血因子10、补体c1r亚组分等26种蛋白；通过确定检测到的血清差异蛋白的浓度变化即可对孕妇在妊娠24-28周时是否患有妊娠期糖尿病进行诊断，该标志物对妊娠期糖尿病诊断准确性高，且检测方法操作简单、快速。应当理解的是，本发明的应用不限于上述举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。当前第1页12