本发明属于农药残留检测技术领域，具体涉及一种蔬菜农药残留检测方法。
背景技术
在我国，蔬菜水果的农药残留极其严重。导致水果蔬菜农药残留超标重要原因是一些农户在水果蔬菜种植中使用国家严禁使用的剧毒农药，致使农药残留量过大。食用具有超标有毒农药残留的水果蔬菜，会引起人畜中毒事件，对人类身体造成极大伤害。现阶段，我国农药残留快速检测方法有很多种，依据原理主要分成生化测定法和色谱检测法两大类。色谱检测法测定结构准确，但是测定时间长，生化测定法中的酶抑制率法由于具有速度快、反应迅速、操作简单、所需的投入资金少等特点，被列为国家推荐标准方法，尤其是针对有机磷与氨基甲酸酯类农药进行测定，酶抑制法是一种快速的检测技术，其主要是对酶水解底物后产物的含量进行测定，将其测定结果同标准品对比的一种检测方法，其可分为电位滴定法、压力测定法、ph差值法(△ph)与比色法4种，但是现在的酶抑制率法的测定结构准确率较低。
因此，急需一种提高准备率，测定速度快，操作简单的蔬菜农药残留检测方法。
技术实现要素：
为了解决现有酶抑制率法的测定结构准确率较低的问题，本发明的目的是提供一种蔬菜农药残留检测方法，具有测定速度快，操作简单的优点。
本发明提供了如下的技术方案：
一种蔬菜农药残留检测方法，包括如下步骤：
s1、试剂准备和配制：配置缓冲液、丁酰胆碱酯酶液、底物和显色剂；
s2、样品准备：取表面干净的蔬菜或瓜果，叶菜取叶片部分，果实取表面,将叶片或瓜肉等剪成小块放入提取瓶，加入缓冲液，震荡，得到提取液，静止，得到上清液备用；
s3、对照液检测：取缓冲液和丁酰胆碱酯酶液加入反应瓶中，再加入显色剂，在恒温培养箱中放置一定时间，加入底物，倒入比色皿中，用农残速测仪器进行检测；
s4、待测样品液检测：取s2步骤制得的上清液、丁酰胆碱酯酶液和显色剂，在恒温培养箱中放置一段时间，倒入比色皿中，震荡，用农残速测仪器进行检测；
s5、计算检测结果：检测结果按以下数学式计算：
其中：△ac-对照组3min后与3min前吸光值之差，△as-样本3min后与3min前吸光值之差。
当抑制率<70％时，蔬菜中不含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残毒，当抑制率≥70％时，蔬菜中可能含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残毒，此时该样本要有2次以上的重复检测，经多次重复检测，<70％的重现性应在80％以上，则判定合格。
优选的，所述s1步骤中缓冲液的配置是缓冲剂用纯净水溶解；丁酰胆碱酯酶液的配置是丁酰胆碱酯酶用缓冲液溶解；底物的配置是底物粉剂用缓冲液溶解；显色剂的配置是显色剂用缓冲液溶解。
优选的，所述s2步骤中叶菜重量/缓冲液的用量是1g/20ml，瓜果重量缓冲液的用量是2g/20ml。
优选的，所述s2步骤中震荡时间为1-3min，静止4-6min。
优选的，所述s3步骤和所述s4步骤中恒温培养箱的温度均为37-38℃，放置时间35-45min。
本发明的有益效果是：本发明采用酶抑制法中的比色法，比色法是通过显色剂改变底物水解产物颜色的一种测定方法，具有测定速度快，操作简单的特点，本发明采用丁酰胆碱酯酶，可提高测定结果的准备率。
具体实施方式
实施例1
一种蔬菜农药残留检测方法，包括如下步骤：
s1、试剂准备和配制：配置缓冲液时1袋缓冲剂用1000ml的纯净水溶解，常温保存；配置丁酰胆碱酯酶液时每瓶丁酰胆碱酯酶液粉剂中加入10ml缓冲液进行溶解，0-4℃保存；配置底物时每瓶底物粉剂用10ml缓冲液溶解，0-4℃保存；配置显色剂时每瓶显色剂用10ml缓冲液溶解，避光冷藏保存；
s2、样品准备：取表面干净的蔬菜，叶菜取叶片部分，用天平准确称取1g叶片，将叶片剪成1cm见方大小的小块放入提取瓶中，加入20ml缓冲液，震荡1min，得到提取液，静止4min，得到上清液备用；
s3、对照液检测：取缓冲液3ml和50ul丁酰胆碱酯酶液加入反应瓶中，再加入50ul显色剂，在38℃恒温培养箱中放置35min，加入50ul底物，倒入比色皿中，用农残速测仪器进行检测，空白液吸光值控制在0.4-0.8之间；
s4、待测样品液检测：取s2步骤制得的上清液、50ul丁酰胆碱酯酶液和50ul显色剂，在38℃恒温培养箱中放置35min，倒入比色皿中，震荡，用农残速测仪器进行检测；
s5、计算检测结果：检测结果按以下数学式计算:
其中：△ac-对照组3min后与3min前吸光值之差，△as-样本3min后与3min前吸光值之差。
当抑制率<70％时，蔬菜中不含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残毒，当抑制率≥70％时，蔬菜中可能含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残毒，此时该样本要有2次以上的重复检测，经多次重复检测，<70％的重现性应在80％以上，则判定合格。
实施例2
一种蔬菜农药残留检测方法，包括如下步骤：
s1、试剂准备和配制：配置缓冲液时1袋缓冲剂用1000ml的纯净水溶解，常温保存；配置丁酰胆碱酯酶液时每瓶丁酰胆碱酯酶液粉剂中加入10ml缓冲液进行溶解，0-4℃保存；配置底物时每瓶底物粉剂用10ml缓冲液溶解，0-4℃保存；配置显色剂时每瓶显色剂用10ml缓冲液溶解，避光冷藏保存；
s2、样品准备：取表面干净的瓜果，瓜果取果实部分，用天平准确称取2g瓜果，将瓜果剪成1cm见方大小的小块放入提取瓶中，加入20ml缓冲液，震荡2min，得到提取液，静止5min，得到上清液备用；
s3、对照液检测：取缓冲液3ml和50ul丁酰胆碱酯酶液加入反应瓶中，再加入50ul显色剂，在37℃恒温培养箱中放置40min，加入50ul底物，倒入比色皿中，用农残速测仪器进行检测，空白液吸光值控制在0.4-0.8之间；
s4、待测样品液检测：取s2步骤制得的上清液、50ul丁酰胆碱酯酶液和50ul显色剂，在37℃恒温培养箱中放置40min，倒入比色皿中，震荡，用农残速测仪器进行检测；
s5、计算检测结果：检测结果按以下数学式计算:
其中：△ac-对照组3min后与3min前吸光值之差，△as-样本3min后与3min前吸光值之差。
当抑制率<70％时，蔬菜中不含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残毒，当抑制率≥70％时，蔬菜中可能含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残毒，此时该样本要有2次以上的重复检测，经多次重复检测，<70％的重现性应在80％以上，则判定合格。
实施例3
一种蔬菜农药残留检测方法，包括如下步骤：
s1、试剂准备和配制：配置缓冲液时1袋缓冲剂用1000ml的纯净水溶解，常温保存；配置丁酰胆碱酯酶液时每瓶丁酰胆碱酯酶液粉剂中加入10ml缓冲液进行溶解，0-4℃保存；配置底物时每瓶底物粉剂用10ml缓冲液溶解，0-4℃保存；配置显色剂时每瓶显色剂用10ml缓冲液溶解，避光冷藏保存；
s2、样品准备：取表面干净的蔬菜，叶菜取叶片部分，用天平准确称取1g叶片，将叶片剪成1cm见方大小的小块放入提取瓶中，加入20ml缓冲液，震荡3min，得到提取液，静止6min，得到上清液备用；
s3、对照液检测：取缓冲液3ml和50ul丁酰胆碱酯酶液加入反应瓶中，再加入50ul显色剂，在恒温培养箱中放置45min，加入50ul底物，倒入比色皿中，用农残速测仪器进行检测，空白液吸光值控制在0.4-0.8之间；
s4、待测样品液检测：取s2步骤制得的上清液、50ul丁酰胆碱酯酶液和50ul显色剂，在恒温培养箱中放45min，倒入比色皿中，震荡，用农残速测仪器进行检测；
s5、计算检测结果：检测结果按以下数学式计算:
其中：△ac-对照组3min后与3min前吸光值之差，△as-样本3min后与3min前吸光值之差。
当抑制率<70％时，蔬菜中不含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残毒，当抑制率≥70％时，蔬菜中可能含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残毒，此时该样本要有2次以上的重复检测，经多次重复检测，<70％的重现性应在80％以上，则判定合格。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。