本发明属于啤酒酿造领域，具体涉及啤酒大麦、绿麦芽、麦芽中内源性及外源赤霉酸的检测方法。
背景技术：
作为啤酒的主要原料之一，啤酒麦芽的制备是通过调控水量、温度、时间、氧量、添加剂五大要素，打破啤酒大麦种子休眠进而进行萌发生长的过程。工艺流程简单，但五大要素的作用复杂，既有自身的独特的作用，又相互影响。而不同的品种、同一品种不同麦季、不同产区的啤酒大麦对这五大要素的要求各不相同。制麦师在制麦过程需要根据品种特征、制麦表现，不断调整这五大要素，平衡各工艺条件，进而得到理想的麦芽指标。
从植物生理学的角度看，制麦过程中的植物生理调节离不开对其生长发育有重要调节控制作用的植物激素，制麦过程符合植物生长的规律。植物内源激素是由植物自身代谢产生的一类有机物质，并自产生部位移动到作用部位，在极低浓度下就有明显的生理效应的微量物质，也被称为植物天然激素。而人工合成的对植物的生长发育有调节作用、具植物激素活性的物质称为植物生长调节剂或植物外源激素。在大麦种子萌发的过程中，大麦种子里共存的多种植物激素中，主要是赤霉素类在刺激其生长，制麦过程的绿麦芽中常含有内源性赤霉酸及外源赤霉酸两种赤霉素类。
目前，赤霉酸的检测方法主要有酶联免疫法、分光光度计法、薄层荧光法和气相色谱法等。但上述方法很难将啤酒大麦中内源性赤霉酸及外源赤霉酸分离并分别定量。
技术实现要素：
本发明的目的是：提供一种啤酒大麦中内源性及外源赤霉酸的检测方法。
为了实现上述目的，本发明选择啤酒大麦为原料，通过选择性、灵敏度、检出限、定量限、线性范围、精密度、回收率等试验，建立了啤酒大麦中赤霉酸的检测方法。
具体来说，啤酒大麦、绿麦芽、麦芽中赤霉酸的检测方法是这样的：
选择5g～50g大麦、绿麦芽、麦芽样品，经乙腈-水中乙腈体积比为0％～80％的提取液中20℃～40℃超声、震荡提取20min～60min，经净化(离心、过滤)、固相萃取浓缩处理后，经液质联用仪检测赤霉酸含量。
具体来说，采用液质联用仪检测赤霉酸的检测条件是：两个离子对质谱方法：①母离子345.17，定性子离子239.22，c44,ce14(定量)；②母离子345.17，定量子离子143.14，c44，ce24；有机相：甲醇、乙腈；有机相体积比：10％～90％；流动相流速：0.3ml/min～0.5ml/min。
该检测条件快速、灵敏，仪器检测时长3min～10min，能将本项目需要的内源性赤霉酸与其它的外源赤霉酸分离并分别定量。
本发明提供的啤酒大麦、绿麦芽、麦芽中赤霉酸的检测方法，处理简单、耗时短、化学试剂用量少，保障检测人员安全、环境安全，有效节约成本，仪器选择性、灵敏度高，能区分检测出内源性赤霉酸及外源赤霉酸，方法检出限0.5μg/kg，两次独立测定结果的绝对差值<15％，加标回收率90％～110％。
具体实施方式
实施例1
检测啤酒大麦品种a中的赤霉酸含量
选择10g啤酒大麦样品，经乙腈-水中乙腈体积比为30％的提取液中20℃超声、震荡提取30min，经净化(离心、过滤)、固相萃取浓缩处理后，经液质联用仪检测赤霉酸含量。
采用液质联用仪检测赤霉酸的检测条件是：两个离子对质谱方法：①母离子345.17，定性子离子239.22，c44,ce14(定量)；②母离子345.17，定量子离子143.14，c44，ce24；有机相：甲醇、乙腈；有机相体积比：20％；流动相流速：0.3ml/min。
检测出大麦品种a中内源性赤霉酸的含量为90ppb，外源赤霉酸的含量为0ppb。
实施例2
检测啤酒大麦品种b中的赤霉酸含量
选择20g啤酒大麦样品，经乙腈-水中乙腈体积比为50％的提取液中20℃超声、震荡提取40min，经净化(离心、过滤)、固相萃取浓缩处理后，经液质联用仪检测赤霉酸含量。
采用液质联用仪检测赤霉酸的检测条件是：两个离子对质谱方法：①母离子345.17，定性子离子239.22，c44,ce14(定量)；②母离子345.17，定量子离子143.14，c44，ce24；有机相：甲醇、乙腈；有机相体积比：50％；流动相流速：0.5ml/min。
检测出大麦品种b中内源性赤霉酸的含量为130ppb，外源赤霉酸含量为0ppb。
实施例3
检测啤酒大麦品种a绿麦芽中赤霉酸的含量
1、预处理
大生产或模拟大生产系统，将啤酒大麦品种a发芽成为绿麦芽，发芽过程添加50ppb外源赤霉酸。
2、检测赤霉酸含量
选择30g发芽后的绿麦芽样品，经乙腈-水中乙腈体积比为60％的提取液中20℃超声、震荡提取60min，经净化(离心、过滤)、固相萃取浓缩处理后，经液质联用仪检测赤霉酸含量。
采用液质联用仪检测赤霉酸的检测条件是：两个离子对质谱方法：①母离子345.17，定性子离子239.22，c44,ce14(定量)；②母离子345.17，定量子离子143.14，c44，ce24；有机相：甲醇、乙腈；有机相体积比：60％；流动相流速：0.5ml/min。
检测出绿麦芽中内源性赤霉酸的含量为250ppb，外源赤霉酸的含量为50ppb。
实施例4
检测啤酒大麦品种b绿麦芽中赤霉酸的含量
1、预处理
大生产或模拟大生产系统，将啤酒大麦品种b发芽成为绿麦芽，发芽过程添加20ppb外源赤霉酸。
2、检测赤霉酸含量
选择5g发芽后的绿麦芽样品，经乙腈-水中乙腈体积比为10％的提取液中30℃超声、震荡提取30min，经净化(离心、过滤)、固相萃取浓缩处理后，经液质联用仪检测赤霉酸含量。
采用液质联用仪检测赤霉酸的检测条件是：两个离子对质谱方法：①母离子345.17，定性子离子239.22，c44,ce14(定量)；②母离子345.17，定量子离子143.14，c44，ce24；有机相：甲醇、乙腈；有机相体积比：90％；流动相流速：0.4ml/min。
检测出绿麦芽中内源性赤霉酸的含量为350ppb，外源赤霉酸的含量为20ppb。
实施例5
检测啤酒大麦品种a麦芽中赤霉酸的含量
1、预处理
啤酒大麦经大生产或模拟大生产系统，经浸麦、发芽、干燥制成麦芽，制麦过程添加80ppb外源赤霉酸。
2、检测赤霉酸含量
选择15g麦芽样品，经乙腈-水中乙腈体积比为30％的提取液中35℃超声、震荡提取50min，经净化(离心、过滤)、固相萃取浓缩处理后，经液质联用仪检测赤霉酸含量。
采用液质联用仪检测赤霉酸的检测条件是：两个离子对质谱方法：①母离子345.17，定性子离子239.22，c44,ce14(定量)；②母离子345.17，定量子离子143.14，c44，ce24；有机相：甲醇、乙腈；有机相体积比：70％；流动相流速：0.3ml/min。
由于制麦过程损失，最终检测出成品麦芽中内源性赤霉酸的含量为20ppb，外源赤霉酸的含量为20ppb。
实施例6
检测啤酒大麦品种b麦芽中赤霉酸的含量
1、预处理
啤酒大麦经大生产或模拟大生产系统，经浸麦、发芽、干燥制成麦芽，制麦过程无添加外源赤霉酸。
2、检测赤霉酸含量
选择8g麦芽样品，经乙腈-水中乙腈体积比为20％的提取液中25℃超声、震荡提取40min，经净化(离心、过滤)、固相萃取浓缩处理后，经液质联用仪检测赤霉酸含量。
采用液质联用仪检测赤霉酸的检测条件是：两个离子对质谱方法：①母离子345.17，定性子离子239.22，c44,ce14(定量)；②母离子345.17，定量子离子143.14，c44，ce24；有机相：甲醇、乙腈；有机相体积比：80％；流动相流速：0.4ml/min。
由于制麦过程损失，最终检测出成品麦芽中内源性赤霉酸的含量为30ppb，外源赤霉酸的含量为0ppb。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。