本发明涉及刚果红的检测领域，尤其涉及刚果红定性半定量试纸测定方法及其试纸的制备方法。
背景技术：
刚果红又名直接发红4b，由联苯胺双重氮化、与1-氨基萘-4-磺酸偶合而成，属于典型的偶氮染料，一般用于医学临床诊断、生物染色及化学指示剂等；研究发现其具有一定的致癌性，欧盟等国家禁止其在食品中使用；工业染料由于着色力强、坚牢度大而且价格低廉而被一些商家大量使用，食品安全事件频发；gb2760-2011中明确规定了食品中禁止添加工业染料，由于苏丹红、罗丹明b、碱性橙的检测方法已比较成熟，商贩可能开始转移使用其他红色类工业染料；刚果红价格便宜，着色效果好，被越来越广泛地非法添加到食品中；因此，建立一种简单、灵敏、快速的检测食品中非法添加刚果红染料的方法势在必行。
关于纺织物和印染废水中刚果红的检测已有一些研究，但食品中刚果红的非法添加的检测方法鲜有报道；目前食品中工业染料的检测方法主要是液相色谱法和液相色谱-质谱联用法，也有用超高液相色谱法，整体来说前期处理比较复杂，后期的分析费用高，受仪器、操作者和时空限制比较大；寻求一种广谱、操作简便、准确、快速的样品检测方法将满足快检和条件不足的分析地区的需求。
技术实现要素：
本发明的目的是提供刚果红定性半定量试纸测定方法及其试纸的制备方法，采用双显色的方式，实现定性和更精准的定量，具有广谱、操作简便、准确、快速的特点。
为了实现以上目的，本发明采用的技术方案为：一种刚果红定性半定量试纸测定的试纸的制备方法，包括如下步骤：
1)试纸质量的优选：选择对十六烷基三甲基溴化铵（ctab）和溴化十六烷基吡啶（cpb）具有良好吸收，且显色效果好的试纸；
2)浸泡：将选择好的试纸放入一定浓度的ctab溶液或cpb溶液中浸泡；
3)晾干：将充分吸收了ctab溶液或cpb溶液的试纸进行滴挂，在自然通风状态下晾干，得到刚果红定性半定量试纸测定的试纸；
4)储存：常温放入塑料袋中防潮储存；
5)橙色标准比色卡的制作：将前期处理好的试纸剪裁成长条形；以一系列浓度的刚果红标准溶液按照次序滴一滴到测试试纸上，晾干，得到ctab或cpb橙色标准显色卡；
6)蓝色标准比色卡的制作：在晾干的橙色标准显色卡上滴加一滴浓度为1~14mol/l的硫酸或1~12mol/l盐酸，显蓝色，晾干，得到蓝色标准比色卡。
优选的，晾干步骤中，试纸生产产量不大的状态可以选择自然通风状态下晾干，产量比较大的工厂可以热风30℃风干。
优选的，浸泡步骤中，浸泡液是0.05%～0.6%的ctab溶液或cpb溶液，浸泡时间为30s～30min。
优选的，橙色标准比色卡的制作中，刚果红的标准溶液为20mg/l、40mg/l、60mg/l、80mg/l、100mg/l、120mg/l、140mg/l、160mg/l、180mg/l和200mg/l。
本发明的另一个技术方案为：一种刚果红定性半定量试纸测定方法，包括如下步骤：
1）取样：取一份1.000g~5.000g食品试样，置于烧杯中；
2）去除杂质：加10ml~50ml乙醇，通风系统中挥发干后加入10ml~50ml乙醚，仍置于通风系统中挥发至干；
3）提取刚果红：加体积比为3:7或2:8的氨化乙醇溶液10ml~50ml，充分摇匀，置于离心机上离心2~10分钟；
4）测定：取上层清液加到准备好的试纸上，定量胶头滴管滴一滴，比对ctab或cpb橙色标准显色卡，初步判断刚果红的浓度；在试样橙色显色位置的中心滴加一滴浓度为1~14mol/l的硫酸或1~12mol/l盐酸，显色，进一步确认所测的溶液是刚果红及刚果红的浓度。
本发明的采用试纸显色比对测试的方式实现食品中刚果红含量的测试，并且采用ctab溶液或cpb溶液能使刚果红变橙色，然后再加入1~14mol/l的硫酸或1~12mol/l盐酸能够显蓝色的特性对食品中是否含有刚果红进行检测，检测简单，易操作，同时通过两次显色，能够排除其他物质的干扰。
具体实施方式
以下结合发明人给出的实施案例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1：
一种刚果红定性半定量试纸测定的试纸的制备方法，包括如下步骤：
1)试纸质量的优选：选择对十六烷基三甲基溴化铵（ctab）具有良好吸收，且显色效果好的试纸；
2)浸泡：将选择好的试纸放入0.05%浓度的ctab溶液中浸泡30min；
3)晾干：将充分吸收了ctab溶液的试纸进行滴挂，在自然通风状态下晾干，得到刚果红定性半定量试纸测定的ctab试纸；
实施例2：
一种刚果红定性半定量试纸测定的试纸的制备方法，包括如下步骤：
1)试纸质量的优选：选择对十六烷基三甲基溴化铵（ctab）具有良好吸收，且显色效果好的试纸；
2)浸泡：将选择好的试纸放入0.6%浓度的ctab溶液中浸泡30s；
3)晾干：将充分吸收了ctab溶液的试纸进行滴挂，热风30℃风干，得到刚果红定性半定量试纸测定的ctab试纸；
实施例3：
一种刚果红定性半定量试纸测定的试纸的制备方法，包括如下步骤：
1)试纸质量的优选：选择对十六烷基三甲基溴化铵（ctab）具有良好吸收，且显色效果好的试纸；
2)浸泡：将选择好的试纸放入0.2%浓度的ctab溶液中浸泡5min；
3)晾干：将充分吸收了ctab溶液的试纸进行滴挂，热风30℃风干，得到刚果红定性半定量试纸测定的ctab试纸；
实施例4-6，将实施例1-3中的ctab溶液更换成cpb溶液，浓度等其他条件不变，制作cpb试纸。
将实施例1-6得到的试纸剪裁成长条形；之后每个实施例得到的试纸选取10张，并分别滴入20mg/l、40mg/l、60mg/l、80mg/l、100mg/l、120mg/l、140mg/l、160mg/l、180mg/l和200mg/l的刚果红的标准溶液晾干，得到橙色标准显色卡；每个实施例都会得到10张橙色标准显色卡，经过比对发现，每个浓度刚果红标准液对应的3张吸附ctab的橙色标准显色卡显示的颜色基本一致，每个浓度刚果红标准液对应的3张吸附cpb的橙色标准显色卡显示的颜色基本一致；
每个浓度刚果红标准液对应的6张橙色标准显色卡上分别滴加一滴浓度为3mol/l的硫酸、8mol/l的硫酸、14mol/l的硫酸、3mol/l的盐酸、8mol/l的盐酸和12mol/l的盐酸，显蓝色，晾干，得到蓝色标准比色卡；经过比对发现，每个浓度刚果红标准液得到的6张蓝色标准显色卡显色的颜色基本一致。
通过上述实施例可知，对比1-6制作的试纸能够用于刚果红含量的测试，并且具有一致性的二次显色反应。
液相色谱法和液相色谱-质谱联用法对3种含有刚果红的食品试样进行刚果红浓度测定，显示3种食品试样的浓度含量分别为35mg/l、60mg/l和85mg/l，分别标记为食品试样1-3
实施例7
一种刚果红定性半定量试纸测定方法，包括如下步骤：
1）取样：取一份1.000g食品试样1，置于烧杯中；
2）去除杂质：加50ml乙醇，通风系统中挥发干后加入10ml乙醚，仍置于通风系统中挥发至干；
3）提取刚果红：加体积比为3:7的氨化乙醇溶液50ml，充分摇匀，置于离心机上离心2分钟；
4）测定：取上层清液加到实施例1-6得到的试纸上，定量胶头滴管滴一滴，比对ctab或cpb橙色标准显色卡，初步判断刚果红的浓度；在试样橙色显色位置的中心滴加一滴浓度为3mol/l的硫酸，显色，比对蓝色标准显色卡，进一步确认所测的溶液是刚果红及刚果红的浓度。
实施例8
一种刚果红定性半定量试纸测定方法，包括如下步骤：
1）取样：取一份5.000g食品试样1，置于烧杯中；
2）去除杂质：加10ml乙醇，通风系统中挥发干后加入50ml乙醚，仍置于通风系统中挥发至干；
3）提取刚果红：加体积比为2:8的氨化乙醇溶液10ml，充分摇匀，置于离心机上离心10分钟；
4）测定：取上层清液加到实施例1-6得到的试纸上，定量胶头滴管滴一滴，比对ctab或cpb橙色标准显色卡，初步判断刚果红的浓度；在试样橙色显色位置的中心滴加一滴浓度为14mol/l的硫酸，显色，比对蓝色标准显色卡，进一步确认所测的溶液是刚果红及刚果红的浓度。
实施例9
一种刚果红定性半定量试纸测定方法，包括如下步骤：
1）取样：取一份2.500g食品试样2，置于烧杯中；
2）去除杂质：加25ml乙醇，通风系统中挥发干后加入25ml乙醚，仍置于通风系统中挥发至干；
3）提取刚果红：加体积比为3:7的氨化乙醇溶液25ml，充分摇匀，置于离心机上离心6分钟；
4）测定：取上层清液加到实施例1-6得到的试纸上，定量胶头滴管滴一滴，比对ctab或cpb橙色标准显色卡，初步判断刚果红的浓度；在试样橙色显色位置的中心滴加一滴浓度为8mol/l的硫酸，显色，比对蓝色标准显色卡，进一步确认所测的溶液是刚果红及刚果红的浓度。
实施例10
一种刚果红定性半定量试纸测定方法，包括如下步骤：
1）取样：取一份1.000g食品试样2，置于烧杯中；
2）去除杂质：加50ml乙醇，通风系统中挥发干后加入10ml乙醚，仍置于通风系统中挥发至干；
3）提取刚果红：加体积比为3:7的氨化乙醇溶液50ml，充分摇匀，置于离心机上离心2分钟；
4）测定：取上层清液加到实施例1-6得到的试纸上，定量胶头滴管滴一滴，比对ctab或cpb橙色标准显色卡，初步判断刚果红的浓度；在试样橙色显色位置的中心滴加一滴浓度为3mol/l的盐酸，显色，比对蓝色标准显色卡，进一步确认所测的溶液是刚果红及刚果红的浓度。
实施例11
一种刚果红定性半定量试纸测定方法，包括如下步骤：
1）取样：取一份5.000g食品试样3，置于烧杯中；
2）去除杂质：加10ml乙醇，通风系统中挥发干后加入50ml乙醚，仍置于通风系统中挥发至干；
3）提取刚果红：加体积比为2:8的氨化乙醇溶液10ml，充分摇匀，置于离心机上离心10分钟；
4）测定：取上层清液加到实施例1-6得到的试纸上，定量胶头滴管滴一滴，比对ctab或cpb橙色标准显色卡，初步判断刚果红的浓度；在试样橙色显色位置的中心滴加一滴浓度为12mol/l的盐酸，显色，比对蓝色标准显色卡，进一步确认所测的溶液是刚果红及刚果红的浓度。
实施例12
一种刚果红定性半定量试纸测定方法，包括如下步骤：
1）取样：取一份2.500g食品试样3，置于烧杯中；
2）去除杂质：加25ml乙醇，通风系统中挥发干后加入25ml乙醚，仍置于通风系统中挥发至干；
3）提取刚果红：加体积比为3:7的氨化乙醇溶液25ml，充分摇匀，置于离心机上离心6分钟；
4）测定：取上层清液加到实施例1-6得到的试纸上，定量胶头滴管滴一滴，比对ctab或cpb橙色标准显色卡，初步判断刚果红的浓度；在试样橙色显色位置的中心滴加一滴浓度为8mol/l的盐酸，显色，比对蓝色标准显色卡，进一步确认所测的溶液是刚果红及刚果红的浓度。
对实施例7-12得到的试纸显色颜色进行比对统计，得到下述结果：
实施例7和8得到的橙色颜色位于20mg/l刚果红橙色标准显色试纸和40mg/l刚果红橙色标准显色试纸颜色之间，并且更加接近40mg/l刚果红橙色标准显色试纸颜色；得到的蓝色颜色位于20mg/l刚果红蓝色标准显色试纸和40mg/l刚果红蓝色标准显色试纸颜色之间，并且更加接近40mg/l刚果红蓝色标准显色试纸颜色；
实施例9和10得到的橙色颜色与60mg/l刚果红橙色标准显色试纸颜色基本一致，得到的蓝色颜色与60mg/l刚果红蓝色标准显色试纸颜色基本一致；
实施例11和12得到的橙色颜色位于80mg/l刚果红橙色标准显色试纸和100mg/l刚果红橙色标准显色试纸颜色之间，并且更加接近80mg/l刚果红橙色标准显色试纸颜色；得到的蓝色颜色位于80mg/l刚果红蓝色标准显色试纸和100mg/l刚果红蓝色标准显色试纸颜色之间，并且更加接近80mg/l刚果红蓝色标准显色试纸颜色；
通过以上实施例可以得出，本申请制备的试纸能够精准的反应不同浓度刚果红标准溶液的颜色及变化；本申请刚果红定性半定量试纸测定方法配合橙色标准显色试纸和蓝色标准显色试纸能够较为精准的测试出食品中的刚果红的含量。
需要说明的是，在本文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，由于文字表达的有限性，而客观上存在无限的具体结构，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进、润饰或变化，也可以将上述技术特征以适当的方式进行组合；这些改进润饰、变化或组合，或未经改进将发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均应视为本发明的保护范围。