本发明属于动物疾病领域，具体而言，涉及一种利用产前血液指标诊断围产期奶牛低血钙的方法。
技术背景
随着我国奶牛业不断发展，奶牛养殖业已经成为了推动我国畜牧业发展的关键性产业。奶牛低钙血是围产期奶牛高发的一种以钙代谢紊乱为主的疾病，严重者呈现产后瘫痪、昏迷等临床特征，严重降低奶牛泌乳量和乳品质，给奶牛业发展造成巨大的经济损失。但由于引起围产期低钙血症的发病原因众多，且奶牛体内钙的代谢和调节受到众多因素的影响，有关奶牛乳热钙稳态机制受到越来越多的人重视。同时，低钙血可使机体钙依赖性肌肉平滑肌和骨骼肌机能受损，显著增加难产、子宫脱、真胃变位的发病率。
目前奶牛低血钙症的监测主要是根据产后血液中的钙离子浓度变化。奶牛低血钙症的判定标准：奶牛产后1-3d，血浆钙浓度在1.4mmol/l-2.0mmol/l，无明显临床症状为亚临床低血钙症；血钙浓度≤1.4mmol/l，有明显临床症状为临床型低血钙症。这种方法虽然准确率高，但是只能在奶牛生产后检测血钙浓度确诊，不能做到产前预测。本发明提供了一种利用产前血液指标诊断围产期奶牛低血钙的方法，有利于尽早采取防控措施，降低疾病发生。
技术实现要素：
本发明提供一种利用产前血液指标诊断围产期奶牛低血钙的方法，所述产前血液指标中的血清中ⅰ型胶原羟基末端肽、成纤维细胞生长因子23、钙、磷等对围产期奶牛低血钙敏感，通过检测血清中的ⅰ型胶原羟基末端肽、成纤维细胞生长因子23、钙、磷等含量以及分析与低血钙的相关性来建立预警模型，进而实现奶牛低血钙的产前预警诊断。
本发明所采用的技术方案是：一种利用产前血液指标诊断围产期奶牛低血钙的方法包括下列步骤：跟踪采集产前2周至产后7天奶牛血液，肝素抗凝分离血浆；检测血浆中ⅰ型胶原羟基末端肽、成纤维细胞生长因子23、磷、维生素d3、甲状旁腺、钙、钾、镁、游离脂肪酸、葡萄糖、谷草转氨酶的含量，以产后血钙<2.0mmol/l为低血钙组奶牛；利用线性回归分析指标相关性，利用多元回归分析建模，roc分析模型敏感性，确定产前血液ⅰ型胶原羟基末端肽、成纤维细胞生长因子23、磷能有效预警产后低血钙的发生。
本发明具有的有益效果是：本发明基于上述背景通过对产前2周奶牛血液中的ⅰ型胶原羟基末端肽、成纤维细胞生长因子23、磷水平检测，利用本发明诊断方法可对产后奶牛低血钙发病情况进行预警诊断，通过采取疾病前有效的防控措施可降低疾病的发病率，提高牛群的生产效益。
具体实施方式
下面结合试验对本发明进行进一步说明：
于黑龙江省某集约化奶牛场选取年龄、体况、胎次相近的奶牛22头，跟踪于奶牛产前两周、产前一周、分娩当天、产后3天、产后7天清晨采食前尾静脉采集血液，肝素抗凝，分离血浆。利用全自动自动生化分析仪以及酶联免疫吸附实验检测血浆ⅰ型胶原羟基末端肽、成纤维细胞生长因子23、磷、维生素d3、甲状旁腺、钙、钾、镁、游离脂肪酸、葡萄糖、谷草转氨酶的含量。依据采集各时间段奶牛血钙水平为诊断标准：奶牛血清中ca2+≥2.0mmol/l且没有临床症状视为健康奶牛，ca2+<2.0mmol/l视为低血钙奶牛。
数据分析
所有数据应用ibmspss22.0软件进行统计分析，组间均值差异显著性采用独立样本t检验，结果以平均值±标准差的形式表示；合并产前2周与产前1周数据，以分组为因变量，分析各指标与低血钙的相关性，p≤0.25为显著相关；筛选显著相关指标利用多元回归建模，roc曲线分析各模型的的敏感度，选取p<0.05,且指标相对较少的模型为低血钙奶牛早期诊断模型，建立多元回归方程。
结果说明
随机筛选的22头奶牛，血钙水平检测结果显示，有10头奶牛患有低血钙，其均在产后1-3天检测到低钙血症，12头奶牛整个采样时间点均未检测到低血钙值。采用独立样本t检验分析方法，对两组奶牛不同时间，不同检测指标进行比较分析，结果见表1：
表1围产期低血钙奶牛血液相关指标特征
*低血钙与对照组差异显著p≤0.05,**低血钙与对照组差异极显著p≤0.01
由表1可知，低血钙(ca)组奶牛血钙水平在产前两周产前一周显著低于对照组奶牛(p≤0.05)，在分娩当天和产后3天呈现出极显著低于对照组奶牛(p≤0.01)。此外低血钙奶牛产前1周血磷(p)水平显著高于对照组；游离脂肪酸(nefa)在产前两周显著高于对照组奶牛；产前两周成纤维细胞生长因子和ⅰ型胶原羟基末端肽(citp)的水平极显著高于对照组奶牛。
产前各指标采用线性回归分析结果如表2所示，产前血液指标中citp，p，fgf23，ca，vd3与低血钙存在显著相关性(p≤0.25)。
表2产前血液指标与低血钙的线性相关分析
*产前血液指标与低血钙存在显著相关性p≤0.25
相关性指标采用多元线性回归建模，模型经roc曲线分析如表3所示，模型i的roc曲线下面积最大，随着指标的减少所建立的模型的roc曲线下面积逐渐降低。本发明最终确定产前血清fgf23，citp和p的水平可有效预测奶牛低血钙的发生，所建立的模型方程：y＝0.909-0.663*citp+6.065*p-0.048*fgf23，以y＞0作为奶牛产犊发生低血钙的预测标准，模型的准确率为84.6％，敏感性为80.0％，特异性为82.6％。
表3奶牛低血钙产前预警模型
实施案例：
于某集约化牧场随机采取产奶2周内奶牛血液，肝素抗凝，分离血浆。检测血液fgf23，citp和p的值，利用本发明疾病预测方程计算获得y值，如表4所示，10头奶牛中3头奶牛的y值＞0，因此该牧场产后奶牛低血钙的发病率预测为30％。