一种成熟玉米根系临时切片的制备方法与流程

本发明属于植物根系切片制备技术领域，具体涉及一种成熟玉米根系临时切片的制备方法。

背景技术：

临时切片用于观察植物内部结构，但在实际实验中发现，临时切片传统方法用于较为幼嫩的植物组织，有较好的效果，但是当植物进入成熟期，特别是玉米根系，细胞壁加厚，在切片后，观察时，会出现大量气泡，影响观察结果。

技术实现要素：

针对现有临时切片制备过程中图像不清晰，以产生观察误差的问题，本发明提供了一种成熟玉米根系临时切片的制备方法，包括如下步骤：

1)将成熟期的玉米根横切面削平，切成段块，在faa固定液或卡诺氏液中固定，固定时间为20-72h；

2)然后，取出材料切下薄片，将薄片置于水中；

3)挑选薄而透明的切片，经染色后，置于载玻片上；

4)然后，向切片上滴加双蒸水，经真空处理后，盖上盖玻片，使切片与载玻片切合后，制备获得成熟玉米根系临时切片。

进一步地限定，步骤1)所述段块的厚度为1-2cm。

进一步地限定，步骤1)所述固定时间为24h。

进一步地限定，步骤3)所述染色是指将切片经质量分数1％的番红水溶液染色20-40s，优选为30s。

进一步地限定，步骤4)所述向切片上滴加双蒸水，滴加的量为120-150μl。

进一步地限定，步骤4)所述真空处理是指将切片在真空度为5-10torr条件下，抽真空5-10min。

更进一步地限定，步骤4)所述真空处理是指将切片在真空度为8torr条件下，抽真空7min。

有益效果

本发明运用真空泵，将染色后的切片进行抽真空处理，能排除切片中99％的气泡，使观察图像更加清晰，减少了观察误差，节省大量的时间，为成熟玉米根系解剖结构的研究提供了便利。

附图说明

图1成熟玉米根系切片经染色后，经40倍光学显微镜观察的图像。

图2成熟玉米根系切片经染色、抽真空后，经40倍光学显微镜观察的图像。

图3成熟玉米根系切片经染色后，经100倍光学显微镜观察的图像。

图4成熟玉米根系切片经染色、抽真空后，经100倍光学显微镜观察的图像。

具体实施方式

下述实施例中，所述的成熟玉米根系样品为取自玉米乳熟期的根系。

所用的faa固定液又叫标准固定液，由福尔马林5ml，冰醋酸5ml，体积分数70％乙醇90ml，丙三醇5ml混合后配制而成。

卡诺氏液:由无水乙醇和冰乙酸按照3:1体积比混合制备获得。

其他试剂或仪器等如无特殊说明，均可通过商业化途径购买获得。

实施例1.成熟玉米根系临时切片的制备方法。

1)将取回的乳熟期玉米根系材料用蒸馏水反复冲洗干净，将材料横切面削平，切成1-2cm的段块，在faa固定液(标准固定液)中固定24h。

2)取出材料后选用双面刀片，以均匀的力量，使刀片平稳滑行，切下薄片轻轻移入盛水的培养皿中备用。

3)挑选薄而透明的切片，厚度为50～100μm为宜，用质量分数1％的番红水溶液染色30s，然后置于载玻片中央。30s是最佳染色时间，时间过长，容易造成过度染色，影响图像观察。

4)向切片上滴3-4滴双蒸水，120μl为宜，然后将切片放入真空泵中，在真空度为8torr条件下，抽真空7min(切片与载玻片完全贴合为止)，取出后盖上盖玻片(此步骤须在抽真空之后，否则达不到排除气泡的明显效果)，用镊子轻轻压盖玻片，使切片与载玻片紧密贴合，制成成熟玉米根系临时切片，在显微镜下观察。

实施例2.成熟玉米根系临时切片的制备方法。

1)将取回的乳熟期玉米根系材料用蒸馏水反复冲洗干净，将材料横切面削平，切成1-2cm的段块，在faa固定液(标准固定液)中固定20h。

2)取出材料后选用双面刀片，以均匀的力量，使刀片平稳滑行，切下薄片轻轻移入盛水的培养皿中备用。

3)挑选薄而透明的切片，厚度为50～100μm为宜，用质量分数1％的番红水溶液染色20s，然后置于载玻片中央。

4)向切片上滴3-4滴双蒸水，150μl为宜，然后将切片放入真空泵中，在真空度为5torr条件下，抽真空5min(切片与载玻片完全贴合为止)，取出后盖上盖玻片，用镊子轻轻压盖玻片，使切片与载玻片紧密贴合，制成成熟玉米根系临时切片。

实施例3.成熟玉米根系临时切片的制备方法。

1)将取回的乳熟期玉米根系材料用蒸馏水反复冲洗干净，将材料横切面削平，切成1-2cm的段块，在卡诺氏液中固定72h。

2)取出材料后选用双面刀片，以均匀的力量，使刀片平稳滑行，切下薄片轻轻移入盛水的培养皿中备用。

3)挑选薄而透明的切片，厚度为50～100μm为宜，用质量分数1％的番红水溶液染色40s，然后置于载玻片中央。

4)向切片上滴3-4滴双蒸水，130μl为宜，然后将切片放入真空泵中，在真空度为10torr条件下，抽真空10min(切片与载玻片完全贴合为止)，取出后盖上盖玻片，用镊子轻轻压盖玻片，使切片与载玻片紧密贴合，制成成熟玉米根系临时切片。

实施例4.玉米根系临时切片的制备方法。

重复实施例1，与实施例1的不同在于，本实施例中步骤1)中根系样品在faa固定液(标准固定液)中固定48h。

以实施例1制成的成熟玉米根系临时切片为例，切片制成后经显微镜观察切片，如图2和图4所示，切片染色后抽真空处理后，相比于未经真空处理的切片(如图1和图3所示)，显微镜下观察可见玉米成熟根切片组织中气泡(黑色实点)几乎全部被排除，观察图像更加清晰，减少了观察误差，使试验结果更准确。

技术特征：

技术总结
一种成熟玉米根系临时切片的制备方法，属于植物根系切片制备技术领域。本发明针对现有临时切片制备过程中图像不清晰，以产生观察误差的问题，提供了一种成熟玉米根系临时切片的制备方法，将染色后的切片进行抽真空处理，排除切片中99％的气泡，使观察图像更加清晰，减少了观察误差，为成熟玉米根系解剖结构的研究提供了便利。

技术研发人员：王彬;李彩凤;刘磊;佟桐;刘笑鸣;赵猛;陈婧婷;刘新宇;张树友;刘丹;邹春雷;武沛然;杨芳芳;王玉波
受保护的技术使用者：东北农业大学
技术研发日：2018.12.21
技术公布日：2019.03.12