一种检测煎炸油中PhIP含量的方法与流程

本发明创造属于食品加工控制领域，具体涉及一种检测煎炸油中phip含量的技术。

背景技术：

phip(2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo[4，5-b]pyridine)全称2-氨基-1-甲基-6-苯基-咪唑[4，5-b]吡啶，属于杂环胺的一种。人体摄入会诱发多种癌症，对人体健康有极大的危害。杂环胺按结构可以分两种，其一是：氨基咪唑氮杂芳烃(aminoimidazoazarenes)或热聚合杂环胺(thermichaas)，还称为iq类型(imidazoquinolineorimidazoquinoxalinetype)杂环胺；其二是：咔啉(carbolines)或热解杂环胺(pyrolytichaas)，还称为非iq类型(nonimidazoquinolineornon-imidazoquinoxalinetype)杂环胺，其中氨基咪唑氮杂芳烃又可以分为3类：吡啶类(imidazopyridinederivatives)，主要有phip、4’-oh-phip、dmip和1，5，6-tmip等；喹喔啉类(imidazoquinoxalinederivatives)，主要包括iqx、meiqx、dimeiqx和trimeiqx喹啉类(imidazoquinolinederivatives)，包括iq、meiq和iq[4，5-b]等。咔啉类杂环胺也又可分为α-咔啉类化合物(α-carbolines)，包括aαc和meaαc；β-咔啉类化合物(β-carbolines)，包括harman和norharman；γ-咔啉类化合物(γ-carbolines)，包括trp-p-1和trp-p-2；δ-咔啉类化合物(δ-carbolines)，包括glu-p-1和glu-p-2；另外还有一些其他的热解型杂环胺化合物，包括orn-p-1，phe-p-1和cre-p-1等。

油炸作为一种传统的食品加工方法，因其能赋予食品独特的风味和口感而倍受人们的喜爱。但油炸食品在高含量油脂和高温加工条件下，食品组分会通过发生复杂的化学反应而产生如杂环胺、丙烯酰胺等危害物，这些危害物会迁移到油中，使用二次煎炸油进行反复油炸时，phip的含量可能会越来越高，会给人们的健康造成潜在的危害。因此，有效检测煎炸油中phip的含量具有非常重要的意义。

技术实现要素：

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。鉴于上述和或现有检测煎炸油中phip含量的技术空白，提出了本发明。因此，本发明目的是提供一种检测煎炸油中phip含量的方法。为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案一种检测煎炸油中phip含量的方法，包括，

对样品进行前处理

采用液相色谱质谱联用仪进行检测。

所述液相色谱条件为，

色谱柱zorbaxeclipseplusc18柱；

柱温为20～30℃；

流动相中有机相包括乙腈，水相包括甲酸铵；

流速为0.2～0.3ml/min；

所述质谱条件为，

离子源：esi；

雾化气：氮气；

碰撞气：氮气；

雾化气压力：30～50pas；

作为本发明所述检测煎炸油中phip含量的方法的一种优选方案，其中所述对样品进行前处理，是在3～6g煎炸油中加入6～10ml正丁醇涡旋混合5～10min，活化丙磺酸固相萃取柱后上样洗脱，串联c18固相萃取柱后上样洗脱，氮吹后复溶，得到处理好后的样品。

作为本发明所述检测煎炸油中phip含量的方法的一种优选方案，所述丙磺酸活化固相萃取柱，其是采用色谱甲醇、盐酸水溶液、正丁醇对固相萃取小柱进行活化。

作为本发明所述检测煎炸油中phip含量的方法的一种优选方案，所述丙磺酸固萃柱上样洗脱，其是丙磺酸固相萃取活化后，将涡旋均匀的煎炸油-正丁醇溶液上样，随后分别用盐酸水溶液和盐酸-甲醇溶液淋洗萃取柱，最后采用10～20ml的乙酸铵-甲醇溶液对柱填料中的phip进行洗脱。

作为本发明所述检测煎炸油中phip含量的前处理方法的一种优选方案，所述c18固萃柱上样洗脱，其是从c18固相萃取柱甲醇和水活化后，将权利要求8中的洗脱液上样，随后分别用超纯水淋洗萃取柱，最后采用2～3ml氨水-甲醇混合液对柱填料中的phip进行洗脱。

作为本发明所述检测煎炸油中phip含量的液相方法的一种优选方案，所述甲酸铵为10mmol/l的甲酸铵，其ph＝3.4～3.6之间。

本发明所具有的有益效果：

通过本发明提供提供了检测煎炸油中phip的前处理方法、液相色谱条件及优化的质谱参数，并成功应用于检测大豆油、花生油、棕榈油和葵花籽油中的phip含量，得到高达90～105％的回收率，因此能够准确定量煎炸油中phip的含量。

本发明提供的煎炸油中phip含量的检测方法，操作简单，精度高，速度快，具有广泛的应用前景。

附图说明

图1大豆油中添加0、50μg/l、100μg/l、250μg/l的phip标品时检测的phip的含量。

图2花生油中添加0、50μg/l、100μg/l、250μg/l的phip标品时检测的phip的含量。

图3棕榈油中添加0、50μg/l、100μg/l、250μg/l的phip标品时检测的phip的含量。

图4葵花籽油中添加0、50μg/l、100μg/l、250μg/l的phip标品时检测的phip的含量。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。

其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。

实施例1

phip的提取：

准确称取3.00g的大豆油于哈希管中，分别加入浓度为5mg/l，10mg/l，25mg/l的phip标准液10μl，添加水平分别为50μg/l、100μg/l、250μg/l，加入7ml正丁醇涡旋混合5min。

下一步进行丙磺酸固相萃取柱萃取：首先用8ml甲醇进行活化，调节流速为1～2d/s，待其将滴干时，加入8ml0.1mol/l盐酸：水(v/v＝1:1)溶液和6ml正丁醇溶液。随后将正丁醇样品溶液进行上样，将制备好的样品溶液和5ml润洗液加入柱内，调节流速为2-3s每滴，保证样品溶液尽可能全部吸附在柱内填料上。待柱内样品样品滴净后，用5ml0.01mol/l盐酸溶液和5ml0.1mol/l盐酸：甲醇(v/v＝9:1)溶液淋洗小柱，除去固萃小柱上的杂质，待柱内液体滴干后，用真空泵抽干。最后用15ml乙酸铵(1.5mol/l，氨水调节ph至9.0)/甲醇(v/v＝9:1)溶液将吸附在si-scx-2的样品洗脱到试管内，待柱内溶液滴干后，使用真空泵将其抽干。

然后进行c18柱串联固相萃取：

首先分别加6ml甲醇和6ml水对c18固萃柱进行活化和平衡，调节流速为1～2d/s。然后将丙磺酸固萃柱的洗脱液加入活化好的c18小柱上，控制流速为每2～3s每滴，确保目标物更好的吸附在c18固萃柱上。随后加入10ml超纯水淋洗固相萃取小柱，洗去填料上吸附的杂质，待水滴干后，用真空泵将固萃柱抽干。

最后用2.5ml甲醇/氨水(v/v＝9:1)溶液将吸附在c18小柱上的phip洗脱下来，抽干。

最后将c18固萃柱的洗脱液用高纯氮气吹干，然后用1ml色谱级的甲醇将样品复溶，最后过0.22μm的有机微孔滤膜，置于1.5ml进样小瓶中，待仪器分析。

液质联用检测：

仪器：agilent6410三重四级杆质谱(esi源)

色谱柱：zorbaxeclipseplusc18柱，2.1*150mm，3.5μm；

柱温：27℃

分析时间：16min；后运行时间：12min；

流动相：a：10mmol/l甲酸铵(用甲酸调ph至3.45)，b：乙腈。

流速为0.25ml/min；

进样量为1μl；

所述质谱条件为，

离子源：esi；

雾化气：氮气；

碰撞气：氮气；

雾化气压力：45pas；

毛细管电压：4000v；

干燥气温度：350℃；

干燥气流量：10l/min；

检测模式：多反应检测(mrm)；

扫描模式：正离子扫描；

驻留时间：80ms；

phip的质谱跃迁模式为：m/z225.3→m/z210。

检测结果见说明书附图1。

实施例2

phip的提取：

准确称取3.00g的花生油于哈希管中，分别加入浓度为5mg/l，10mg/l，25mg/l的phip标准液10μl，添加水平分别为50μg/l、100μg/l、250μg/l，加入7ml正丁醇涡旋混合5min。

下一步进行丙磺酸固相萃取柱萃取：首先用8ml甲醇进行活化，调节流速为1～2d/s，待其将滴干时，加入8ml0.1mol/l盐酸：水(v/v＝1:1)溶液和6ml正丁醇溶液。随后将正丁醇样品溶液进行上样，将制备好的样品溶液和5ml润洗液加入柱内，调节流速为2-3s每滴，保证样品溶液尽可能全部吸附在柱内填料上。待柱内样品样品滴净后，用5ml0.01mol/l盐酸溶液和5ml0.1mol/l盐酸：甲醇(v/v＝9:1)溶液淋洗小柱，除去固萃小柱上的杂质，待柱内液体滴干后，用真空泵抽干。最后用15ml乙酸铵(1.5mol/l，氨水调节ph至9.0)/甲醇(v/v＝9:1)溶液将吸附在si-scx-2的样品洗脱到试管内，待柱内溶液滴干后，使用真空泵将其抽干。

然后进行c18柱串联固相萃取

首先分别加6ml甲醇和6ml水对c18固萃柱进行活化和平衡，调节流速为1～2d/s。然后将丙磺酸固萃柱的洗脱液加入活化好的c18小柱上，控制流速为每2～3s每滴，确保目标物更好的吸附在c18固萃柱上。随后加入10ml超纯水淋洗固相萃取小柱，洗去填料上吸附的杂质，待水滴干后，用真空泵将固萃柱抽干。

最后用2.5ml甲醇/氨水(v/v＝9:1)溶液将吸附在c18小柱上的phip洗脱下来，抽干。

最后将c18固萃柱的洗脱液用高纯氮气吹干，然后用1ml色谱级的甲醇将样品复溶，最后过0.22μm的有机微孔滤膜，置于1.5ml进样小瓶中，待仪器分析。

液质联用检测：

仪器：agilent6410三重四级杆质谱(esi源)

色谱柱：zorbaxeclipseplusc18柱，2.1*150mm，3.5μm；

柱温：27℃

分析时间：16min；后运行时间：12min；

流动相：a：10mmol/l甲酸铵(用甲酸调ph至3.45)，b：乙腈。

流速为0.25ml/min；

进样量为1μl；

所述质谱条件为，

离子源：esi；

雾化气：氮气；

碰撞气：氮气；

雾化气压力：45pas；

毛细管电压：4000v；

干燥气温度：350℃；

干燥气流量：10l/min；

检测模式：多反应检测(mrm)；

扫描模式：正离子扫描；

驻留时间：80ms；

phip的质谱跃迁模式为：m/z225.3→m/z210。

检测结果见说明书附图2。

实施例3

phip的提取：

准确称取3.00g的棕榈油于哈希管中，分别加入浓度为5mg/l，10mg/l，25mg/l的phip标准液10μl，添加水平分别为50μg/l、100μg/l、250μg/l，加入7ml正丁醇涡旋混合5min。

下一步进行丙磺酸固相萃取柱萃取：首先用8ml甲醇进行活化，调节流速为1～2d/s，待其将滴干时，加入8ml0.1mol/l盐酸：水(v/v＝1:1)溶液和6ml正丁醇溶液。随后将正丁醇样品溶液进行上样，将制备好的样品溶液和5ml润洗液加入柱内，调节流速为2-3s每滴，保证样品溶液尽可能全部吸附在柱内填料上。待柱内样品样品滴净后，用5ml0.01mol/l盐酸溶液和5ml0.1mol/l盐酸：甲醇(v/v＝9:1)溶液淋洗小柱，除去固萃小柱上的杂质，待柱内液体滴干后，用真空泵抽干。最后用15ml乙酸铵(1.5mol/l，氨水调节ph至9.0)/甲醇(v/v＝9:1)溶液将吸附在si-scx-2的样品洗脱到试管内，待柱内溶液滴干后，使用真空泵将其抽干。

然后进行c18柱串联固相萃取

首先分别加6ml甲醇和6ml水对c18固萃柱进行活化和平衡，调节流速为1～2d/s。然后将丙磺酸固萃柱的洗脱液加入活化好的c18小柱上，控制流速为每2～3s每滴，确保目标物更好的吸附在c18固萃柱上。随后加入10ml超纯水淋洗固相萃取小柱，洗去填料上吸附的杂质，待水滴干后，用真空泵将固萃柱抽干。

最后用2.5ml甲醇/氨水(v/v＝9:1)溶液将吸附在c18小柱上的phip洗脱下来，抽干。最后将c18固萃柱的洗脱液用高纯氮气吹干，然后用1ml色谱级的甲醇将样品复溶，最后过0.22μm的有机微孔滤膜，置于1.5ml进样小瓶中，待仪器分析。

液质联用检测：

仪器：agilent6410三重四级杆质谱(esi源)

色谱柱：zorbaxeclipseplusc18柱，2.1*150mm，3.5μm；

柱温：27℃

分析时间：16min；后运行时间：12min；

流动相：a：10mmol/l甲酸铵(用甲酸调ph至3.45)，b：乙腈。

流速为0.25ml/min；

进样量为1μl；

所述质谱条件为，

离子源：esi；

雾化气：氮气；

碰撞气：氮气；

雾化气压力：45pas；

毛细管电压：4000v；

干燥气温度：350℃；

干燥气流量：10l/min；

检测模式：多反应检测(mrm)；

扫描模式：正离子扫描；

驻留时间：80ms；

phip的质谱跃迁模式为：m/z225.3→m/z210。

检测结果见说明书附图3。

实施例4

phip的提取：

准确称取3.00g的葵花籽油于哈希管中，分别加入浓度为5mg/l，10mg/l，25mg/l的phip标准液10μl，添加水平分别为50μg/l、100μg/l、250μg/l，加入7ml正丁醇涡旋混合5min。

下一步进行丙磺酸固相萃取柱萃取：首先用8ml甲醇进行活化，调节流速为1～2d/s，待其将滴干时，加入8ml0.1mol/l盐酸：水(v/v＝1:1)溶液和6ml正丁醇溶液。随后将正丁醇样品溶液进行上样，将制备好的样品溶液和5ml润洗液加入柱内，调节流速为2-3s每滴，保证样品溶液尽可能全部吸附在柱内填料上。待柱内样品样品滴净后，用5ml0.01mol/l盐酸溶液和5ml0.1mol/l盐酸：甲醇(v/v＝9:1)溶液淋洗小柱，除去固萃小柱上的杂质，待柱内液体滴干后，用真空泵抽干。最后用15ml乙酸铵(1.5mol/l，氨水调节ph至9.0)/甲醇(v/v＝9:1)溶液将吸附在si-scx-2的样品洗脱到试管内，待柱内溶液滴干后，使用真空泵将其抽干。

然后进行c18柱串联固相萃取

首先分别加6ml甲醇和6ml水对c18固萃柱进行活化和平衡，调节流速为1～2d/s。然后将丙磺酸固萃柱的洗脱液加入活化好的c18小柱上，控制流速为每2～3s每滴，确保目标物更好的吸附在c18固萃柱上。随后加入10ml超纯水淋洗固相萃取小柱，洗去填料上吸附的杂质，待水滴干后，用真空泵将固萃柱抽干。最后用2.5ml甲醇/氨水(v/v＝9:1)溶液将吸附在c18小柱上的phip洗脱下来，抽干。

最后将c18固萃柱的洗脱液用高纯氮气吹干，然后用1ml色谱级的甲醇将样品复溶，最后过0.22μm的有机微孔滤膜，置于1.5ml进样小瓶中，待仪器分析。

液质联用检测：

仪器：agilent6410三重四级杆质谱(esi源)

色谱柱：zorbaxeclipseplusc18柱，2.1*150mm，3.5μm；

柱温：27℃

分析时间：16min；后运行时间：12min；

流动相：a：10mmol/l甲酸铵(用甲酸调ph至3.45)，b：乙腈。

流速为0.25ml/min；

进样量为1μl；

所述质谱条件为，

离子源：esi；

雾化气：氮气；

碰撞气：氮气；

雾化气压力：45pas；

毛细管电压：4000v；

干燥气温度：350℃；

干燥气流量：10l/min；

检测模式：多反应检测(mrm)；

扫描模式：正离子扫描；

驻留时间：80ms；

phip的质谱跃迁模式为：m/z225.3→m/z210。

检测结果见说明书附图3。

实施例5

将实施例1～4测得的phip的含量整理，得下表不同油脂体系中phip的回收率。

以上所述仅为本发明创造的较佳实施例而已，并不用以限制本发明创造，凡在本发明创造的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明创造的保护范围之内。