用血糖测定仪测定枸杞中葡萄糖含量的方法与流程

本发明涉及一种测定枸杞中葡萄糖含量的方法，尤其涉及一种用血糖测定仪测定枸杞中葡萄糖含量的方法。

背景技术：

枸杞为茄科植物宁夏枸杞lyciumbarbaruml.的干燥成熟果实，具有滋补肝肾，益精明目的功效，在调节免疫、抗衰老、抗肿瘤、降低血脂和血糖等方面表现出广阔的应用前景，主产于宁夏、青海、甘肃、内蒙、新疆等干旱和半干旱地区，是我国西部地区重要的特色药用植物资源之一。近年来，随着对枸杞的化学成分及生物活性认识和研究的深入，以及人们保健意识的加强，枸杞的开发利用不再限于它的药用价值，而更多地着眼于枸杞广泛的生物活性。国内外对枸杞的研究大多集中在其生理活性以及多糖组成的研究上。枸杞多糖（lyciumbarbarumpolysaccharides，lbps）是枸杞最重要的活性成分之一，但多糖生物活性与其物理化学性质等许多因素紧密相关，如溶解性、分子量、空间结构等。由于一级结构是空间结构的基础，葡萄糖是组成多糖一级结构的主要成分。葡萄糖作为枸杞的主要水溶性成分，有必要寻找一种快速、操作简便的方法确定其葡萄糖含量，从而作为标志物快速区分不同产地、不同品种的枸杞样品。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种用血糖测定仪测定枸杞中葡萄糖含量的方法。

一、枸杞中葡萄糖含量的测定

本发明用血糖测定仪测定枸杞中葡萄糖含量的方法，包括以下步骤：

样品溶液的配制：将枸杞子粉碎，过30目筛；按0.01~0.05g/ml加入到水中，于50~90℃的水浴中搅拌提取0.5~2小时，冷却至室温，离心得提取液；再将提取液加水稀释；加水量为提取液体积的8~12倍；

测定方法：采用血糖仪测定样品溶液的糖度值，并根据样品溶液的糖度值与其葡萄糖浓度的线性回归方程计算得到葡萄糖含量。

二、溶液的糖度值与其葡萄糖浓度的线性回归方程

1材料与方法

1.1材料与试剂

枸杞原料采自宁夏、青海、甘肃、内蒙、新疆等地，由中国科学院兰州化学物理研究所邸多隆研究院鉴定为lyciumbarbaruml.。

d-无水葡萄糖（分析纯）莱阳实验化工厂，批号：20160228；实验用水为超纯水，由纯水机制得。

1.2仪器与设备

bs224s型万分之一电子天平赛多利斯上海贸易有限公司；三诺安稳血糖测定仪长沙三诺生物传感技术有限公司；clk05a型离心机湖南凯达科学仪器有限公司；101-1a型电热鼓风干燥箱北京科伟永兴仪器有限公司；hhs-2s型电子恒温不锈钢水浴锅上海东星建材试验设备有限公司；信强牌多功能高速粉碎机上海广沙工贸有限公司；jj-1型精密增力电动搅拌器常州国华电器有限公司；ups-ⅱ型优普ups系列纯水系统成都超纯科技有限公司。

2方法与结果

2.1供试品溶液的制备

将枸杞子粉碎过30目筛后，充分混匀，取本品约2.0g，精密称定，于250ml圆底烧瓶中，加水100ml，于60℃水浴搅拌提取2小时（搅拌速率120rpm），放冷至室温，离心得提取液（离心速率4000rpm），精密量取提取液5ml，于50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2糖度值测定方法

糖度值测定原理为葡萄糖在葡萄糖氧化酶（god）的催化下与铁氰化钾发生氧化还原反应，产生葡萄糖酸和亚铁氰化钾，亚铁氰化钾发生电化学反应，产生氧化还原电流。氧化还原电流的大小与葡萄糖的浓度成正比。血糖仪通过测定氧化还原电流的大小得出葡萄糖浓度的数值。

在测定时，需要先调整一起的校正码同试纸条外包装上的校正码一致，室温下测定。

2.3标准曲线的绘制

精密称取干燥至恒重的d-无水葡萄糖（分析纯）1.0017g，于100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液的贮备溶液（每1ml含d-无水葡萄糖10.017mg）。精密量取上述对照溶液的贮备溶液2.0ml，4.0ml，6.0ml，8.0ml，10.0ml分别置于50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成0.401，0.801，1.202，1.603，2.003mg/ml的葡萄糖标准曲线工作液。以血糖仪测得的糖度值为纵坐标（y，单位：mmol/l），葡萄糖浓度为横坐标（x，单位：mg/ml）绘制标准曲线，得到葡萄糖回归方程：y=6.5654x-0.2116，r=0.9967。表明葡萄糖浓度在0.401~2.003mg/ml范围内，糖度值与其浓度具有良好的线性关系。

2.4精密度试验

取“2.3”项下所述1.202mg/ml的葡萄糖标准曲线工作液，重复测定5次糖度值，测得糖度值分别为：7.2，7.3，7.3，7.2，7.4，rsd=1.1%（n=5），精密度良好。

2.5重复性试验

取同一批次（znzt1）样品5份，每份约10g，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，重复测定5次糖度值，测得糖度值分别为：5.6，5.6，5.8，5.8，5.7，rsd=1.8%（n=5），重复性良好。

2.6稳定性实验

取“2.5”项下样品（znzt1）一份，在放置0、2、4、6、8h，分别测定糖度值，结果分别为：5.6，5.8，5.5，5.7，5.7，rsd=2.1%，表明用该方法处理样品，糖度值在8h内稳定。

2.7加样回收试验

取已知糖度值为5.7的样品（znzt1）的样品6份，各约5g，精密称定，精密加入葡萄糖对照溶液的贮备溶液50ml，然后按“2.1”项下供试品溶液的制备方法制备样品溶液，分别测定其糖度值。计算得葡萄糖的平均回收率为91.1%，rsd为4.5%（n=6）。结果见表1：

。

本实验以不同产地枸杞药材为原料，建立了用血糖仪测定枸杞中葡萄糖含量的方法，并进行了方法学考察，结果显示，精密度、重复性、稳定性结果可靠，葡萄糖浓度在0.401~2.003mg/ml范围内，糖度值与其浓度具有良好的线性关系。

本实验用血糖仪测定枸杞中葡萄糖含量的方法切实可行，方法灵敏、快速、操作简便、无需使用试剂，简单经济，为建立糖类成分葡萄糖作为枸杞糖类标志物的分析方法，进一步在实际中推广应用提供参考。

糖度值测定结果表明，不同地区的枸杞葡萄糖含量差别较大，葡萄糖是枸杞生物代谢的初级产物，其含量与生长环境的海拔、土壤营养、水分、气候等因素有关。有部分样品存在一定偏差，但考虑到药材本身属于天然产物，存在诸多非确定影响因素，所以属正常现象。本实验研究结果可为科学评价枸杞药材内在质量、优质药材的选择提供了科学依据。

附图说明

图1为d-无水葡萄糖的标准曲线。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明测定枸杞中葡萄糖含量的方法做进一步说明。

样品溶液配制：取宁杞1号枸杞子23批样品。将枸杞子粉碎过30目筛后，充分混匀，取本品约2.0g，精密称定，于250ml圆底烧瓶中，加水100ml，于60℃水浴搅拌提取2小时（搅拌速率120rpm），放冷至室温，离心得提取液（离心速率4000rpm），精密量取提取液5ml，于50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

测定方法：通过血糖仪测定样品溶液的糖度值，并糖度值带入标准曲线方程计算葡萄糖含量。宁杞1号23批样品测定结果如表2所示：