一种度骨化醇残留溶剂的检测方法与流程

本发明属于药物分析技术领域，尤其涉及一种气相色谱检测度骨化醇中甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、异丙醇、甲醇、环己烷残留的检测方法。

背景技术：

气相色谱分析方法是用气体作为流动相的色谱法，具有使用范围广、分离效率高等特点，近几年来被广泛应用于药物的残留有机溶剂的测定。

度骨化醇是一种维生素d2类似物，为fda批准用于骨质疏松症、继发性甲状旁腺功能亢进症(shpt)、3到4级慢性肾病患者的shpt等的新药。

根据ich指南的要求：甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、异丙醇、甲醇和环己烷的残留限度为0.5％、0.5％、0.5％、0.3％、0.388％，因此，度骨化醇中甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、异丙醇、甲醇和环己烷的测定对于度骨化醇的质量、患者的健康方面均具有重要的意义。

技术实现要素：

本发明的目的在于公开一种度骨化醇残留溶剂的检测方法，用以检测度骨化醇中甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、异丙醇、甲醇和环己烷残留量，实现检测的连续性，提高检测的准确度及重复性。

为实现上述发明目的，本发明提供了一种度骨化醇残留溶剂的检测方法，包括以下步骤：

步骤一：取甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、异丙醇、甲醇、环己烷适量，加入n,n-二甲基甲酰胺稀释制成对照品储备液；取对照品储备液适量加入n,n-二甲基甲酰胺稀释，制成对照品溶液；

步骤二：取度骨化醇适量加入n,n-二甲基甲酰胺稀释，制成供试品溶液；

步骤三：取对照品溶液和供试品溶液分别在气相色谱仪中进行气相色谱测定，记录色谱图，记录甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、异丙醇、甲醇和环己烷的峰面积；

步骤四：所述步骤三中的进样检测顺序为：以第一针空白样，接着连续三针对照品溶液，最后一针供试品溶液的进样顺序依次进样检测；

步骤五：度骨化醇中残留溶剂的限度测定按以下公式计算：

式中：

a样—供试品溶液中残留溶剂的峰面积，

a标—对照品溶液中溶剂的峰面积，

c样—供试品溶液中度骨化醇的浓度，g/ml，

c标—对照品溶液中溶剂的浓度，g/ml。

作为本发明的进一步改进，取所述甲基叔丁基醚50mg、乙酸乙酯50mg、异丙醇50mg、甲醇30mg和环己烷38.8mg至10ml容量瓶中，加入n,n-二甲基甲酰胺稀释，制成对照品储备液；取对照品储备液500μl至10ml容量瓶中，加入n,n-二甲基甲酰胺稀释，制成对照品溶液。

作为本发明的进一步改进，取所述度骨化醇0.5g至10ml容量瓶中，加入n,n-二甲基甲酰胺稀释，制成供试品溶液。

作为本发明的进一步改进，所述气相色谱测定条件为：采用db-624毛细管柱，规格为60m*0.32mm*1.8um；色谱条件为：气化温度为250℃，氢气流量：40ml/min；空气流量：400ml/min，检测器温度为250℃，分流比为20:1，进样体积为1.0ul。

作为本发明的进一步改进，所述气相色谱采用的气相色谱仪为：岛津gc-2010plus，labsolution工作站，色谱柱为db-624毛细管柱，配有氢火焰离子化检测器。

作为本发明的进一步改进，所述气相色谱柱温采用程序升温，初始温度40℃，保持5min，再以8℃/min升到170℃，保持10min。

作为本发明的进一步改进，所述步骤四中连续进样的针数不超过十针。

作为本发明的进一步改进，述步骤四中连续进样的针数超过十针的，每十针之间再交叉进一针对照品溶液。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明采用气相色谱检测度骨化醇中甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、异丙醇、甲醇、环己烷残留的方法，针对性优化了检测色谱条件，在保证理论踏板、分离度均良好的情况下，将多个残留置于一个系统中检测，大大提高了检测效率；同时，针对性优化了检测色谱条件，使有机溶剂均达到了完全分离，在所考察范围内线性关系良好；该方法灵敏度、准确度均达到了有机溶剂残留量的检测要求，适用于度骨化醇原料药中残留荣甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、异丙醇、甲醇、环己烷的检测。

附图说明

图1为对照品溶液的气相色谱图；

图2为供试品溶液的气相色谱图。

具体实施方式

下面结合附图所示的各实施方式对本发明进行详细说明，但应当说明的是，这些实施方式并非对本发明的限制，本领域普通技术人员根据这些实施方式所作的功能、方法、或者结构上的等效变换或替代，均属于本发明的保护范围之内。

除非说明书中有特殊说明，本发明中的各个实施例中的组分、原料均采用分析纯级别。另外，各实施例中的“g”为重量单位“克”；“min”为时间单位“分钟”；“ml”为体积单位“毫升”。

本发明提供了一种度骨化醇残留溶剂的检测方法，采用的气相色谱仪：岛津gc-2010plus，labolution工作站，色谱柱为db-624毛细管柱，配有氢火焰离子化检测器；包括如下几个步骤：

步骤一：取所述甲基叔丁基醚50mg、乙酸乙酯50mg、异丙醇50mg、甲醇30mg和环己烷38.8mg至10ml容量瓶中，加入n,n-二甲基甲酰胺稀释，制成对照品储备液；取对照品储备液500μl至10ml容量瓶中，加入n,n-二甲基甲酰胺稀释，制成对照品溶液。

步骤二：取所述度骨化醇0.5g至10ml容量瓶中，加入n,n-二甲基甲酰胺稀释，制成供试品溶液。

步骤三：取对照品溶液和供试品溶液分别在气相色谱仪中进行气相色谱测定，记录色谱图，记录甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、异丙醇、甲醇和环己烷的峰面积。

步骤四：所述步骤三中的进样检测顺序为：以第一针空白样，接着连续三针对照品溶液，最后一针供试品溶液的进样顺序依次进样检测；

步骤五：度骨化醇中残留溶剂的限度测定按以下公式计算：

式中：

a样—供试品溶液中残留溶剂的峰面积，

a标—对照品溶液中溶剂的峰面积，

c样—供试品溶液中度骨化醇的浓度，g/ml，

c标—对照品溶液中溶剂的浓度，g/ml。

结果检验

由图1可知，对照品溶液中甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、异丙醇、甲醇、环己烷的峰面积a标分别为：229082、179183、201971、95765、257119。

由图2可知，供试品溶液中甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、异丙醇、环己烷未检出，甲醇的峰面积a样为：1617。

实验中，对照品溶液中甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、异丙醇、甲醇、环己烷的浓度c标为：2.3×10-4g/ml、2.7×10-4g/ml、2.3×10-4g/ml、1.8×10-4g/ml、1.7×10-4g/ml。

供试品溶液中甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、异丙醇、甲醇、环己烷的浓度c样为：516×10-4g/ml。

根据公式计算出残留溶剂甲醇含量为0.0059％，未检测到残留溶剂甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、异丙醇、环己烷，符合ich指南的要求。

上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施方式的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施方式或变更均应包含在本发明的保护范围之内。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。