一种碳酸型桔汁饮料中原果汁含量的测定方法与流程

本发明属于果汁含量检测领域，尤其是涉及一种碳酸型桔汁饮料中原果汁含量的测定方法。

背景技术：

碳酸型桔汁汽水沿用独特的传统配方，加入了新鲜果汁，保留了鲜果的口味和较高的营养成分。而由于果汁受地域、季节、气候的影响大，果汁中的各种成分的含量变化较大，很难找到一个能够准确反映果汁浓度的特征指标,目前国际上没有统一的果汁含量检测方法，发达国家根据本国的国情和水果资源的品种差异制定了各自的检测方法。中国目前缺乏大多数果汁饮料的国家检测标准，仅仅针对橙、柑、橘汁及其饮料中果汁含量检测制定了一个推荐标准，即gb/t12143-2008《橙、柑、橘汁及其饮料中果汁含量的测定》，该方法是在参考了联邦德国的rsk值的基础上，结合我国实际制定出来的标准选择可溶性固形物和其余六项指标作为特征指标，并规定了各项指标在果汁含量计算中的权值。国标方法耗时、耗力，且需经复杂的计算。

此种方法不利于企业在生产过程中对产品的内部质量控制和工艺的改善，使含果汁饮料生产过程中果汁的含量和产品最终质量难以得到系统的控制。所以，亟须开发一套针对含气碳酸型桔汁饮料原果汁含量的快速检测方法，并结合企业的生产实际，应用到工业化生产中。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明旨在提出一种碳酸型桔汁饮料中原果汁含量的测定方法，能够快速对于饮料中的果汁含量进行检测，检测精度高。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种碳酸型桔汁饮料中原果汁含量的测定方法，包括如下步骤：

供试品溶液的制备：

取桔汁原液10.0ml置于50ml离心管中，加入10ml70％甲醇溶液震荡3min，以5000r/min离心15min，收集上清液，残渣重复提取1次，离心，合并上清液，定容50ml，0.45μm微孔滤膜过滤后超声脱气20min，得到待测供试品溶液；

将10μl待测供试品溶液注入色谱柱，得到色谱图；

在桔汁原液中加入橙皮苷标品后，按照上述步骤进行操作，得到色谱图，发现比未加入橙皮苷标品的色谱图在保留时间为17.8的地方，吸收峰的峰面积有明显的增加，因此确定保留时间为17.8的峰为橙皮苷的吸收峰。

标准溶液的制备及标准曲线的绘制：

准确称取橙皮苷0.005g，分别用色谱纯甲醇超声波辅助溶解于10ml容量瓶中，定容，配制成500mg/l标准物质的贮备液，采用逐级稀释法分别稀释配制5、10、15、20mg/l的标准溶液，以橙皮苷的浓度及峰面积绘制标准曲线；标准曲线方程为y＝33066x-8887.5，回归系数为0.9986。

测定：

色谱柱：岛津shim-pakvp-ods(250×4.6mm，5um)反相c18，流动相为乙腈和质量分数0.2％乙酸的水溶液，按照如下程序进行梯度洗脱：

0-10min，0.3％乙酸的水溶液为80-90％，乙腈为10-20％；

10-20min，0.3％乙酸的水溶液为70-80％，乙腈为20-30％；

20-30min，0.3％乙酸的水溶液为50-65％，乙腈为30-45％；

30-35min，0.3％乙酸的水溶液为40-55％，乙腈为45-55％；

35-40min，0.3％乙酸的水溶液为0-10％，乙腈为90-100％；

40-45min，0.3％乙酸的水溶液为0-10％，乙腈为90-100％；

45-50min，0.3％乙酸的水溶液为70-80％，乙腈为20-30％；

50-80min，0.3％乙酸的水溶液为70-80％，乙腈为20-30％，

流速为1.0ml/min，固定柱温25℃，二极管阵列检测器287nm，进样量20μl，检测波长287nm。

利用标准曲线，山海关饮料公司提供的原果汁纯品进样10μl，读出原果汁纯品中橙皮苷的峰面积，记为s0，并通过标准曲线计算出原果汁中的橙皮苷含量m0。利用同一批次原果汁纯品配置的质量分数为1％、3％、5％、7％、10％、20％的碳酸型桔汁饮料，依次进样10μl，分别读出碳酸型桔汁饮料含有的橙皮苷的峰面积s1、s3、s5、s7、s10、s20，通过标准曲线计算得到橙皮苷浓度m1、m3、m5、m7、m10、m20。

以浓度为3％的市售碳酸型桔汁饮料为例：

供试品为桔汁原液及山海关桔汁汽水：天津市山海关饮料有限公司提供。

试剂：实验用水为二次蒸馏水；实验所用试剂为分析纯。

由于橙皮苷属于黄酮类化合物，这类化合物一般带有酚羟基结构，在进样过程中，会在水中产生部分解离的现象，且会加强与固定相的作用，最终使曲线拖尾。所以，在选择流动相时在其中加入了乙酸，降低溶液ph，减少拖尾。

实验以不同配比的乙腈和乙酸水溶液做为流动相，检测分离效果，最终确定了以乙腈和质量分数0.2％乙酸溶液作为流动相的效果最优；故采用表1的梯度洗脱的程序条件，结果表明，黄酮标志物所得峰形尖锐且对称，分离度较好。

相对于现有技术，本发明所述的碳酸型桔汁饮料中原果汁含量的测定方法具有以下优势：

本发明所述的碳酸型桔汁饮料中原果汁含量的测定方法，采用橙皮苷作为参照物，通过检测橙皮苷的含量进而计算出饮料中果汁的含量，检测方法较国标方法具有检测快速，影响因素少，且准确度高等优点，可以应用到工业化生产中，提高了生产效率。

附图说明

图1为桔汁原果汁的液相色谱图；

图2为添加橙皮苷样品后桔汁原果汁的液相色谱图；

图3为橙皮苷标准溶液与荧光强度曲线。

具体实施方式

除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下面结合实施例及附图来详细说明本发明。

供试品为桔汁原液及山海关桔汁汽水：天津市山海关饮料有限公司提供。山海关桔汁汽水由桔汁原液及其他的辅料制备而成。

试剂：实验用水为二次蒸馏水；实验所用试剂为分析纯。

一种碳酸型桔汁饮料中原果汁含量的测定方法，包括如下步骤：

供试品溶液的制备：

取原果汁10.0ml置于50ml离心管中，加入10ml70％甲醇溶液震荡3min，以5000r/min离心15min，收集上清液，残渣重复提取1次，离心，合并上清液，定容50ml，0.45μm微孔滤膜过滤后超声脱气20min，得到待测供试品溶液；

将10μl待测供试品溶液注入色谱柱，得到色谱图，见图1。

在原果汁中加入橙皮苷标品后，按照上述步骤进行操作，得到色谱图，见图2。发现比未加入橙皮苷标品的色谱图在保留时间为17.8的地方，吸收峰的峰面积有明显的增加，因此确定保留时间为17.8的峰为橙皮苷的吸收峰。

标准溶液的制备及标准曲线的绘制：

准确称取橙皮苷0.005g，分别用色谱纯甲醇超声波辅助溶解于10ml容量瓶中，定容，配制成500mg/l标准物质的贮备液，采用逐级稀释法分别稀释配制5、10、15、20mg/l的标准溶液，以橙皮苷的浓度及峰面积绘制标准曲线；标准曲线方程为y＝33066x-8887.5，回归系数为0.9986，见图3。

测定：

色谱柱：岛津shim-pakvp-ods(250×4.6mm，5um)反相c18，流动相：由质量分数0.2％乙酸的水溶液和乙腈组成，按照表1进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min，固定柱温25℃，二极管阵列检测器287nm，进样量20μl，检测波长287nm。

表1流动相梯度洗脱程序

利用标准曲线，山海关饮料公司提供的原果汁进样10μl，读出原果汁纯品中橙皮苷的峰面积，记为s0，并通过标准曲线计算出原果汁中的橙皮苷含量m0。利用同一批次原果汁纯品配置的质量分数为1％、3％、5％、7％、10％、20％的碳酸型桔汁饮料，依次进样10μl，分别读出碳酸型桔汁饮料含有的橙皮苷的峰面积s1、s3、s5、s7、s10、s20，通过标准曲线计算得到橙皮苷浓度m1、m3、m5、m7、m10、m20。以浓度为3％的碳酸型桔汁饮料为例：

采用gb/t12143-2008《橙、柑、橘汁及其饮料中果汁含量的测定》测定碳酸型果汁饮品的原果汁含量，所测的原果汁含量与实施例1的方法所测的原果汁含量列于表2。

表2国标方法与本发明的方法检测果汁含量对照表(n＝3)

结果表明，两种方法检测结果相近，样品原果汁含量为1％时，采用国标法并未检出其桔汁含量，采用本方法检测其原果汁含量1.08％；随原果汁含量减小，国标方法的检测精确度逐渐下降，而本方法检测较为准确。其原因可能为，由于桔汁体系本身就是非常复杂的体系，非100％的果汁体系中往往又加了很多添加剂，以保持饮料的风味和稳定性，而这些物质可能会和桔汁的成分发生相互作用，增加了桔汁体系的复杂程度，影响了国标方法的测定结果。且国标法测定原果汁含量时需要2～3天，二十余种检测试剂，结果计算过程复杂，而本发明的方法测定时前处理简单，样品只需经过滤超声即可检测，整个检测过程仅需2h，且适用于原果汁含量低于5％的样品检测。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。