快速检测H3N2SIVNS1抗体的试纸条组件的制作方法

本实用新型涉及动物病毒抗体检测领域。更具体地说，本实用新型涉及一种用于快速检测H3N2 SIV NS1抗体的试纸条组件。

背景技术：

猪流感病毒(Swine influenza virus，SIV)不仅是猪呼吸系统综合征的重要病原体，而且极易引起其它病毒和细菌继发感染，给养猪业造成了重大经济损失。更重要的是，由于猪呼吸道上皮细胞表面同时存在人流感病毒受体唾液酸-α-2,6-半乳糖和禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)受体唾液酸-α-2,3-半乳糖，因此猪既可感染人流感病毒又可感染AIV，从而成为人-禽流感病毒重组的理想“混合器”，不时地从猪群中分离出重组的流感病毒也充分证明了这一点。而且，Ito等证实AIV连续在猪体内传代，可导致产生人流感病毒样特性。2009年，H1N1SIV引发的流感疫情再次警示人们，控制猪群中的SIV 即是从源头上控制人类流感病毒。H3N2 SIV是猪群中常见的流感病毒，而快速有效监测猪群中H3N2 SIV流行，可为H3N2猪流感的防控提供理论依据。

NS1是H3N2 SIV的重要非结构蛋白，只有在病毒感染、复制过程中表达，因此，H3N2 SIV野毒感染猪体内会产生NS1抗体，而H3N2猪流感灭活疫苗、NS1缺失SIV弱毒疫苗免疫猪，体内不会产生NS1抗体，这样通过检测NS1抗体，可以鉴别H3N2 SIV野毒感染和疫苗免疫。目前，虽然ELISA可以检测H3N2 SIV NS1抗体，但是检测技术操作复杂，需要昂贵的仪器设备、过程较长、耗时费力，需要特定仪器设备和专业技术人员操作，很难在基层普及，不能满足生产一线或疫病现场的快速检测需要。采用试纸条检测将会带来非常大的便利。

目前，市场上有检测早孕、血糖、尿液等多种类型的试纸条，但是该些试纸条的具体层结构在应用于针对猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1抗体的检测时，直接用手触摸拿捏，试纸条容易受到来自于手的接触污染，影响检测结果，且猪繁殖与呼吸综合征病毒NS1 抗体的检测具有批量化的特点，检测结果一旦不准确，将影响对整体养殖猪的健康判断，另外，试纸条制作时需要考虑被手握持的部分，无形中增大了试纸条的体型。

因此，开发一种能够快速、准确的检测H3N2 SIV NS1抗体、且体型小巧的设备十分必要。

技术实现要素：

本实用新型的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本实用新型还有一个目的是提供一种快速检测H3N2 SIV NS1抗体的试纸条组件，避免试纸条受到来自于与手接触时的污染，确保检测结果的准确性，检测特异性强，敏感性高，体型小巧，轻便易携带。

为了实现根据本实用新型的这些目的和其它优点，提供了一种快速检测H3N2 SIV NS1抗体的试纸条组件，试纸条包括：水平设置的长条形支撑层，平铺固设在支撑层上顺次拼接的吸附纤维层、金标纤维层、纤维素膜层、吸水层，其中，所述支撑层上靠近所述吸水层的端部设置抽拉件，所述抽拉件与所述吸水层分别位于所述支撑层的同一端的两侧面，所述抽拉件包括端面敞开且与所述支撑层端部平齐的抽拉盒、水平滑动设置在抽拉盒内的抽拉片、设置在抽拉片一端的弧形提拉绳、一端铰接在抽拉片下表面的手柄，所述抽拉盒为立方体结构，所述抽拉盒内沿所述支撑层长度方向的两侧壁上分别设有滑道，所述抽拉片的另一端设有分别滑动设置于滑道的两个定位块，所述手柄的铰接端处设有竖直固设在所述抽拉片上的止挡片、所述手柄的自由端和所述止挡片均可插入所述抽拉盒内。

优选的是，还包括一对保护膜，其中一个保护膜敷设在吸附纤维层和金标纤维层的上表面、另一个保护膜敷设在吸水层的上表面。

优选的是，吸附纤维层与金标纤维层之间、金标纤维层与纤维素膜层之间、纤维素膜层与吸水层之间的拼接处设置为彼此咬合的凹凸结构。

优选的是，所述纤维素膜层上以纯化的兔/羊抗猪抗体液或SPA溶液设置检测印迹线，以兔/羊抗H3N2 SIV NS1 IgG溶液设置对照印迹线，检测印迹线与对照印迹线间隔排列，所述金标纤维层上附着有以胶体金标记的重组H3N2 SIV NS1蛋白抗原液。

优选的是，位于吸附纤维层和金标纤维层上表面的保护膜上设有样品标记线，该样品标记线位于吸附纤维层上方距离金标纤维层0.3～0.7cm。

优选的是，所述检测印迹线靠近所述金标纤维层设置，所述对照印迹线远离所述金标纤维层设置。

优选的是，所述吸附纤维层由玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维制成；所述金标纤维层由玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维制成；所述纤维素膜层由硝酸纤维素、纤维素、羧化纤维素或聚偏二氟乙烯制成；所述吸水层由吸水纸制成。

优选的是，一对保护膜的颜色不相同。

优选的是，所述样品标记线位于吸附纤维层上方距离金标纤维层0.5cm。

优选的是，还包括：升降架，所述升降架包括：

底座；

升降杆，其竖直设置在所述底座上；

支撑排，其包括水平固设在升降杆顶部的支撑杆、水平平行间隔固设在支撑杆上的多个固定盒，多个固定盒位于所述支撑杆的同一侧，所述固定盒为顶部敞开的匚形结构，所述固定盒沿长度方向间隔设有多个第一卡位齿片，每个第一卡位齿片均朝向所述支撑杆倾斜设置；

其中，所述手柄为长方形片体，所述手柄上间隔设有与多个第一卡位齿片相匹配的多个第二卡位齿片，所述升降杆的最小高度大于所述支撑层的长度。

本实用新型至少包括以下有益效果：

本实用新型的试纸条为顺次拼接，表面平整，利于被检测溶液层析，检测特异性强，敏感性高。本实用新型在试纸条上设置抽拉件，便于检测时直接用手握持，无须用手碰触试纸条，避免试纸条受到来自于与手接触时的污染，确保检测结果的准确性。本实用新型的抽拉件结构小巧，不占用试纸条位于支撑层上方的各个检测层，减小了试纸条的体型，轻便易携带。

本实用新型的试纸条检测特异性强，敏感性高，结果显示直观、准确，不易出现假阴性和假阳性误判，本实用新型提供的试纸条操作简单，成“一步式”或“傻瓜式”，应用范围广，便于普遍推广应用，而且方便携带和保存，能满足不同层次人员的需要，包括专业化验、海关检疫、卫生防疫、质量监测、畜产品加工、集约化养殖到个体养殖等，具有广阔的市场前景和较好的经济、社会效益。

本实用新型的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本实用新型的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

附图说明

图1为本实用新型的的其中一个技术方案的所述试纸条的结构示意图；

图2为本实用新型的其中一个技术方案的所述抽拉件的结构示意图；

图3为本实用新型的其中一个技术方案的所述升降架的结构示意图。

具体实施方式

下面结合附图对本实用新型做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

如图1-2所示，本实用新型提供了一种快速检测H3N2 SIV NS1抗体的试纸条组件，试纸条包括：水平设置的长条形支撑层1，平铺固设在支撑层1上顺次拼接的吸附纤维层 2、金标纤维层3、纤维素膜层4、吸水层5，其中，所述支撑层1上靠近所述吸水层5的端部设置抽拉件，所述抽拉件与所述吸水层5分别位于所述支撑层1的同一端的两侧面，所述抽拉件包括端面敞开且与所述支撑层1端部平齐的抽拉盒10、水平滑动设置在抽拉盒10内的抽拉片11、设置在抽拉片11一端的弧形提拉绳12、一端铰接在抽拉片11下表面的手柄13，所述抽拉盒10为立方体结构，所述抽拉盒10内沿所述支撑层长度方向的两侧壁上分别设有滑道，所述抽拉片11的另一端设有分别滑动设置于滑道的两个定位块，所述手柄13的铰接端处设有竖直固设在所述抽拉片11上的止挡片14、所述手柄13的自由端和所述止挡片14均可插入所述抽拉盒10内。

本实用新型在使用时，通过提拉绳12将抽拉片11从抽拉盒10中拉出，使手柄13的自由端也伸出于抽拉盒10，轻轻搬动手柄13的自由端，使手柄13由平行于抽拉片11的状态变换为垂直于抽拉片11的状态，握住手柄13，保持试纸条为竖直状态，使试纸条的吸附纤维层2所在的端部插入待检测样品溶液中，进行检测。

本实用新型的试纸条为顺次拼接，表面平整，利于被检测溶液层析，检测特异性强，敏感性高。本实用新型在试纸条上设置抽拉件，便于检测时直接用手握持，无须用手碰触试纸条，避免试纸条受到来自于与手接触时的污染，确保检测结果的准确性。本实用新型的抽拉件结构小巧，不占用试纸条位于支撑层1上方的各个检测层，减小了试纸条的体型，轻便易携带。在另一技术方案中，还包括一对保护膜8，其中一个保护膜8敷设在吸附纤维层2和金标纤维层3的上表面、另一个保护膜8敷设在吸水层5的上表面，保护吸附纤维层2、金标纤维层3、吸水层5，防止该些层受到不必要的意外污染而使试纸条的失效，无法检测。

在另一技术方案中，吸附纤维层2与金标纤维层3之间、金标纤维层3与纤维素膜层 4之间、纤维素膜层4与吸水层5之间的拼接处设置为彼此咬合的凹凸结构，当检测样品时，可使样品液沿吸附纤维层2顺利渗析至吸水层5。

在另一技术方案中，所述纤维素膜层4上以纯化的兔/羊抗猪抗体液或SPA溶液设置检测印迹线，以兔/羊抗H3N2 SIV NS1 IgG溶液设置对照印迹线，检测印迹线与对照印迹线间隔排列，所述金标纤维层3上附着有以胶体金标记的重组H3N2 SIV NS1蛋白抗原液。

此技术方案中，检测印迹线和对照印迹线均显示棕红色，即在纤维素膜层4上显示两条棕红色印迹，表示在被检测样品中有病毒抗体检出，结果为阳性；在纤维素膜层4上只显示一条棕红色对照印迹，表示在被检测样品液中未检出病毒抗体，结果为阴性。结果判定直观、准确，简单明了，不易出现假阴性和假阳性误判。金标纤维层3以胶体金标记重组H3N2 SIV NS1蛋白为基础制备而成，金标NS1蛋白中金颗粒与蛋白分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金对蛋白的特异性和亲和力影响很小，且具有较高的印迹率，检测特异性强，敏感性高。

检测时的原理为：当试纸条测试端(即试纸条的吸附纤维层2所在的端部)插入待检测样品溶液后，待检测样品溶液通过层析作用带动待检测样品溶液中的猪的H3N2 SIV NS1抗体及金标纤维层3中的金标抗原(即重组H3N2 SIV NS1蛋白抗原液)一起向纤维素膜层4扩散，并最终渗入试纸条的吸水层5中，扩散过程中待检测样品溶液中的猪的 H3N2 SIV NS1抗体可与该抗体相对应的胶体金标记的重组H3N2 SIV NS1蛋白抗原液相结合，进而与纤维素膜层4上的检测印迹线中的纯化的兔/羊抗猪抗体液或SPA溶液结合，从而显示出棕红色的检测印迹线，以T表示；而对照印迹线中的兔/羊抗H3N2 SIV NS1 IgG 溶液则可与以胶体金标记的重组H3N2 SIV NS1蛋白抗原液结合，形成棕红色对照印迹，以C表示。如果待检测样品液中没有猪的H3N2 SIV NS1抗体，试纸条的纤维素膜层4上只显示出一条棕红色对照印迹线C；如果纤维素膜层4上没有任何棕红色印迹显示，则表明试纸条已失效或操作失误。

检测操作方法为：a、检测样品液的制备：无菌取被检动物的血液，并分离血清，以生理盐水作1:200倍的稀释血清，得到待测样品；b、检测操作：将该试纸条测试端(即试纸条的吸附纤维层2所在的端部)插入待检测样品中，插入深度不超过样品印迹线，约 30秒后取出试纸条，水平放置约1-5分钟，同时观察结果；c结果判断：如果在试纸条的纤维素膜层4上只显示出一条棕红色对照印迹C，表示测检结果呈阴性，说明在被检样品液中未检测出猪的H3N2 SIV NS1抗体；如果试纸条上的纤维素膜层4出现棕红色的对照印迹C和检测印迹T，表示检测结果呈阳性，即在待检样品中检出猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体；如果纤维素膜上没有任何棕红色印迹显示，则表明试纸条已失效或操作有误。

纤维素膜层4上含有一条/个检测印迹时，检测印迹、对照印迹的排列形式为“||”、“十十”、“┬┬”、“┴┴”、“├├”、“┤┤”和“●●”中的任一种；纤维素膜层4 上含有两条/个检测印迹时，检测印迹、对照印迹的排列形式为“|||”、“十十十”、“┬┬┬”、“┴┴┴”、“├├├”、“┤┤┤”和“●●●”中的任一种。

本实用新型根据ELISA的基本原理，用免疫层析试纸检测病毒抗体，利用微孔滤膜的渗滤浓缩和毛细管作用，将抗原-抗体反应由ELISA的传统液相环境转到固相滤膜上快速进行，并采用胶体金印迹代替酶印迹，凭肉眼直接观察胶体金的显色状况，即时获得检测结果，因此该方法比ELISA等血清学方法更为简便、快速。

在另一技术方案中，位于吸附纤维层2和金标纤维层3上表面的保护膜8上设有样品标记线9，便于确定试纸条的插入样品的深度，该样品标记线9位于吸附纤维层2上方距离金标纤维层30.3～0.7cm考虑到试纸条的长度即检测效果的合理间距。样品标记线9与试纸条的吸附纤维层2所在的端部之间印有箭头及MAX字样。

在另一技术方案中，所述检测印迹线靠近所述金标纤维层3设置，所述对照印迹线远离所述金标纤维层3设置，根据检测时的检测原理的需要进行的合理设置。

在另一技术方案中，所述吸附纤维层2由玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维制成；所述金标纤维层3由玻璃棉、尼龙纤维或聚酯纤维制成；所述纤维素膜层4由硝酸纤维素、纤维素、羧化纤维素或聚偏二氟乙烯制成；所述吸水层5由吸水纸制成。该些原料均来源广泛、成本低。

在另一技术方案中，一对保护膜8的颜色不相同，有助于区别吸水层5所在的端部和吸附纤维层2所在的端部，避免试纸条安装错误而导致检测错误或检测不出结果，优选吸水层5所在的端部的保护膜8为黄色，吸附纤维层2所在的端部的保护膜8为白色。

在另一技术方案中，所述样品标记线9位于吸附纤维层2上方距离金标纤维层30.5cm，优选的合理间距。

在另一技术方案中，如图3所示，还包括：升降架，所述升降架包括：

底座15；

升降杆16，其竖直设置在所述底座15上；

支撑排，其包括水平固设在升降杆16顶部的支撑杆、水平平行间隔固设在支撑杆上的多个固定盒18，多个固定盒18位于所述支撑杆的同一侧，所述固定盒18为顶部敞开的匚形结构，所述固定盒18沿长度方向间隔设有多个第一卡位齿片19，每个第一卡位齿片19均朝向所述支撑杆倾斜设置；

其中，所述手柄13为长方形片体，所述手柄13上间隔设有与多个第一卡位齿片19 相匹配的多个第二卡位齿片，所述升降杆16的最小高度大于所述支撑层1的长度。

此技术方案中，将试纸条上的手柄13放置在固定盒18上，通过第一卡位齿片19和第二卡位齿片卡合使手柄13固定在固定盒18上，试纸条成竖直状态，一个固定盒18可固定一个手柄13，即固定挂设一个试纸条，控制升降杆16的升降可同时控制挂设的多个试纸条的升降，从而实现一次性同时检测多个待检测样品溶液，适于批量检测，提高检测效率。

尽管本实用新型的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本实用新型的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本实用新型并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。