本发明涉及医药发明领域，具体涉及一种用于小叶黄杨药物的检测方法。
背景技术：
：本品为常绿灌木或小乔木，产于陕西、甘肃、湖北、四川、贵州、广西、江西、浙江、安徽、江苏、山东各省区，有部分属于栽培；多生于山谷、溪边、林下。贵州在桐梓、绥阳、湄潭、平坝、贵阳、紫云、平塘、龙里、长顺、雷山、镇远等地分布，常生于海拔700至1500米有山谷林中。本品具有祛风除湿，行气止痛，活血通络。用于风湿痹痛，胸腹气胀，牙痛，疝痛，跌扑伤痛，胸痹心痛。小叶黄杨质量标准原载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)中，为黄杨科植物小叶黄杨Buxussinica(Rehd.etWils.)Cheng及其同属植物的枝叶，质量标准中只含有性状和一般的理化鉴别，因小叶黄杨具有祛风除湿，行气止痛，活血通络。用于风湿痹痛，胸腹气胀，牙痛，疝痛，跌扑伤痛，胸痹心痛。具有保护急性脑缺血和抗病毒作用[1]。是心脑宁胶囊中主要原料之一。根据当地用药习惯和《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)、《中药大辞典》，结合《国家药品标准技术规范》及《贵州省中药、民族药质量标准》编写大纲要求，为了更好的控制药材质量，对《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)所载的小叶黄杨质量标准重新修订。在之前的基础上，取消专属性不强的化学反应鉴别，增加了薄层鉴别和水分、总灰分、浸出物、含量测定等检测项目。技术实现要素：本发明的目的是提供一种用于小叶黄杨药物的检测方法，其检测方法具体内容为：检查性状，薄层色谱法鉴别小叶黄杨，检查水分、总灰分、水溶浸出物、醇溶性浸出物，用高效液相色谱法测定紫丁香苷的含量。所述性状检测方法为本品茎圆柱形，有纵棱，小枝四棱形，全面被短柔毛或外方相对两侧面无毛，灰白色，完整叶片展平后呈阔椭圆形、阔倒卵形、卵状椭圆形或长圆形，长1～3cm，宽0.8～2cm，先端圆或钝，常有小凹口，基部圆或急尖或楔形，叶面光亮，中脉凸出，侧脉明显，叶背中脉平坦或稍凸出，中脉上常密被短线状钟乳体，革质，叶柄长0.1～0.2cm，上面被毛，气微，味苦。所述用薄层色谱法鉴别小叶黄杨的方法为取本品粉末1-5g，置50ml锥形瓶中，加浓氨水4-8ml，摇匀，密闭静置15-45分钟，加入三氯甲烷6-18ml，超声20-40分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液，另取小叶黄杨对照药材3g，同法制成对照药材溶液，再取环维黄杨星D对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液，通则0502照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为10:16:0.4:0.05的乙酸乙酯-甲醇-氨水-水为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，依次喷以改良碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液，晾干，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。优选的，所述用薄层色谱法鉴别小叶黄杨的方法为取本品粉末1g，置50ml锥形瓶中，加浓氨水4ml，摇匀，密闭静置15分钟，加入三氯甲烷6ml，超声20分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液，另取小叶黄杨对照药材3g，同法制成对照药材溶液，再取环维黄杨星D对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液，通则0502照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为10:16:0.4:0.05的乙酸乙酯-甲醇-氨水-水为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，依次喷以改良碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液，晾干，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。进一步优选的，所述用薄层色谱法鉴别小叶黄杨的方法为取本品粉末5g，置50ml锥形瓶中，加浓氨水8ml，摇匀，密闭静置45分钟，加入三氯甲烷18ml，超声40分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液，另取小叶黄杨对照药材3g，同法制成对照药材溶液，再取环维黄杨星D对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液，通则0502照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为10:16:0.4:0.05的乙酸乙酯-甲醇-氨水-水为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，依次喷以改良碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液，晾干，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。更进一步优选的，所述用薄层色谱法鉴别小叶黄杨的方法为取本品粉末3g，置50ml锥形瓶中，加浓氨水6ml，摇匀，密闭静置30分钟，加入三氯甲烷10ml，超声30分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液，另取小叶黄杨对照药材3g，同法制成对照药材溶液，再取环维黄杨星D对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液，通则0502照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为10:16:0.4:0.05的乙酸乙酯-甲醇-氨水-水为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，依次喷以改良碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液，晾干，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。所述水分检查方法为照通则0832水分测定法第二法测定，不得过13.0％，所述总灰分检查方法为照通则2302测定不得过5.0％，所述浸出物检查方法为照通则2201水溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，不得少于5.0％照照通则2201醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，不得少于5.0％。所述紫丁香苷含量测定方法为：含量测定照通则0512高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为17:83的甲醇-0.2％磷酸为流动相；柱温：20℃；检测波长为264nm。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加50％-80％甲醇制成每lml含80μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末0.5-3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50-80％甲醇8-16ml，称定重量，以功率140W、频率42kHz超声处理25-45分钟，放冷，再称定重量，用50-70％％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含紫丁香苷(C17H24O9)不得少于0.015％。优选的，所述紫丁香苷含量测定方法为：含量测定照通则0512高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为17:83的甲醇-0.2％磷酸为流动相；柱温：20℃；检测波长为264nm。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加60-70％甲醇制成每lml含80μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末0.5-3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60-70％甲醇8-16ml，称定重量，以功率140W、频率42kHz超声处理25-45分钟，放冷，再称定重量，用55-65％％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含紫丁香苷(C17H24O9)不得少于0.015％。进一步优选的，所述紫丁香苷含量测定方法为：含量测定照通则0512高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为17:83甲醇-0.2％磷酸为流动相；柱温：20℃；检测波长为264nm。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加70％甲醇制成每lml含80μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇10ml，称定重量，以功率140W，频率42kHz超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含紫丁香苷(C17H24O9)不得少于0.015％。本发明所述的通则指2015年版中国药典第四部通则。本发明具有以下优点：1、本发明是为了更好的检测药材质量，对《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)所载的小叶黄杨质量标准重新修订，在之前的基础上，取消专属性不强的化学反应鉴别，增加了薄层鉴别和水分、总灰分、浸出物、含量测定等的检测项目，以有效的检测小叶黄杨质量，从而保证临床疗效。2、经方法学验证试验，结果表明本方法在不同薄层板、温度、湿度条件下，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱,验证试验表明重现性好、耐用性好。3、按本发明检测方法学验证:紫丁香苷在0.04413～1.7651g范围内线性关系良好,回归方程为：Y＝2608.6X+1.3052，相关系数r2＝1；重复性试验中紫丁香苷的含量，平均含量为0.0667％，RSD值0.30％，表明此紫丁香苷的测定方法具有良好的重复性；加样回收率为101.9％，RSD％为0.72％,所以该方法符合药品质量标准分析方法验证要求,十批样品检测结果平均值为0.021％。具体实施方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例1【性状】本品茎圆柱形，有纵棱，小枝四棱形，全面被短柔毛或外方相对两侧面无毛，灰白色。完整叶片展平后呈阔椭圆形、阔倒卵形、卵状椭圆形或长圆形，长1～3cm，宽0.8～2cm。先端圆或钝，常有小凹口，基部圆或急尖或楔形，叶面光亮，中脉凸出，侧脉明显，叶背中脉平坦或稍凸出，中脉上常密被短线状钟乳体。革质。叶柄长0.1～0.2cm，上面被毛。气微，味苦。【鉴别】取本品粉末3g，置50ml锥形瓶中，加浓氨水6ml，摇匀，密闭静置30分钟，加入三氯甲烷10ml，超声30分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液。另取小叶黄杨对照药材3g，同法制成对照药材溶液。再取环维黄杨星D对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水-水(10:16:0.4:0.05)为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，依次喷以改良碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液，晾干，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。【检查】水分不得过13.0％(通则0832第二法)。总灰分不得过5.0％(通则2302)。【浸出物】水溶性浸出物照水溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定，不得少于5.0％。醇溶性浸出物照醇溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定，用75％乙醇作溶剂，不得少于5.0％。【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2％磷酸(17:83)为流动相；柱温：20℃；检测波长为264nm。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加70％甲醇制成每lml含80μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇10ml，称定重量，超声处理(功率140W，频率42kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含紫丁香苷(C17H24O9)不得少于0.015％。饮片【炮制】除去杂质，切段(3-5cm)。本品呈不规则段，茎圆柱形，有纵棱，小枝四棱形，全面被短柔毛或外方相对两侧面无毛，灰白色。完整叶片展平后呈阔椭圆形、阔倒卵形、卵状椭圆形或长圆形，长1～3cm，宽0.8～2cm。先端圆或钝，常有小凹口，基部圆或急尖或楔形，叶面光亮，中脉凸出，侧脉明显，叶背中脉平坦或稍凸出，中脉上常密被短线状钟乳体。革质。叶柄长0.1～0.2cm，上面被毛。气微，味苦。【鉴别】【检査】【浸出物】【含量测定】同药材。【性味】苦，平。【功能与主治】祛风除湿，行气止痛，活血通络。用于风湿痹痛，胸腹气胀，牙痛，疝痛，跌扑伤痛，胸痹心痛。【用法与用量】9～15g；或浸酒。外用，适量，鲜品捣烂敷。【注意】孕妇禁用。【贮藏】置干燥处。实施例2【性状】本品茎圆柱形，有纵棱，小枝四棱形，全面被短柔毛或外方相对两侧面无毛，灰白色。完整叶片展平后呈阔椭圆形、阔倒卵形、卵状椭圆形或长圆形，长1～3cm，宽0.8～2cm。先端圆或钝，常有小凹口，基部圆或急尖或楔形，叶面光亮，中脉凸出，侧脉明显，叶背中脉平坦或稍凸出，中脉上常密被短线状钟乳体。革质。叶柄长0.1～0.2cm，上面被毛。气微，味苦。【鉴别】取本品粉末1-5g，置50ml锥形瓶中，加浓氨水5ml，摇匀，密闭静置18分钟，加入三氯甲烷10ml，超声25分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液，另取小叶黄杨对照药材3g，同法制成对照药材溶液，再取环维黄杨星D对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液，通则0502照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为10:16:0.4:0.05的乙酸乙酯-甲醇-氨水-水为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，依次喷以改良碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液，晾干，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。【检查】水分不得过13.0％(通则0832第二法)；总灰分不得过5.0％(通则2302)。【浸出物】水溶性浸出物照水溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定，不得少于5.0％。醇溶性浸出物照醇溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定，用75％乙醇作溶剂，不得少于5.0％。【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为17:83的甲醇-0.2％磷酸为流动相；柱温：20℃；检测波长为264nm。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加60％甲醇制成每lml含80μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇11ml，称定重量，以功率140W、频率42kHz超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用60％％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含紫丁香苷(C17H24O9)不得少于0.015％。饮片【炮制】除去杂质，切段(3～5cm)。本品呈不规则段，茎圆柱形，有纵棱，小枝四棱形，全面被短柔毛或外方相对两侧面无毛，灰白色。完整叶片展平后呈阔椭圆形、阔倒卵形、卵状椭圆形或长圆形，长1～3cm，宽0.8～2cm。先端圆或钝，常有小凹口，基部圆或急尖或楔形，叶面光亮，中脉凸出，侧脉明显，叶背中脉平坦或稍凸出，中脉上常密被短线状钟乳体。革质。叶柄长0.1～0.2cm，上面被毛。气微，味苦。【鉴别】【检査】【浸出物】【含量测定】同药材。【性味】苦，平。【功能与主治】祛风除湿，行气止痛，活血通络。用于风湿痹痛，胸腹气胀，牙痛，疝痛，跌扑伤痛，胸痹心痛。【用法与用量】9～15g；或浸酒。外用，适量，鲜品捣烂敷。【注意】孕妇禁用。【贮藏】置干燥处。实施例3【性状】本品茎圆柱形，有纵棱，小枝四棱形，全面被短柔毛或外方相对两侧面无毛，灰白色。完整叶片展平后呈阔椭圆形、阔倒卵形、卵状椭圆形或长圆形，长1～3cm，宽0.8～2cm。先端圆或钝，常有小凹口，基部圆或急尖或楔形，叶面光亮，中脉凸出，侧脉明显，叶背中脉平坦或稍凸出，中脉上常密被短线状钟乳体。革质。叶柄长0.1～0.2cm，上面被毛。气微，味苦。【鉴别】取本品粉末1g，置50ml锥形瓶中，加浓氨水4ml，摇匀，密闭静置15分钟，加入三氯甲烷6ml，超声20分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液，另取小叶黄杨对照药材3g，同法制成对照药材溶液，再取环维黄杨星D对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液，通则0502照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为10:16:0.4:0.05的乙酸乙酯-甲醇-氨水-水为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，依次喷以改良碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液，晾干，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。【检查】水分不得过13.0％(通则0832第二法)。总灰分不得过5.0％(通则2302)。【浸出物】水溶性浸出物照水溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定，不得少于5.0％。醇溶性浸出物照醇溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定，用75％乙醇作溶剂，不得少于5.0％。【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为17:83的甲醇-0.2％磷酸为流动相；柱温：20℃；检测波长为264nm。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加60％甲醇制成每lml含80μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇8ml，称定重量，以功率140W、频率42kHz超声处理25-45分钟，放冷，再称定重量，用55-65％％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含紫丁香苷(C17H24O9)不得少于0.015％。饮片【炮制】除去杂质，切段(3～5cm)。本品呈不规则段，茎圆柱形，有纵棱，小枝四棱形，全面被短柔毛或外方相对两侧面无毛，灰白色。完整叶片展平后呈阔椭圆形、阔倒卵形、卵状椭圆形或长圆形，长1～3cm，宽0.8～2cm。先端圆或钝，常有小凹口，基部圆或急尖或楔形，叶面光亮，中脉凸出，侧脉明显，叶背中脉平坦或稍凸出，中脉上常密被短线状钟乳体。革质。叶柄长0.1～0.2cm，上面被毛。气微，味苦。【鉴别】【检査】【浸出物】【含量测定】同药材。【性味】苦，平。【功能与主治】祛风除湿，行气止痛，活血通络。用于风湿痹痛，胸腹气胀，牙痛，疝痛，跌扑伤痛，胸痹心痛。【用法与用量】9～15g；或浸酒。外用，适量，鲜品捣烂敷。【注意】孕妇禁用。【贮藏】置干燥处。实施例4【性状】本品茎圆柱形，有纵棱，小枝四棱形，全面被短柔毛或外方相对两侧面无毛，灰白色。完整叶片展平后呈阔椭圆形、阔倒卵形、卵状椭圆形或长圆形，长1～3cm，宽0.8～2cm。先端圆或钝，常有小凹口，基部圆或急尖或楔形，叶面光亮，中脉凸出，侧脉明显，叶背中脉平坦或稍凸出，中脉上常密被短线状钟乳体。革质。叶柄长0.1～0.2cm，上面被毛。气微，味苦。【鉴别】取本品粉末5g，置50ml锥形瓶中，加浓氨水8ml，摇匀，密闭静置45分钟，加入三氯甲烷18ml，超声40分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液，另取小叶黄杨对照药材3g，同法制成对照药材溶液，再取环维黄杨星D对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液，通则0502照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为10:16:0.4:0.05的乙酸乙酯-甲醇-氨水-水为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，依次喷以改良碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液，晾干，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。【检查】水分不得过13.0％(通则0832第二法)。总灰分不得过5.0％(通则2302)。【浸出物】水溶性浸出物照水溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定，不得少于5.0％。醇溶性浸出物照醇溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定，用75％乙醇作溶剂，不得少于5.0％。【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为17:83的甲醇-0.2％磷酸为流动相；柱温：20℃；检测波长为264nm。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加65％甲醇制成每lml含80μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇10ml，称定重量，以功率140W、频率42kHz超声处理25-45分钟，放冷，再称定重量，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含紫丁香苷(C17H24O9)不得少于0.015％。饮片【炮制】除去杂质，切段(3-5cm)。本品呈不规则段，茎圆柱形，有纵棱，小枝四棱形，全面被短柔毛或外方相对两侧面无毛，灰白色。完整叶片展平后呈阔椭圆形、阔倒卵形、卵状椭圆形或长圆形，长1～3cm，宽0.8～2cm。先端圆或钝，常有小凹口，基部圆或急尖或楔形，叶面光亮，中脉凸出，侧脉明显，叶背中脉平坦或稍凸出，中脉上常密被短线状钟乳体。革质。叶柄长0.1～0.2cm，上面被毛。气微，味苦。【鉴别】【检査】【浸出物】【含量测定】同药材。【性味】苦，平。【功能与主治】祛风除湿，行气止痛，活血通络。用于风湿痹痛，胸腹气胀，牙痛，疝痛，跌扑伤痛，胸痹心痛。【用法与用量】9～15g；或浸酒。外用，适量，鲜品捣烂敷。【注意】孕妇禁用。【贮藏】置干燥处。实验例：为证明本发明的科学性与合现性，进行了以下方法学实验研究：1、【性状】本品性状根据样品描述，本品茎圆柱形，有纵棱，小枝四棱形，全面被短柔毛或外方相对两侧面无毛，灰白色。完整叶片展平后呈阔椭圆形、阔倒卵形、卵状椭圆形或长圆形，长1～3cm，宽0.8～2cm。先端圆或钝，常有小凹口，基部圆或急尖或楔形，叶面光亮，中脉凸出，侧脉明显，叶背中脉平坦或稍凸出，中脉上常密被短线状钟乳体。革质。叶柄长0.1～0.2cm，上面被毛。气微，味苦。2、【成分】木质部含生物碱：环常绿黄杨碱(cycloviro-buxine)C、D(即环维黄杨星D)，环原黄杨碱(cycloprotobuxamine)A、C；叶含生物碱：黄杨胺醇碱(buxaminol)E，环朝鲜黄杨碱(cyclokoreanine)B，黄杨酮碱(buxtauine)，环常绿黄杨碱D，黄杨胺碱(buxamine)E，环小叶黄杨碱(buxpiine)。茎叶含环原黄杨酰胺(cycloprotobuxinamine)，小叶黄杨碱(buxmicrophylline)A，黄杨酮碱(buxtauine)M，异东莨菪素(isoscopoletin)，表羽扇豆醇(ePi-lupeol)[1]。此外，还含紫丁香苷(Syringin)。3、【鉴别】3.1取本品粉末约2g，加氨试液5滴与三氯甲烷20ml，振摇，放置20分钟，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加5％的醋酸溶液2ml，搅拌使溶解，离心，上清液加碘化铋钾试液2滴，即生成红色沉淀。因该鉴别专属性不强，故本次标准修订不载入正文。3.2薄层鉴别方法为：取本品粉末3g，置50ml锥形瓶中，加浓氨水6ml，摇匀，密闭静置30分钟，加入三氯甲烷10ml，超声30分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液。另取小叶黄杨对照药材3g，同法制成对照药材溶液。再取环维黄杨星D对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水-水(10:16:0.4:0.05)为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，依次喷以改良碘化铋钾试液与亚硝酸钠乙醇试液，晾干，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，斑点清晰、分离度好，故列入正文。3.3.1.试验方法、条件及重现性方法来源：参考杨娟艳等黔产小叶黄杨中环维黄杨星D的鉴别及不同部位含量测定方法中的薄层鉴别项，结合我公司小叶黄杨研究的实际情况而制定了本方法。样品来源：扎佐170901、平坝170902、镇远170903、龙里170904、盘县170905、罗甸170906、安龙170907、台州170908、雷山170909、都匀170910对照药材来源：中国食品药品检定研究院(批号：121721-201501)。对照品来源：环维黄杨星D中国食品药品检定研究院(批号：110888-200001)供试品溶液制备：取本品粉末3g，置50ml锥形瓶中，加浓氨水6ml，摇匀，密闭静置30分钟，加入三氯甲烷10ml，超声30分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液。对照药材溶液制备：取小叶黄杨对照药材3g，置50ml锥形瓶中，加浓氨水6ml，摇匀，密闭静置30分钟，加入三氯甲烷10ml，超声30分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液。对照品溶液制备：取环维黄杨星D对照品，用三氯甲烷制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液。薄层板：硅胶G(规格：200×100mm)。点样量：供试品溶液和对照药材溶液各10μ1、对照品溶液2μ1。展开剂：乙酸乙酯-甲醇-氨水-水(10:16:0.4:0.05)展距：8.5cm显色及检视：依次喷以改良性碘化铋钾和亚硝酸钠乙醇试液，晾干，在日光下检视。结果：供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。用上述方法处理10批各个产地的样品，并按规定的方法展开，结果见表1。表1试验方法、条件及重现性试验结果序号批号结果1扎佐170901斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好2平坝170902斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好3镇远170903斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好4龙里170904斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好5盘县170905斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好6罗甸170906斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好7安龙170907斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好8台州170908斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好9雷山170909斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好10都匀170910斑点清新，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好3.3.2.耐用性3.3.2.1不同薄层板的比较比较了青岛海洋化工厂分厂硅胶G商品板和高效硅胶G商品板(各10批次的样品)，结果见表2。表2：不同薄层板耐用性结果表结果高效硅胶板商品板斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中；硅胶G商品板斑点不清晰，分离达不到要求,故用高效硅胶G商品板。3.3.2.2不同温度的比较比较了低温(5℃)和室温(25℃)环境条件下高效板展开效果，结果见表3。表3：低温(5℃)室温(25℃)环境条件下高效板展开效果表结果斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。3.3.2.3不同湿度的比较比较了低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下高效薄层板展开效果，结果见表4。表4：低湿度(32％)和高湿度(72％)环境下高效薄层板展开效果表结果：斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。经上述方法学验证试验，结果表明在不同温度、湿度条件下，用高效薄层板进行试验，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同温度、湿度条件下能得到较好的鉴别色谱。验证试验表明重现性好、耐用性好。4.【检查】依据《中国药典》相关内容，结合本品特性，研究制定了相应的检查项目。4.1水分照水分测定法(《中国药典》2015版四部通则0832第二法)测定。实测十个不同产地样品各1批，平均值9.91％(见表6.1)，最低测定值为9.03％，最高测定值为10.92％，以平均测定值的130％设限，为12.88％，故暂定本品水分不得过13.0％。表5水分测定结果表4.2总灰分照总灰分测定法(《中国药典》2015版四部通则2302)测定。实测十个不同产地样品各1批，平均值3.70％(见表6.2)，最低测定值为2.78％，最高测定值为4.73％，以平均测定值的130％设限，为4.81％。故暂定本品总灰分不得过5.0％。表6总灰分结果表5.【浸出物】5.1水溶性浸出物照水溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定，实测十个不同产地样品各1批，平均值7.82％(见表7)，最低测定值为6.12％，最高测定值为12.52％，以平均测定值的70％设限，为5.47％。故暂定本品水溶性浸出物不得少于5.0％。表7水溶性浸出物测定结果表5.2醇溶性浸出物照醇溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定，用75％乙醇作溶剂，实测十个不同产地样品各1批，平均值7.84％(见表8)，最低测定值6.36％，，最高值12.01％，以平均测定值的70％设限，为5.49％。故暂定本品醇溶性浸出物不得少于5.0％。表8醇溶性浸出物测定结果表6【含量测定】为了有效地控制药材的质量，对小叶黄杨生物碱中的有效成分环维黄杨星D进行检测方法的研究，参照黔产小叶黄杨中环维黄杨星D的鉴别及不同部位含量测定[4]，但由于我公司高效液相色谱仪未有电子喷雾检测器，使用了蒸发光散射检测器进行检测方法的研究，其结果目标峰分离差，且峰形异常，因此该方法不收入正文，另紫丁香苷具有抗炎、抗肿瘤、止血作用，是一种强的抗肝毒药物，具有恢复微粒体酶系统的酶活性及抑制脂质过氧化作用，可以促进肝毒物代谢，并改善肝功能，使之正常化，因此对小叶黄杨中的紫丁香苷进行方法研究，其验证结果：方法可行，可以作为小叶黄杨的含量测定指标。6.1方法一:仪器与试药高效液相色谱仪：岛津2040C；色谱柱：WondaSilC18Superb5μm250×4.6mm电子天平：FA1104；AUW120D环维黄杨星D对照品(供含量测定)：中国食品药品检定研究院，批号：110888-200001。甲醇为色谱纯和分析纯；三氟乙酸为分析纯；水为超纯水；其它试剂为分析纯。方法来源：参考.黔产小叶黄杨中环维黄杨星D的鉴别及不同部位含量测定的方法结合本公司的仪器设备而拟定的.环维黄杨星D照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0512)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05％三氟乙酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；以蒸发光散射检测器检测，温度40℃，气压350KP。对照品溶液的制备取环维黄杨星D对照品适量，精密称定，加少量甲醇使溶解后，再加0.05％三氟乙酸溶液制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末(过二号筛)约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氨5mL，摇匀，浸润30min。加入三氯甲烷40ml，水浴回流3h，放冷，滤过，用5ml三氯甲烷将锥形瓶和滤纸上的残渣少量多次一并洗入滤纸内过滤，滤液水浴蒸干。残渣用10ml0.5％醋酸溶液超声使其溶解，稀氨水调节PH值至7.0，分别用三氯甲烷10mL、醋酸乙酯10mL萃取，分离并收集水相，水浴蒸干，残渣用0.05％三氟乙酸溶液溶解后转移至10mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液20μl、40μl，供试品溶液40μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。结论：用此方法测小叶黄杨中环维黄杨星D的含量，其目标峰分离差，且峰形差，不再进行此方法的研究。故不载入正文。6.2方法二仪器与试药高效液相色谱仪：安捷伦1260；色谱柱：WondaSilC18Superb5μm250×4.6mm电子天平：(SHIMADZU:AUW120D；上海越平：FA1104)；HS-10260D型超声波清洗机(功率250W，频率30KHZ)；紫丁香苷对照品：中国食品药品检定研究院，批号：111574-201504含量以94.9％计。甲醇为色谱纯和分析纯；水为超纯水；其它试剂为分析纯。方法考察试验方法来源：参考小叶黄杨TLC鉴别及不同部位中紫丁香苷和香草酸HPLC测定，并结合小叶黄杨的实际研究情况，制定了该含量的质量标准，该标准列入正文。6.2.1对照品溶液的制备精密称定紫丁香苷(含量以94.9％计)对照品18.60mg，置200ml量瓶中，用70％甲醇溶解并稀释至刻度，制成每lml含88.257μg的溶液，摇匀，即得。6.2.2供试品溶液的制备取本品粉末(过二号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇10ml，称定重量，超声处理(功率140W，频率42kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。6.2.3色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2％磷酸(17:83)为流动相；柱温：20℃；检测波长为264nm。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于5000，测定。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。6.2.4线性试验取紫丁香苷对照品溶液(88.257μg/ml)。分别精密量取0.5、1、5、10、15、20μl注入色谱仪，按正文色谱条件试验，结果见表9，以峰面积为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)绘制标准曲线，回归方程为：Y＝2608.6X+1.3052，相关系数r2＝1，表明紫丁香苷在0.04413～1.7651μg范围内线性关系良好。结果见表9。表9紫丁香苷线性试验结果6.2.5仪器精密度试验取6.2.1项下制备的对照品溶液，在上述色谱条件下，重复进样6次，测定紫丁香苷峰面积，计算RSD％(紫丁香苷)值为0.084％，表明仪器精密度好，测定结果见表10。表10仪器精密度试验结果6.2.6重复性试验精密称取同一批样品(批号170921)6份，按上述方法测定样品中紫丁香苷的含量，平均含量为0.0667％，RSD值0.30％，表明此紫丁香苷的测定方法具有良好的重复性；结果见表11。表11重复性试验结果6.2.7稳定性试验按8.2.2项下方法制备供试品溶液一份，室温放置，按拟定色谱条件下于0，2，4，6，8，10h分别进样，测定峰面积。计算RSD％为1.23％，表明紫丁香苷在10h内相对稳定。稳定性试验结果见表12。表12稳定性试验结果6.2.8回收试验采用加样回收法。取已知含量的样品(含量：0.0667％)6份，每份精密称取约0.25g，分别加入紫丁香苷对照品溶液(88.257μg/ml)2ml，按照8.2.2项下制备方法制备。在上述色谱条件下测定，测得其平均回收率为101.9％，RSD％为0.72％，结果见表13。表13加样回收试验结果表6.2.9样品含量测定按正文收载的方法对十批样品进行含量测定，结果见表14。表14十批样品结论：从上表数据可以得出小叶黄杨中含紫丁香苷(C17H24O9)平均值为0.021％。其中罗甸170906含量为0.016，平塘170910含量为0.032；以平均测定值的70％设限，为0.015％。故暂定本品含紫丁香苷不得少于0.015％，质量标准的含量检测。本品按干燥品计算，含紫丁香苷(C17H24O9)不得少于0.015％。饮片【炮制】除去杂质，洗净，干燥，切段(3～5cm)。本品呈不规则段，茎圆柱形，有纵棱，小枝四棱形，全面被短柔毛或外方相对两侧面无毛，灰白色。完整叶片展平后呈阔椭圆形、阔倒卵形、卵状椭圆形或长圆形，长1～3cm，宽0.8～2cm。先端圆或钝，常有小凹口，基部圆或急尖或楔形，叶面光亮，中脉凸出，侧脉明显，叶背中脉平坦或稍凸出，中脉上常密被短线状钟乳体。革质。叶柄长0.1～0.2cm，上面被毛。气微，味苦。【鉴别】取本品粉末3g，置50ml锥形瓶中，加浓氨水6ml，摇匀，密闭静置30分钟，加入三氯甲烷10ml，超声30分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液。另取小叶黄杨对照药材3g，同法制成对照药材溶液。再取环维黄杨星D对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.05mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水-水(10:16:0.4:0.05)为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，依次喷以改良碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液，晾干，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。用上述方法检测10批样品(1样品171111、2样品171112、3样品171113、4样品171114、5样171115、6小叶黄杨对照药材、7环维黄杨星D对照品8样品171116、9样品171117、10样品171118、11样品171119、12样品171120)，结果供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。【检査】水分不得过13.0％(通则0832第二法)参照《中国药典》2015版药材和饮片检定通则制定。表15十批小叶黄杨饮片水分总灰分不得过5.0％(通则2302)。表16十批小叶黄杨饮片总灰分【浸出物】水溶性浸出物照水溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定，不得少于5.0％。表17十批小叶黄杨饮片水溶性浸出物醇溶性浸出物照醇溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定，用75％乙醇作溶剂，不得少于5.0％。表18十批小叶黄杨饮片醇溶性浸出物【含量测定】同药材。照高效液相色谱法(通则0512)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2％磷酸(17:83)为流动相；柱温：20℃；检测波长为264nm。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加70％甲醇溶液制成每lml含80μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末(过二号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇10ml，称定重量，超声处理(功率140W，频率42kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含紫丁香苷(C17H24O9)不得少于0.015％。按正文收载的方法对十批饮片样品进行含量测定，结果见表下表18。表18十批小叶黄杨饮片含量测定【性味】苦、平【功能与主治】祛风除湿，行气止痛，活血通络。用于风湿痹痛，胸腹气胀，牙痛，疝痛，跌扑伤痛，胸痹心痛。【用法与用量】9～15g；或浸酒。外用，适量，鲜品捣烂敷。【注意事项】孕妇禁用。【贮藏】置干燥处。虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。当前第1页1 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