本发明涉及生物医药
技术领域：
，具体的说，涉及一种间接抗人球蛋白试验加速增强剂及其制备方法和应用，间接抗人球蛋白试验加速增强剂可以加快配血或抗体筛查的速度。
背景技术：
：abo血型系统是landsteiner于1900年发现的人类第一个血型系统，随着人类对血型的进一步研究，至今发现人类血型系统已有36种，血型抗原有300多个。不相容的输血可能会导致严重溶血反应，甚至休克以致死亡。目前，临床常规检测的abo血型和rh血型是2种最重要的血型系统，但是其余34种血型系统如果不匹配，仍有可能发生抗原抗体引起的输血不良反应。因此，交叉配血在输血前显得尤为重要，可以减少输血不良反应的发生。目前，传统的抗球蛋白试管交叉配血法中，主侧是加入患者的血浆和献血员的红细胞，次侧是加入献血员的血浆和患者的红细胞，在37℃水浴中用生理盐水洗涤三次，最后加入抗球蛋白试剂，离心后观察结果。该方法的弱点是孵育时间长、反应灵敏度低，需要37℃环境下孵育30至60分钟不等，而且可能会漏检效价较弱的抗体，从而导致严重的输血不良反应。当患者急需用血时，这个方法长时间的操作可能会产生较大的危险。1984年yveslapierre发明了微柱凝胶技术，1988年瑞士达亚美基于微柱凝胶技术和抗人球蛋白试验方法相结合推出了微柱凝胶抗人球蛋白试剂卡，近年得到广泛应用。微柱凝胶抗人球蛋白试剂卡(liss/coombs)相对于传统试管法的抗人球蛋白试验，步骤简便、使用标本量小、可以自动化操作、适于大规模标本的检测。国内也有很多厂家推出了微柱凝胶抗人球蛋白试剂卡。相关专利文献例如cn101718785b、cn101718786b、cn102692510a、cn106950385a等。无论传统试管法还是微柱凝胶法，还是存在孵育时间长、反应灵敏度低的问题，有必要开发一种加速增强剂添加到该试验中，使得反应孵育时间缩短，检测灵敏度提升，从而在较短时间内检出红细胞不完全抗体，保障患者输血安全。技术实现要素：本发明的目的是提供一种反应孵育时间短、检测灵敏度高、患者输血安全的间接抗人球蛋白试验加速增强剂。本发明的另一个目的是提供上述间接抗人球蛋白试验加速增强剂的制备方法。本发明的第三方面是提供了所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂的具体应用。为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：本发明的一个方面提供了一种间接抗人球蛋白试验加速增强剂，包括浓度为1～60％的聚乙二醇(peg)溶液和浓度为0.1～5％的凝聚胺(polybrene)溶液，所述聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为(10～20):1。优选的，所述聚乙二醇(peg)溶液的浓度为1～10％，所述凝聚胺(polybrene)溶液的浓度为0.1～3％，更优选的，所述聚乙二醇(peg)溶液的浓度为3～5％，所述凝聚胺(polybrene)溶液的浓度为1～3％。优选的，所述聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为(12～15):1。所述聚乙二醇的分子量为2000～8000，优选4000～6000。当聚乙二醇的分子量小于2000时，经过研究表明无法增强间接抗人球蛋白试验；当聚乙二醇的分子量大于8000时，经过研究表明会造成红细胞的假聚集，造成间接抗人球蛋白试验的假阳性。所述聚乙二醇(peg)溶液是将聚乙二醇粉剂溶于蒸馏水中配成。所述凝聚胺(polybrene)溶液是将凝聚胺(polybrene)粉剂溶于蒸馏水中配成。本发明在前期试验中，也选择现有技术中的低离子强度溶液(liss)、牛血清白蛋白、聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶、交联葡聚糖g50等，与本发明所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂相比，效果明显较差，无法明显增强间接抗人球蛋白试验。优选的，本发明的间接抗人球蛋白试验加速增强剂中，再加入liss溶液和/或牛血清白蛋白。所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂中，所述liss溶液与凝聚胺溶液的体积比为(5～10):1；所述牛血清白蛋白与凝聚胺溶液的体积比为(5～10):1。本发明的间接抗人球蛋白试验加速增强剂，ph值为6.5-7。本发明的另一个方面提供了一种所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂的制备方法，包括以下步骤：将聚乙二醇粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为1～60％的聚乙二醇(peg)溶液，将凝聚胺(polybrene)粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为0.1～5％的凝聚胺(polybrene)溶液，然后将凝聚胺溶液加入到聚乙二醇溶液中，聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为(10～20):1，调节溶液的ph值为6.5-7，获得所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂。所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂溶于蒸馏水中的结果明显优于磷酸盐缓冲溶液(pbs)及生理盐水。本发明的另一个方面提供了一种所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂的制备方法，包括以下步骤：将聚乙二醇粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为1～60％的聚乙二醇(peg)溶液，将凝聚胺(polybrene)粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为0.1～5％的凝聚胺(polybrene)溶液，然后将凝聚胺溶液加入到聚乙二醇溶液中，聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为(10～20):1，再加入liss溶液，liss溶液与凝聚胺溶液的体积比为(5～10):1；或再加入牛血清白蛋白，牛血清白蛋白与凝聚胺溶液的体积比为(5～10):1；或同时加入liss溶液和牛血清白蛋白，liss溶液与凝聚胺溶液的体积比为(5～10):1，牛血清白蛋白与凝聚胺溶液的体积比为(5～10):1；调节溶液的ph值为6.5-7，获得所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂。本发明的第三方面是提供了上述间接抗人球蛋白试验加速增强剂的具体应用。其一是在传统试管法间接抗人球蛋白试验中的应用。具体的，本发明提供了一种间接抗人球蛋白加速配血的试验方法，在该试验方法中加入上述的间接抗人球蛋白试验加速增强剂，该试验方法包括以下步骤：将红细胞中加入生理盐水清洗后混合均匀，离心分离去除上清液，加入生理盐水配置成红细胞悬液，然后加入血浆或血清混合均匀，最后加入间接抗人球蛋白试验加速增强剂混合均匀，孵育，加入生理盐水离心分离，轻摇试管观察结果，根据红细胞凝集或分散的状况判断结果。所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂，包括浓度为1～60％的聚乙二醇(peg)溶液和浓度为0.1～5％的凝聚胺(polybrene)溶液，所述聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为(10～20):1。所述聚乙二醇的分子量为2000～8000，优选4000～6000。所述聚乙二醇(peg)溶液是将聚乙二醇粉剂溶于蒸馏水中配成。所述凝聚胺(polybrene)溶液是将凝聚胺(polybrene)粉剂溶于蒸馏水中配成。优选的，所述聚乙二醇(peg)溶液的浓度为1～10％，所述凝聚胺(polybrene)溶液的浓度为0.1～3％，更优选的，所述聚乙二醇(peg)溶液的浓度为3～5％，所述凝聚胺(polybrene)溶液的浓度为1～3％。优选的，所述聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为(12～15):1。优选的，本发明的间接抗人球蛋白试验加速增强剂中，再加入liss溶液和/或牛血清白蛋白。所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂中，所述liss溶液与凝聚胺溶液的体积比为(5～10):1；所述牛血清白蛋白与凝聚胺溶液的体积比为(5～10):1。本发明的间接抗人球蛋白试验加速增强剂，ph值为6.5-7。所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂的制备方法，包括以下步骤：将聚乙二醇粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为1～60％的聚乙二醇(peg)溶液，将凝聚胺(polybrene)粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为0.1～5％的凝聚胺(polybrene)溶液，然后将凝聚胺溶液加入到聚乙二醇溶液中，聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为(10～20):1，调节溶液的ph值为6.5-7，获得所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂；或者，将聚乙二醇粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为1～60％的聚乙二醇(peg)溶液，将凝聚胺(polybrene)粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为0.1～5％的凝聚胺(polybrene)溶液，然后将凝聚胺溶液加入到聚乙二醇溶液中，聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为(10～20):1，再加入liss溶液，liss溶液与凝聚胺溶液的体积比为(5～10):1；或再加入牛血清白蛋白，牛血清白蛋白与凝聚胺溶液的体积比为(5～10):1；或同时加入liss溶液和牛血清白蛋白，liss溶液与凝聚胺溶液的体积比为(5～10):1，牛血清白蛋白与凝聚胺溶液的体积比为(5～10):1；调节溶液的ph值为6.5-7，获得所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂。所述孵育是在温度为37℃水浴中孵育1～10min，优选5min。所述离心分离的转速为1000～3500rpm。其二是在微柱凝胶法间接抗人球蛋白试验中的应用。具体的，本发明提供了一种微柱凝胶抗人球蛋白试剂卡，所述试剂卡上具有至少6个微柱凝胶管，所述微柱凝胶管中具有凝胶悬浮介质，所述凝胶悬浮介质含有所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂。所述试剂卡上具有6个、8个微柱凝胶管。优选的，所述凝胶悬浮介质的配方如下：磷酸二氢钾0.15-0.3g/l；磷酸氢二钠0.35-0.65g/l；氯化钠1.8-2.0g/l；本发明的间接抗人球蛋白试验加速增强剂3-5％；聚乙二醇0.08-0.15％；叠氮钠0.3％；以上试剂用纯化水溶解，调整ph值为6.6-7。具体的，本发明提供了一种微柱凝胶抗人球蛋白交叉配血卡，所述试剂卡上至少具有6个微柱凝胶管，所述微柱凝胶管中具有凝胶悬浮介质，所述凝胶悬浮介质含有所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂。所述试剂卡上具有6个、8个微柱凝胶管。优选的，所述凝胶悬浮介质的配方如下：磷酸二氢钾0.15-0.3g/l；磷酸氢二钠0.35-0.65g/l；氯化钠1.8-2.0g/l；本发明的间接抗人球蛋白试验加速增强剂3-5％；聚乙二醇0.08-0.15％；叠氮钠0.3％；以上试剂用纯化水溶解，调整ph值为6.6-7。具体的，本发明提供了一种红细胞不规则抗体检测试剂盒，所述试剂盒包含分离腔，分离腔的反应孔内包被有所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂。由于采用上述技术方案，本发明具有以下优点和有益效果：本发明提供的一种间接抗人球蛋白试验加速增强剂，加速增强输血前交叉配合试验和/或红细胞不规则抗体筛查试验，该试剂的反应孵育时间短、灵敏度高、准确性强，可以快速检出各种较弱的红细胞不规则抗体，适用于急诊快速交叉配血和红细胞不规则抗体筛查，第一时间为患者找到匹配的血液，减少不相容输血导致的各种溶血性输血不良反应，给予患者较安全的输血品质。本发明提供的一种间接抗人球蛋白试验加速增强剂中，聚乙二醇和凝聚胺联合作用可以增强反应物之间碰撞频率和免疫复合物的形成速度，填充空间，增加分子体积，可提高红细胞抗原抗体反应的敏感性。本发明提供的一种间接抗人球蛋白试验加速增强剂，可以用来加速各种血型系统的抗原抗体反应，使传统的抗球蛋白实验孵育时间从30至60分钟缩短到5分钟；可以用来增强各种血型系统的抗原抗体反应，使传统的抗球蛋白实验的阳性结果增强1至2个级别的反应；可以用来检测各种血型系统的抗原抗体反应，对各种血型系统的抗原抗体反应均无抑制作用，可以全面检测交叉配血。本发明提供的一种间接抗人球蛋白试验加速增强剂，与多种红细胞悬液、生理盐水进行抗球蛋白空白试验，均无假阳性反应；可以用来加速增强各种血型系统的抗原抗体反应，与低离子强度溶液(liss)、牛血清白蛋白增强剂比较，具有明显优势。本发明提供的一种间接抗人球蛋白试验加速增强剂，不仅可以加快抗原抗体反应，还具有明显的增强效果，增强较弱不完全抗体的检出率，如效价较弱的抗mur抗体、抗dia抗体，为患者找到最佳匹配的血液，减少输血不良反应。附图说明图1是1:16倍稀释抗d抗体后的实验结果示意图。图2是1:128倍稀释抗d抗体后的实验结果示意图。图3是1:512倍稀释抗d抗体后的实验结果示意图。图1～3中，1表示实验组，2表示对照组。图4是使用加速增强剂的间接抗人球蛋白试验结果的示意图；其中：11表示效价为1:16的试管，12表示效价为1:32的试管，13表示效价为1:64的试管，14表示效价为1:128的试管，15表示效价为1:256的试管，16表示效价为1:512的试管。图5是传统间接抗人球蛋白试验结果的示意图；其中：21表示效价为1:16的试管，22表示效价为1:32的试管，23表示效价为1:64的试管，24表示效价为1:128的试管，25表示效价为1:256的试管，26表示效价为1:512的试管。图6是各种加速增强试剂的间接抗人球蛋白试验凝胶微柱卡法比较的示意图；其中：31表示对照组的微孔，32表示加入本发明制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂的微孔，33表示加入liss液的微孔，34表示加入牛血清白蛋白的微孔。图7中a是图4对应的试验结果照片，图7中b是图5对应的试验结果照片，图7中c是图6对应的试验结果照片。具体实施方式为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。本发明实施例所用的聚乙二醇(peg)购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，规格为500克/瓶。本发明实施例所用的凝聚胺(polybrene)购自sigma公司，规格为5克/瓶。本发明实施例所用的标准抗d(igg)抗体试剂购自上海血液生物医药有限责任公司，规格为10毫升/瓶。本发明实施例所用的liss液购自珠海贝索生物技术有限公司，规格为250毫升/瓶。本发明实施例所用的牛血清白蛋白购自ce-immundiagnostikagmbh，eschelbronn，germany，规格为10毫升/瓶。本发明实施例所用的抗人球蛋白试剂购自上海血液生物医药有限责任公司，规格为10毫升/瓶。本发明实施例所用的仪器：5702r型低温离心机(购自德国eppendorf公司)、ka-2200免疫血液学用离心机(购自日本kubota公司)、cx31生物显微镜(购自日本奥林巴斯公司)、微量移液器(购自法国gilson公司)、hh.s11-2-s型恒温水浴箱(购自上海跃进医疗器械有限公司)、抗人球蛋白检测卡(购自美国bio-rad公司)。本发明实施例的间接抗人球蛋白试验加速增强剂，在使用时按照制备方法步骤配置，不使用时，按照所包含的成分分别存放即可。实施例1本发明提供的一种间接抗人球蛋白试验加速增强剂，包括浓度为5％的、分子量为2000的聚乙二醇(peg)溶液和浓度为0.5％的凝聚胺(polybrene)溶液，所述聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为10:1。所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂的制备方法，包括以下步骤：将聚乙二醇粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为5％的聚乙二醇(peg)溶液，将凝聚胺(polybrene)粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为0.5％的凝聚胺(polybrene)溶液，然后将凝聚胺溶液加入到聚乙二醇溶液中，聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为10:1，用盐酸或氢氧化钠来调节溶液的ph值为7，获得所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂。所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂溶于蒸馏水中的结果明显优于磷酸盐缓冲溶液(pbs)及生理盐水。实施例2本发明提供的一种间接抗人球蛋白试验加速增强剂，包括浓度为20％的、分子量为8000的聚乙二醇(peg)溶液和浓度为2.5％的凝聚胺(polybrene)溶液，所述聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为20:1。所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂的制备方法，包括以下步骤：将聚乙二醇粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为20％的聚乙二醇(peg)溶液，将凝聚胺(polybrene)粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为2.5％的凝聚胺(polybrene)溶液，然后将凝聚胺溶液加入到聚乙二醇溶液中，聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为20:1，用盐酸或氢氧化钠来调节溶液的ph值为7，获得所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂。实施例3本发明提供的一种间接抗人球蛋白试验加速增强剂，包括浓度为1％的、分子量为5000的聚乙二醇(peg)溶液和浓度为0.1％的凝聚胺(polybrene)溶液，所述聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为15:1。所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂的制备方法，包括以下步骤：将聚乙二醇粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为1％的聚乙二醇(peg)溶液，将凝聚胺(polybrene)粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为0.1％的凝聚胺(polybrene)溶液，然后将凝聚胺溶液加入到聚乙二醇溶液中，聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为15:1，用盐酸或氢氧化钠来调节溶液的ph值为7，获得所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂。实施例4本发明提供的一种间接抗人球蛋白试验加速增强剂，包括浓度为60％的、分子量为4000的聚乙二醇(peg)溶液和浓度为5％的凝聚胺(polybrene)溶液，所述聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为12:1。所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂的制备方法，包括以下步骤：将聚乙二醇粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为60％的聚乙二醇(peg)溶液，将凝聚胺(polybrene)粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为5％的凝聚胺(polybrene)溶液，然后将凝聚胺溶液加入到聚乙二醇溶液中，聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为12:1，用盐酸或氢氧化钠来调节溶液的ph值为6.5-6.8，获得所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂。实施例5本发明提供的一种间接抗人球蛋白试验加速增强剂，包括浓度为30％的、分子量为6000的聚乙二醇(peg)溶液和浓度为4％的凝聚胺(polybrene)溶液，所述聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为16:1。所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂的制备方法，包括以下步骤：将聚乙二醇粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为30％的聚乙二醇(peg)溶液，将凝聚胺(polybrene)粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为4％的凝聚胺(polybrene)溶液，然后将凝聚胺溶液加入到聚乙二醇溶液中，聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为16:1，用盐酸或氢氧化钠来调节溶液的ph值为6.5-6.8，获得所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂。实施例6本发明提供的一种间接抗人球蛋白试验加速增强剂，包括浓度为10％的、分子量为5500的聚乙二醇(peg)溶液和浓度为1％的凝聚胺(polybrene)溶液，所述聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为18:1。所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂的制备方法，包括以下步骤：将聚乙二醇粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为10％的聚乙二醇(peg)溶液，将凝聚胺(polybrene)粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为1％的凝聚胺(polybrene)溶液，然后将凝聚胺溶液加入到聚乙二醇溶液中，聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为18:1，用盐酸或氢氧化钠来调节溶液的ph值为7，获得所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂。实施例7间接抗人球蛋白试验实施步骤：1.以标准抗d(igg)抗体试剂为例，用ab型血浆稀释成相应效价，抗体强度由强到弱分布，实验组和对照组六个试管中分别为1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512；每个试管加入相应抗体100微升。2.取献血者o型rhd阳性红细胞悬液用生理盐水洗涤1-2次，分别配成约3％浓度的悬浮红细胞，分别取50微升加入到步骤1的每个试管中。3.在实验组六个试管中分别加入本发明实施例3制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂1ml(包括浓度为1％的、分子量为5000的聚乙二醇(peg)溶液和浓度为0.1％的凝聚胺(polybrene)溶液，所述聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为15:1)，孵育5分钟；4.对照组为传统抗球蛋白试验法，不加入本发明实施例3制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂，孵育30分钟；5.实验组和对照组分别用生理盐水洗涤3次，每次离心1分钟(转速为3400rpm)；6.最后一次离心后弃去上清液，试管在吸水纸上倒扣干；7.实验组和对照组中分别加入50微升抗人球蛋白试剂，混匀；8.离心15s(转速为3400rpm)，用肉眼或借助光镜观察结果，并按程度记录，结果如表1及图1～3所示，图1是1:16倍稀释抗d抗体后的实验结果示意图，图2是1:128倍稀释抗d抗体后的实验结果示意图，图3是1:512倍稀释抗d抗体后的实验结果示意图，图1～3中，1表示实验组，2表示对照组。表1用标准抗d抗体进行间接抗人球蛋白试验法比较1:161:321:641:1281:2561:512实验组3+2+s2+s2+1+1+对照组2+2+2+1++/-+/-从图1～3和表1的数据可知，实验组中加入本发明实施例3制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂后，间接抗人球蛋白试验灵敏度明显增强，孵育时间明显缩短。实施例8实验组：使用加速增强试剂的间接抗人球蛋白试验交叉配血试管法实施步骤：1.患者与献血者红细胞各用生理盐水洗涤1-2次，分别配成2％-5％悬浮红细胞。2.取试管3支，分别标注为主侧管、次侧管与自身对照管，主侧管中加入患者血浆2滴，加入献血者2％-5％悬浮红细胞1滴；次侧管中加入献血者血浆2滴，加入患者2％-5％悬浮红细胞1滴；自身对照管中加入患者血浆2滴与患者2％-5％悬浮红细胞1滴。3.在上述3支试管中分别加入本发明实施例3制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂1ml(包括浓度为1％的、分子量为5000的聚乙二醇(peg)溶液和浓度为0.1％的凝聚胺(polybrene)溶液，所述聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为15:1)。4.在温度为37℃的条件下孵育5分钟。5.3支试管分别用生理盐水洗涤3次，每次离心1分钟(转速为3400rpm)。6.最后一次离心后弃去上清液，3支试管在吸水纸上倒扣干。7.3支试管中分别加入2滴抗人球蛋白试剂，混匀。8.离心15s(转速为3400rpm)，用肉眼或借助光镜观察凝集，并按程度记录结果。在1800例交叉配血的检测中，利用本发明制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂进行增强加速反应，有1780例标本交叉配血阴性，有20例交叉配血阳性，无假阳性结果。在检测时间方面，利用本发明制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂进行增强加速反应，在37℃孵育5分钟，与传统方法的孵育30至60分钟的时间进行比较，大大缩短了试验时间，为抢救患者的输血赢得了宝贵时间。对照组：传统间接抗人球蛋白试验交叉配血试管法：1.患者与献血者红细胞各用生理盐水洗涤1-2次，分别配成2％-5％悬浮红细胞。2.取试管3支，分别标注为主侧管、次侧管与自身对照管，主侧管中加入患者血浆2滴，加入献血者2％-5％悬浮红细胞1滴；次侧管中加入献血者血浆2滴，加入患者2％-5％悬浮红细胞1滴；自身对照管中加入患者血浆2滴与患者2％-5％悬浮红细胞1滴。3.在温度为37℃的条件下孵育30分钟。4.3支试管分别用生理盐水洗涤3次，每次离心1分钟(转速为3400rpm)。5.最后一次离心后弃去上清液，3支试管在吸水纸上倒扣干。6.3支试管中分别加入2滴抗人球蛋白试剂，混匀。7.离心15s(转速为3400rpm)，用肉眼或借助光镜观察凝集，并按程度记录结果。在1800例交叉配血的检测中，有1782例标本交叉配血阴性，有18例交叉配血阳性，无假阳性结果，有2例标本经鉴定为假阴性结果。实验组和对照组的结果如表2所示：表21800例交叉配血情况统计表阴性阳性实验组178020对照组178218实施例9使用本发明制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂的间接抗人球蛋白试验凝胶微柱卡法实施步骤：1.以标准抗d(igg)抗体试剂为例，用ab型血浆稀释成相应效价，从1:16到1:512抗体强度由强到弱分布，实验组和对照组六个试管中分别加入25微升抗体溶液。2.取献血者o型rhd阳性红细胞悬液用生理盐水洗涤1-2次，配成1％悬浮红细胞，步骤1的每个试管中加入50微升红细胞悬液。3.在实验组的试管中加入本发明实施例4制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂5ul，孵育5分钟(浓度为60％的、分子量为4000的聚乙二醇(peg)溶液和浓度为5％的凝聚胺(polybrene)溶液，所述聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为12:1。)。4.对照组的试管中不加入本发明实施例4制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂，是传统间接抗人球蛋白试验，孵育15分钟。5.离心10分钟(转速为1050rpm)，用肉眼观察凝集，并按程度记录，结果如表3及图4和图5所示，图4是使用加速增强剂的间接抗人球蛋白试验结果的示意图(实验组)；其中：11表示效价为1:16的试管，12表示效价为1:32的试管，13表示效价为1:64的试管，14表示效价为1:128的试管，15表示效价为1:256的试管，16表示效价为1:512的试管；图5是传统间接抗人球蛋白试验结果的示意图(对照组)；其中：21表示效价为1:16的试管，22表示效价为1:32的试管，23表示效价为1:64的试管，24表示效价为1:128的试管，25表示效价为1:256的试管，26表示效价为1:512的试管。表3用标准抗d抗体进行间接抗人球蛋白试验法比较从图4和图5及表3的数据可知，实验组中加入本发明实施例4制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂后，间接抗人球蛋白试验灵敏度明显增强，孵育时间明显缩短。实施例10各种加速增强试剂的间接抗人球蛋白试验凝胶微柱卡法比较：1.以标准抗d(igg)抗体试剂为例，用ab型血浆稀释成相应效价1:256，选择抗人球蛋白检测卡上的4个微孔，每个微孔加入25微升抗体溶液。2.取献血者o型rhd阳性红细胞悬液用生理盐水洗涤1-2次，配成1％悬浮红细胞，步骤1的四个微孔中分别加入50微升红细胞悬液。3.在步骤2的三个微孔中加入本发明实施例4制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂5ul(浓度为60％的、分子量为4000的聚乙二醇(peg)溶液和浓度为5％的凝聚胺(polybrene)溶液，所述聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为12:1)、liss液5ul、牛血清白蛋白5ul，孵育5分钟。4.在步骤2的剩余的一个微孔中不加入本发明实施例4制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂，是传统的抗人球蛋白试验，孵育5分钟。5.离心10分钟(转速为1050rpm)，用肉眼观察凝集，并按程度记录，结果如表4及图6所示，图6是各种加速增强试剂的间接抗人球蛋白试验凝胶微柱卡法比较的示意图，其中：31表示对照组的微孔，32表示加入本发明制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂的微孔，33表示加入liss液的微孔，34表示加入牛血清白蛋白的微孔。结果表明，使用本发明实施例4制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂效果最好。表4各种加速增强试剂的间接抗人球蛋白试验凝胶微柱卡法比较实施例11本发明提供的一种间接抗人球蛋白试验加速增强剂，包括浓度为3％的、分子量为4500的聚乙二醇(peg)溶液和浓度为1％的凝聚胺(polybrene)溶液，所述聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为12:1，liss溶液，liss溶液与凝聚胺溶液的体积比为6:1；所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂的制备方法，包括以下步骤：将聚乙二醇粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为3％的聚乙二醇(peg)溶液，将凝聚胺(polybrene)粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为1％的凝聚胺(polybrene)溶液，然后将凝聚胺溶液加入到聚乙二醇溶液中，聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为12:1，再加入liss溶液，liss溶液与凝聚胺溶液的体积比为6:1；用盐酸或氢氧化钠来调节溶液的ph值为7，获得所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂。实施例12本发明提供的一种间接抗人球蛋白试验加速增强剂，包括浓度为4％的、分子量为4800的聚乙二醇(peg)溶液和浓度为2％的凝聚胺(polybrene)溶液，所述聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为13:1，牛血清白蛋白，牛血清白蛋白与凝聚胺溶液的体积比为5:1；liss溶液，liss溶液与凝聚胺溶液的体积比为8:1；所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂的制备方法，包括以下步骤：将聚乙二醇粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为4％的聚乙二醇(peg)溶液，将凝聚胺(polybrene)粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为2％的凝聚胺(polybrene)溶液，然后将凝聚胺溶液加入到聚乙二醇溶液中，聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为13:1，再加入liss溶液，liss溶液与凝聚胺溶液的体积比为8:1；再加入牛血清白蛋白，牛血清白蛋白与凝聚胺溶液的体积比为5:1；用盐酸或氢氧化钠来调节溶液的ph值为7，获得所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂。实施例13本发明提供的一种间接抗人球蛋白试验加速增强剂，包括浓度为5％的、分子量为5800的聚乙二醇(peg)溶液和浓度为3％的凝聚胺(polybrene)溶液，所述聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为14:1，牛血清白蛋白，牛血清白蛋白与凝聚胺溶液的体积比为10:1；所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂的制备方法，包括以下步骤：将聚乙二醇粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为5％的聚乙二醇(peg)溶液，将凝聚胺(polybrene)粉剂溶于蒸馏水中配成浓度为3％的凝聚胺(polybrene)溶液，然后将凝聚胺溶液加入到聚乙二醇溶液中，聚乙二醇溶液和凝聚胺溶液的体积比为14:1，再加入牛血清白蛋白，牛血清白蛋白与凝聚胺溶液的体积比为10:1；用盐酸或氢氧化钠来调节溶液的ph值为7，获得所述间接抗人球蛋白试验加速增强剂。实施例14本发明实施例提供了一种微柱凝胶抗人球蛋白试剂卡，所述试剂卡上具有至少6个微柱凝胶管，本实施例选择6个，所述微柱凝胶管中具有凝胶悬浮介质，所述凝胶悬浮介质含有实施例1～6或实施例11～13所述的任一个间接抗人球蛋白试验加速增强剂。所述凝胶悬浮介质的配方如下：磷酸二氢钾0.15-0.3g/l、磷酸氢二钠0.35-0.65g/l、氯化钠1.8-2.0g/l、此处选择实施例3制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂3-5％、聚乙二醇0.08-0.15％、叠氮钠0.3％；以上试剂用纯化水溶解，调整ph值为6.6-7。实施例15本发明实施例提供了一种微柱凝胶抗人球蛋白交叉配血卡，所述试剂卡上至少具有6个微柱凝胶管，本实施例选择8个，所述微柱凝胶管中具有凝胶悬浮介质，所述凝胶悬浮介质含有实施例1～6或实施例11～13所述的任一个间接抗人球蛋白试验加速增强剂。所述凝胶悬浮介质的配方如下：磷酸二氢钾0.15-0.3g/l、磷酸氢二钠0.35-0.65g/l、氯化钠1.8-2.0g/l、此处选择实施例3制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂3-5％、聚乙二醇0.08-0.15％、叠氮钠0.3％；以上试剂用纯化水溶解，调整ph值为6.6-7。实施例16本发明实施例提供了一种红细胞不规则抗体检测试剂盒，所述试剂盒包含分离腔，分离腔的反应孔内包被有实施例4制备的间接抗人球蛋白试验加速增强剂。以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。当前第1页12