本发明涉及药物分析领域，尤其涉及一种复幼合剂中迷迭香酸和哈巴俄苷的检测方法。
背景技术：
：复幼合剂，由夏枯草、醋鳖甲、生地、地骨皮、泽泻、玄参、龙胆草、牡丹皮、菊花、麦芽、牡蛎、昆布组方组成，为北京儿童医院的院内制剂(北京市药监局批准，批准文号为京药制字z20053679)，用于治疗幼女乳房胀痛，阴道分泌物增多，阴道出血，或伴有烦躁易怒，口干渴，手足心热，盗汗等症。舌质偏红，苔少，脉细或细数；女童性早熟。目前，尚无对复幼合剂有效成分进行监测，准确反映其质量水平的报道，因而无法对生产过程及产品质量有效控制，不能较好地保证其临床疗效。因此，建立复幼合剂的质量控制方法具有非常重要的意义。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的在于提供一种复幼合剂成分检测方法。该方法具有良好的精密度、线性关系、稳定性、重复性，回收率高。为了实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：本发明提供了一种复幼合剂成分检测方法，包括：制备复幼合剂供试品溶液以及含迷迭香酸和哈巴俄苷的标准品溶液，利用hplc进行检测，通过外标法获得复幼合剂中迷迭香酸和哈巴俄苷的含量；所述hplc检测的色谱条件为：以乙腈为流动相a，以磷酸溶液为流动相b，梯度洗脱，所述梯度洗脱程序为：复幼合剂由夏枯草、醋鳖甲、生地、地骨皮、泽泻、玄参、龙胆草、牡丹皮、菊花、麦芽、牡蛎、昆布组方组成，为北京儿童医院的院内制剂(北京市药监局批准，批准文号为京药制字z20053679)，用于幼女乳房胀痛，阴道分泌物增多，阴道出血，或伴有烦躁易怒，口干渴，手足心热，盗汗等症。舌质偏红，苔少，脉细或细数；女童性早熟见上述证候者。经过长期研究发现，合理控制复幼合剂中迷迭香酸和哈巴俄苷的质量状况，可以保证复幼合剂的临床疗效。本发明提供的质量控制方法可快速、准确地同时测定复幼合剂中迷迭香酸和哈巴俄苷含量，具有良好的精密度、线性关系、稳定性、重复性，回收率高，可以作为评价复幼合剂中关键活性成分迷迭香酸和哈巴俄苷质量的有效方法。在一些实施方案中，hplc检测的波长为：0～37min330nm，37～82min210nm。在一些实施方案中，磷酸溶液中磷酸的体积分数为0.025％-0.035％。在一些具体实施例中，磷酸溶液中磷酸的体积分数为0.03％。在一些具体实施例中，hplc检测的色谱柱为十八烷基键合硅胶色谱柱。在一些具体实施例中，hplc检测的流动相流速为1.2ml/min。在一些具体实施例中，hplc检测的柱温为30℃。在一些实施方案中，复幼合剂为口服液，复幼合剂供试品溶液的制备方法为：取复幼合剂，加入50％乙醇，离心，取上清液，滤过，取续滤液，获得所述复幼合剂供试品溶液。在一个具体实施例中，复幼合剂供试品溶液的制备方法为：精密量取复幼合剂口服液10ml，置50ml棕色容量瓶中，精密加入50％乙醇至刻度，离心，取上清液，滤过，取续滤液。在一些实施方案中，本发明提供的检测方法还包括制备标准品溶液的步骤，具体地，制备标准品溶液的制备方法为：取迷迭香酸、哈巴俄苷对照品，分别加50％乙醇，制成迷迭香酸母液和哈巴俄苷母液，分别量取迷迭香酸母液和哈巴俄苷母液，得到标准品溶液(混标溶液)。在一个具体实施例中，标准品溶液的制备方法为：精密称取迷迭香酸、哈巴俄苷对照品，加50％乙醇，分别制成含0.4mg/ml迷迭香酸母液，0.5mg/ml哈巴俄苷母液，分别精密吸取迷迭香酸母液1.2ml，哈巴俄苷母液2.5ml置10ml棕色容量瓶中，加50％乙醇定容至刻度，得到标准品溶液(混标溶液)。所述标准品溶液中，迷迭香酸浓度为0.048mg/ml，哈巴俄苷浓度0.125mg/ml。在一些实施方案中，还包括制备阴性对照品溶液的步骤，制备方法为：在复幼合剂的基础上，制备缺少夏枯草和玄参的口服液，加入50％乙醇，离心，取上清液，滤过，取续滤液，获得所述阴性对照品溶液。本发明提供的检测方法可快速、准确地同时测定复幼合剂中迷迭香酸和哈巴俄苷含量，该方法具有良好的精密度、线性关系、稳定性、重复性，回收率高，可以作为评价复幼合剂中关键活性成分迷迭香酸和哈巴俄苷质量的有效方法。具体实施方式本发明公开了一种复幼合剂成分检测方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。对所公开的实施例的说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本发明：实施例1标准品溶液的制备：精密称取迷迭香酸、哈巴俄苷对照品，加50％乙醇，分别制成含0.4mg/ml迷迭香酸母液，0.5mg/ml哈巴俄苷母液，分别精密吸取迷迭香酸母液1.2ml，哈巴俄苷母液2.5ml置10ml棕色容量瓶中，加50％乙醇定容至刻度，得到标准品溶液(混标溶液)。供试品溶液的制备：精密量取复幼合剂口服液10ml，置50ml棕色容量瓶中，精密加入50％乙醇至刻度，离心，取上清液，滤过，取续滤液。阴性对照品溶液的制备：在复幼合剂的基础上，制备缺少夏枯草和玄参的口服液，加入50％乙醇，离心，取上清液，滤过，取续滤液，获得所述阴性对照品溶液。hplc色谱条件为：固定相：十八烷基键合硅胶流动相：以乙腈为流动相a，以0.03％磷酸溶液为流动相b梯度洗脱。洗脱程序见表1。表1洗脱程序时间(min)a％(乙腈)b％(0.03％磷酸)0～103～1097～9010～2010～2090～8020～4020～3080～7040～5530～4070～6055～6040～8060～2060～8080～8520～1580～8385～315～97检测波长：0～37min330nm，37～82min210nm。检测温度：30℃。洗脱速度：1.2ml/min。实施例2方法学考察试验(1)专属性试验分别精密吸取对照品溶液，供试品溶液，阴性对照溶液各10ul，注入液相色谱仪，按实施例1方法测定。结果显示主峰分离效果较好，对称因子、分离度等指标均符合规定，理论塔板数达到3000以上，阴性样品无干扰。(2)线性关系考察试验精密称定迷迭香酸对照品8.07mg，置20ml棕色容量瓶中，加50％乙醇定容；另取哈巴俄苷对照品5.02mg，置25ml容量瓶中，加50％乙醇定容。分别精密吸取迷迭香酸母液1.2ml，哈巴俄苷母液2.5ml置10ml棕色容量瓶中，加50％乙醇定容至刻度，为混标溶液(标准品溶液)。分别进样2、10、25、30、35μl，按实施例1方法测定，记录峰面积，计算标准曲线。结果见表2和表3。表2表3结果显示，迷迭香酸标准曲线：y＝2996201.9827x-82630.7000(r＝0.9997)，哈巴俄苷标准曲线：y＝1668790.1583x-44297.9909(r＝0.9997)，线性良好。(3)精密度试验取混合对照品溶液，按照实施例1色谱条件连续进样6次，记录峰面积，计算rsd值。结果见表4。表4no.进样体积/μl迷迭香酸峰面积哈巴俄苷峰面积110287492211213210289203213306310286163210682410285834209912510287453206874610288790207549平均值287489209922stde1233.49122183.9287rsd0.431.04结果显示，迷迭香酸在混标中峰面积rsd为0.43％，哈巴俄苷在混标中峰面积rsd为1.04％，表明仪器精密度良好。(4)重复性测定试验按照实施例1供试品溶液的制备方法平行制备6份供试品溶液，依照实施例1条件进行测定，记录峰面积并计算含量，结果见表5。表5重复性试验结果结果显示，迷迭香酸含量rsd为0.33％，哈巴俄苷含量rsd为0.85％，重复性良好。(5)稳定性试验按照实施例1方法制备供试品溶液，并按实施例1色谱条件分别在0、2、4、8、12h进样测定，记录峰面积并计算含量，结果见表6。表6稳定性试验结果结果显示，迷迭香酸含量rsd为7.23％，哈巴俄苷含量rsd为8.72％，稳定性良好。(6)加样回收试验精密称取样品粉末5g，置50ml容量瓶中，加50％乙醇，平行称取6份，分别精密加入0.4mg/ml的迷迭香酸溶液0.3ml、0.2mg/ml的哈巴俄苷溶液1.1ml，按实施例1制备方法制备供试品溶液，按实施例1色谱条件测定，记录峰面积并计算含量回收率，结果见表7和表8。表7回收率实验结果表8回收率实验结果结果显示，迷迭香酸的加样回收率为99.28％、rsd为0.74％，哈巴俄苷的加样回收率为101.09％、rsd为0.49％，加样回收率良好。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12