一种鉴定佩兰真伪的方法与流程

本发明属于中药分析技术领域，特别是涉及一种鉴定佩兰真伪的方法。

背景技术：

中国药典(2015年版)规定佩兰正品是菊科佩兰(eupatoriumfortuneturcz.)的干燥地上部分。佩兰与泽兰均为常用中药，二者功效不同。佩兰味微苦性寒，有解热清暑、化湿健胃、止呕的作用。泽兰(lycopuslucidusturcz.vat.hirtusregel)味苦性微温，有活血祛瘀，利水消肿的作用。

自古以来，各地对佩兰与泽兰就常有混淆现象，一是由于中草药中同名异物的现象十分常见，二是草药破碎后难以以肉眼鉴别。如今，佩兰商品中伪品较多，除泽兰以外，常见的还有紫茎泽兰、华泽兰以及轮叶泽兰等。为确保医疗效果和用药安全，佩兰的快递低价鉴别有着非常重要的应用空间。现有技术中可通过its2条形码序列方法对佩兰及其混伪品进行分辨，但这种方法基于dna序列的扩增和测序，显然操作繁杂且成本较高。因此，发展一种快速鉴别佩兰的技术非常有必要。

综上，本发明针对上述现有技术的缺陷及市场需求，开发出一种从中药材佩兰及其混伪品中鉴别出佩兰正品的方法，该方法利用电化学知识，通过简便易行的方法实现了佩兰正品的快速鉴别。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种鉴定佩兰真伪的方法。本发明具有鉴定方法简单易行，成本低，准确度高等优点。

为了达到上述的目的，本发明采取以下技术方案：

一种鉴定佩兰真伪的方法，包括如下步骤：

(1)将待测样品的组织碎片分别加入到n种不同溶剂中进行萃取，得到n种萃取液；其中n≥2。待测样品可为佩兰及其混伪品的新鲜草药或干制草药。

(2)将n种萃取液分别用移液枪涂覆于丝网印刷电极表面，待其干燥后得到n种修饰电极。

(3)将所述n种修饰电极各自置于磷酸缓冲液中进行伏安法扫描，由n种修饰电极各自得到的多回路电化学信号构建得到待测样品的二维电化学指纹图谱。

(4)将待测样品的电化学指纹图谱与佩兰正品的标准二维电化学指纹图谱进行对比，若待测样品的电化学指纹图谱与标准图谱高相似，则待测样品为佩兰；反之，则为伪品。

优选的，所述步骤(1)中的组织碎片的质量和各溶剂的体积比为(0.1～1.5)g:(0.5～4)ml。

优选的，所述步骤(1)中的不同溶剂包括二甲基甲醯胺或甲醇。

优选的，所述步骤(2)中涂覆所用的样品量为1～5μl。

优选的，所述步骤(2)中的干燥方式为60℃加热烘干。

优选的，所述步骤(3)中的伏安扫描方式为差分脉冲伏安法扫描。

优选的，所述步骤(3)中的磷酸缓冲液是磷酸二氢钾和磷酸二氢钠的混合溶液，各自的浓度分别为0.05～0.2mol/l。

优选的，所述步骤(3)中脉冲伏安扫描的扫描区间为1.2v～-0.2v。

优选的，所述步骤(3)中二维电化学指纹图谱由任意一组差分脉冲伏安法扫描图谱的电流值作为指纹图x轴数据，另一组分脉冲伏安法扫描图谱的电流值作为指纹图y轴数据所得。

本发明提供了一种以电化学分析为基础，以佩兰及其伪品为施行对象的佩兰正品鉴别方法。用不同溶剂萃取草药样品得到不同萃取液，将其分别修饰于电极表面，待干燥后对修饰电极进行差分脉冲伏安扫描，将得到的电化学信号转化为电化学指纹图谱，通过比较待测样品和标准佩兰电化学指纹图谱是否高相似度吻合判断待测样品是否为佩兰正品。差分脉冲伏安法扫描是以线性电势或阶梯电势和幅值固定的脉冲加和为激励信号。在即将应用脉冲之前和脉冲末期，对电流进行两次取样。该种扫描方式比普通脉冲伏安扫描拥有更低的背景电流值，检测灵敏度更高，检测限更低，更适用于较低浓度的电解质环境，有利于植物中痕量物质的信号测定。

本发明具有以下技术特点：

1)本发明提供的鉴定方法简单易行，无需昂贵试剂和仪器，降低了鉴定成本。

2)本发明的鉴别方法可以对佩兰及其混伪品的鲜品和干品进行鉴别。

附图说明

图1为差分脉冲伏安法扫描所得的新鲜佩兰的标准二维电化学指纹图谱。

图2为差分脉冲伏安法扫描所得的待测新鲜佩兰的二维电化学指纹图谱。

图3为差分脉冲伏安法扫描所得的新鲜泽兰的二维电化学指纹图谱。

图4为差分脉冲伏安法扫描所得的新鲜紫茎泽兰的二维电化学指纹图谱。

图5为差分脉冲伏安法扫描所得的新鲜华泽兰的二维电化学指纹图谱。

图6为差分脉冲伏安法扫描所得的新鲜轮叶泽兰的二维电化学指纹图谱。

图7为差分脉冲伏安法扫描所得的干制佩兰的标准二维电化学指纹图谱。

图8为差分脉冲伏安法扫描所得的待测干制佩兰的二维电化学指纹图谱。

图9为差分脉冲伏安法扫描所得的干制泽兰的二维电化学指纹图谱。

图10为差分脉冲伏安法扫描所得的干制紫茎泽兰的二维电化学指纹图谱。

图11为差分脉冲伏安法扫描所得的干制华泽兰的二维电化学指纹图谱。

图12为差分脉冲伏安法扫描所得的干制轮叶泽兰的二维电化学指纹图谱。

图13为普通脉冲伏安法扫描所得的新鲜佩兰的标准二维电化学指纹图谱。

图14为普通脉冲伏安法扫描所得的待测新鲜佩兰的二维电化学指纹图谱。

具体实施方式

以下具体实施例是对本发明提供的方法与技术方案的进一步说明，但不应理解成对本发明的限制。

实施例1：对新鲜草药的检测

(1)佩兰正品标准电化学指纹图谱的构建：将新鲜中药材佩兰用剪刀剪碎成组织碎片，分别投0.5g组织碎片至2ml二甲基甲醯胺和甲醇溶液中，充分振荡后，得到两份新鲜佩兰分别在二甲基甲醯胺和甲醇中的萃取液。各取上述萃取液2μl，用移液枪分别涂覆于丝网印刷电极表面，待其自然干燥后得到2片滴加了不同萃取液的修饰电极。置于磷酸缓冲液中形成回路，经差分脉冲伏安扫描后得到两组不同的电化学信号，构建新鲜佩兰的标准二维电化学指纹图谱。结果如附图1所示。

(2)药材萃取液的制备：另取佩兰正品和4种种名已知佩兰的伪混品：泽兰、紫茎泽兰、华泽兰、轮叶泽兰。各分别取0.5g组织碎片至2ml二甲基甲醯胺和甲醇溶液中，充分振荡后，得到10份上述药材分别在二甲基甲醯胺和甲醇中的萃取液。

(3)电极修饰：各取上述萃取液2μl，用移液枪分别涂覆于丝网印刷电极表面，在60°干燥后得到10片滴加了不同萃取液的修饰电极。

(4)电化学分析：将10片修饰电极分别独立地置于磷酸缓冲液中形成回路，经差分脉冲伏安扫描后得到两组不同的电化学信号。其中，所述差分脉冲伏安扫描区间为1.2v～-0.2v；扫描速度为100mv/s；采样间隔为1mv。

每种药材均得到2种不同的电化学信号(以二甲基甲醯胺和甲醇萃取各一组)，构建各药材的二维电化学指纹图谱。结果如附图2～6所示。

将图2～6分别与图1的标准二维电化学指纹图谱对比可知，佩兰正品的电化学指纹图谱与标准图谱相似度达非常高，而佩兰混伪品的电化学指纹图谱与标准图谱相似度很小。故该实施例成功从新鲜佩兰及其混伪品中鉴别出佩兰正品。

实施例2：对干制草药的检测

(1)佩兰正品标准电化学指纹图谱的构建：取干制中药材佩兰用剪刀剪碎成组织碎片，分别投0.5g样品至2ml二甲基甲醯胺和甲醇溶液中，充分振荡后，得到两份干制佩兰分别在二甲基甲醯胺和甲醇中的萃取液。各取上述萃取液2μl，用移液枪分别涂覆于丝网印刷电极表面，待其自然干燥后得到2片滴加了不同萃取液的修饰电极。置于磷酸缓冲液中形成回路，经差分脉冲伏安扫描后得到两组不同的电化学信号，构建干制佩兰的标准二维电化学指纹图谱。结果如附图7所示。

(2)药材萃取液的制备：另取5种种名已知的干制草药：佩兰、泽兰、紫茎泽兰、华泽兰和轮叶泽兰。各分别取0.5g组织碎片至2ml二甲基甲醯胺和甲醇溶液中，充分振荡后，得到10份上述药材分别在二甲基甲醯胺和甲醇中的萃取液。

(3)电极修饰：各取上述萃取液2μl，用移液枪分别涂覆于丝网印刷电极表面，待其自然干燥后得到10片滴加了不同萃取液的修饰电极。

(4)电化学分析：将10片修饰电极分别独立地置于磷酸缓冲液中形成回路，经差分脉冲伏安扫描后得到两组不同的电化学信号。其中，所述差分脉冲伏安扫描区间为1.2v～-0.2v；扫描速度为100mv/s；采样间隔为1mv。

每种药材均得到2种不同的电化学信号(以二甲基甲醯胺和甲醇萃取各一组)，构建各药材的二维电化学指纹图谱。结果如附图8～12所示。

将图8～12分别与图7的标准二维电化学指纹图谱对比可知，佩兰正品的电化学指纹图谱与标准图谱相似度达非常高，而佩兰混伪品的电化学指纹图谱与标准图谱相似度很小。故该实施例成功从干制佩兰及其混伪品中鉴别出佩兰正品。

对比例1：用普通脉冲伏安扫描对新鲜佩兰检测

(1)佩兰正品标准电化学指纹图谱的构建：将新鲜中药材佩兰用剪刀剪碎成组织碎片，分别投0.5g组织碎片至2ml二甲基甲醯胺和甲醇溶液中，充分振荡后，得到两份新鲜佩兰分别在二甲基甲醯胺和甲醇中的萃取液。各取上述萃取液2μl，用移液枪分别涂覆于丝网印刷电极表面，待其自然干燥后得到2片滴加了不同萃取液的修饰电极。置于磷酸缓冲液中形成回路，经普通脉冲伏安扫描后得到两组不同的电化学信号，构建新鲜佩兰的标准二维电化学指纹图谱。结果如附图13所示。

(2)药材萃取液的制备：另取0.5g佩兰正品组织碎片至2ml二甲基甲醯胺和甲醇溶液中，充分振荡后，得到2份佩兰分别在二甲基甲醯胺和甲醇中的萃取液。

(3)电极修饰：各取上述萃取液2μl，用移液枪分别涂覆于丝网印刷电极表面，在60°干燥后得到2片滴加了不同萃取液的修饰电极。

(4)电化学分析：将2片修饰电极分别独立地置于磷酸缓冲液中形成回路，经普通脉冲伏安扫描后得到两组不同的电化学信号。其中，所述普通脉冲伏安扫描区间为1.2v～-0.2v；扫描速度为100mv/s；采样间隔为1mv。

用所得的2种不同的电化学信号(以二甲基甲醯胺和甲醇萃取各一组)，构建各药材的二维电化学指纹图谱。结果如附图14所示。

将图13和14与实施例1中的图1和2进行对比可知，对于同一种植物，利用差分脉冲伏安扫描获取的电化学指纹图谱的差异性比普通脉冲伏安扫描获取的电化学指纹图要小，因此，差分脉冲伏安扫描在植物识别中拥有更高的准确性。

由以上实施例可知，本发明提供了一种以电化学分析为基础，以佩兰及其混伪品为施行对象的佩兰正品鉴别方法。用不同溶剂萃取药材得到不同提取物，将提取物修饰于电极表面，对修饰过的电极进行脉冲伏安扫描，将得到的电化学信号转化为多维电化学图谱，通过比较样品的电化学指纹图谱与标准电化学指纹图谱是否一致，判断所测样品是否是佩兰正品。本发明提供的鉴定方法简便易行，能快速从佩兰及其混伪品中筛选出佩兰正品。

以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求保护范围内。