一种从盐酸度洛西汀中检测二甲胺的方法与流程

本发明涉及检测方法领域，具体涉及从盐酸度洛西汀中检测二甲胺的方法。

技术背景

盐酸度洛西汀为临床新型双重再摄取抑制剂，即去甲肾上腺素与选择性5-羟色胺，fda于2004年批准上市，目前主要用于治疗糖尿病患者周围神经痛及抑郁症，且欧洲还批准用于治疗女性尿失禁。

生产盐酸度洛西汀期间使用到了溶剂二甲胺，而二甲胺具有警示结构，为潜在的基因毒性杂质，研究表明，二甲胺对眼和呼吸道有很强的刺激作用，眼睛接触二甲胺可引起角膜浑浊、损伤，皮肤接触液态二甲胺会引起坏死，在一些亚硝基和含硝基化合物存在下二甲胺易形成致癌物质n-亚硝基化合物，因此需对盐酸度洛西汀原料药中二甲胺的残留量予以严格控制。

国内外对二甲胺等低分子的有机胺的检测大多集中于环境废水和废气等方面，对于药品中的二甲胺，目前由于稀释溶剂的选择、检测条件等因素的影响，采用气相色谱法的检测结果容易失真，造成假阴性，因此准确度(加标回收率)不高，而不解决二甲胺的加标回收率的问题，就无法对盐酸度洛西汀中的二甲胺残留量进行真实检测。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种从盐酸度洛西汀中检测二甲胺的方法，其通过将盐酸度洛西汀样品经稀释剂溶解定容后采用气相色谱法进行检测，能够有效克服盐酸度洛西汀中的二甲胺残留量检测准确度的问题，其50％、100％和150％三个水平加标供试品溶液中二甲胺的加标回收率均在85.0％～110.0％之间，二甲胺检测限可达0.0003mg/ml，定量限可达0.0009mg/ml，从而提供一种快速、简洁、准确和高灵敏度的二甲胺检测方法。

本发明提供了以下技术方案：

实际上，本发明提供一种从盐酸度洛西汀中检测二甲胺的方法，其包括以下过程：用稀释剂溶解稀释待检样品，所述稀释剂包括有机溶剂与dbu，其后采用顶空进样，通过气相色谱法进行定性或定量检测；所述气相色谱法采用的色谱柱为挥发性胺类专用毛细管色谱柱。

作为另一具体实施方式，所述有机溶剂为dmso或nmp。

作为另一具体实施方式，所述稀释剂中有机溶剂与dbu的体积比例为1.4～1.6:0.4～0.6，优选为1.5:0.5。

作为另一具体实施方式，根据所述气相色谱法通过外标法对二甲胺进行定量分析，所述待检样品包括供试品，另外包括二甲胺对照品溶液。

作为另一具体实施方式，包括以下步骤：

(1)空白溶剂制备：将有机溶剂和dbu按体积比例1.4～1.6:0.4～0.6混合，得到空白溶剂备用；

(2)对照品溶液的制备：将二甲胺加入有机溶剂进行稀释，制得0.004～0.005mg/ml的二甲胺对照品预备溶液，其后将二甲胺对照品预备溶液与dbu按体积比例1.4～1.6:0.4～0.6混合，得到二甲胺对照品溶液备用；

(3)供试品溶液的制备：将盐酸度洛西汀供试品加入有机溶剂和dbu混合，其中有机溶剂和dbu的体积比例为1.4～1.6:0.4～0.6，得到供试品溶液备用；

(4)分别取上述步骤(1)～(3)得到的空白溶剂、二甲胺对照品溶液、供试品溶液顶空进样，其后通过气相色谱检测，记录所得谱图，其后根据得到的图谱，通过外标法计算盐酸度洛西汀供试品中二甲胺的残留含量。

作为另一具体实施方式，还包括步骤：取乙醇、乙酸乙酯、异丙醇、甲基叔丁基醚、正己烷和甲苯加入有机溶剂制得105.7～106.1mg/ml的混合储备液备用；取苯加入有机溶剂制得0.008～0.012mg/ml的苯储备液；将苯储备液、混合储备液和步骤(2)中的二甲胺对照品储备液按体积比例3.8～4.2:3.8～4.2:1混合后加入有机溶剂制得8.475～8.481mg/ml的系统适用性预备溶液，其后将系统适用性预备溶液与dbu按体积比例2.8～3.2:1混合，得到系统适用性溶液，并将其通过气相色谱检测。

作为另一具体实施方式，还再包括步骤：取盐酸度洛西汀样品加入二甲胺对照品预备溶液和dbu，其中二甲胺对照品预备溶液和dbu的体积比例为2.8～3.2:1，得到加标供试品溶液，并将其通过气相色谱检测。

作为另一具体实施方式，色谱柱柱温为33～37℃，优选为35℃。

作为另一具体实施方式，所述色谱柱的规格为30m×0.320mm或60m×0.320mm。

作为另一具体实施方式，所述色谱柱为挥发性胺类专用agilentcp-volamine色谱柱。

本发明的一个具体实施方式中，色谱柱包括但不限于如下之一：agilentcp-volaminecp7447、agilentcp-volaminecp7447i5、agilentcp-volaminecp7448和cp-volaminecp7448i5。

作为另一具体实施方式，色谱柱升温过程：初始温度33～37℃，保持7～10min，再以20～40℃/min的速率升温至200～240℃，保持5～10min。

作为另一具体实施方式，进样方式采取顶空进样，进样模式采用分流模式，分流比为1～3:1。

作为另一具体实施方式，柱流量为0.9～1.1ml/min。

作为另一具体实施方式，进样口温度为198～202℃，采用fid检测器，所述检测器温度为248～252℃。

作为另一具体实施方式，顶空平衡时间为28～32min，顶空加热箱温度为78～82℃。

作为另一具体实施方式，载气为氮气、氦气或氩气。

与现有技术相比，本发明方案具有有益效果：

(1)相较于采用naoh等现有技术中的常用稀释剂进行二甲胺检测的方法，本发明以有机溶剂与dbu作为稀释剂对盐酸度洛西汀中的二甲胺进行检测，能够有效克服常用稀释剂加入盐酸度洛西汀中后产生检测干扰的问题，从而精确稳定地从盐酸多洛西汀中检测出二甲胺，且该检测方法方便快捷；

(2)本发明检测二甲胺的方法准确度良好，50％、100％和150％三个水平加标供试品溶液中二甲胺的加标回收率均在85.0％～110.0％之间，结果可靠；

(3)本发明检测二甲胺的方法重现性好，连续进样6针对照品溶液时，二甲胺的峰面积rsd仅为3.1％、保留时间rsd为0.1％；

(4)本发明检测二甲胺的方法检测灵敏度高，二甲胺的检测限为0.0003mg/ml，信噪比s/n为4.2；二甲胺的定量限为0.0009mg/ml，平均信噪比s/n为16.8；

(5)本发明检测二甲胺的方法线性范围广，在定量限～限度浓度的200％(0.0009mg/ml～0.0075mg/ml)范围内二甲胺的峰面积和浓度呈现良好的线性关系，相关系数r为0.9967；

(6)本发明检测二甲胺的方法所采用色谱柱与待测的二甲胺匹配度高，待测的二甲胺专属性强、峰形良好、理论塔板数高(大于25000)，且方法运行时间较短，每针的运行时间仅为24.25min，快速高效；

(7)本发明检测二甲胺的方法中样品前处理简单易操作，且对仪器和色谱柱还具有较好的保护性。

附图说明

图1本发明实施例1中所述的色谱图；

图2本发明检测限与定量限试验色谱图；

图3本发明线性和范围中二甲胺标准曲线图；

图4本发明采用naoh试验的二甲胺色谱图；

图5本发明采用naoh并修改柱温程序后试验的二甲胺色谱图。

具体实施方式

下面通过具体实施例和对比例对本发明做进一步的详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

需要注意的是，具体实施例中的“包括”意指其除所述成分外，还可以包括其他成分，所述的“包括”，还可以替换为封闭式的“为”或“由……组成”。

下面通过具体实施例对本发明做进一步的详细描述。

以下实施例所用的到仪器、设备如下：

(1)agilent7890b气相色谱仪；

(2)万分之一电子天平；

(3)十万分之一电子天平；

(4)标准玻璃器皿。

另外，以下实施例所用的验证用试剂、标准品和对照品如下表2：

表2验证用试剂、标准品和对照品

实施例1

一种从盐酸度洛西汀中检测二甲胺的方法，其包括步骤：

(1)空白溶剂的制备：精密量取1.5mldmso和0.5mldbu，置20ml顶空瓶中，摇匀，得到空白溶剂；

(2)对照品溶液的制备：称取40％的二甲胺水溶液约125mg，置20ml量瓶中，用dmso溶解并稀释至刻度，即得对照品母液；精密量取2.0ml对照品母液置20ml量瓶中，用dmso稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液；精密量取对照品储备液1.0ml，置50ml量瓶中，用dmso稀释定容至刻度，即得对照品预备溶液a；精密量取1.5ml对照品预备溶液a和0.5mldbu置20ml顶空瓶中，摇匀，得到对照品溶液；

(3)系统适用性溶液的制备：称取乙醇约500mg、乙酸乙酯约500mg、异丙醇约500mg、甲基叔丁基醚约500mg、正己烷约29mg、甲苯约89mg置20ml量瓶中，用dmso溶解并稀释至刻度，即得混合储备液；精密称取苯约20mg置20ml量瓶中，用dmso溶解并稀释至刻度，即得苯母液，精密量取0.2ml苯母液置20ml量瓶中，用dmso溶解并稀释至刻度，即得苯储备液；精密量取4ml混合储备液、4ml苯储备液和1ml对照品储备液，置50ml量瓶中，用dmso稀释至刻度，即得系统适用性预备溶液a；量取1.5ml系统适用性预备溶液a和0.5mldbu，置20ml顶空瓶中，密封，得到系统适用性溶液；

(4)供试品溶液的制备：称取盐酸度洛西汀样品约600mg，精密称定，置20ml顶空瓶中，加入1.5mldmso和0.5mldbu，密封，摇匀，得到供试品溶液；

(5)加标供试品溶液的制备：取约600mg盐酸度洛西汀样品置20ml顶空瓶中，精密称定，加入1.5ml对照品预备溶液a和0.5mldbu，密封，摇匀，得到加标供试品溶液；

(6)分别取上述步骤(1)～(5)的空白溶剂、二甲胺对照品溶液、系统适用性溶液、供试品溶液、加标供试品溶液顶空进样，其后通过气相色谱法检测，记录所得谱图，所得色谱图结果如图1，色谱参数和计算方法如下表3，从图1结果显示，空白、供试品溶液在二甲胺出峰处无干扰，对照品溶液中二甲胺的峰形和响应良好，系统适应性溶液中其他溶剂不干扰二甲胺的检测。

表3色谱参数和计算方式

检测限和定量限

空白溶剂的制备：制备方法同实施例1的空白溶剂的制备；

定量限溶液的制备：精密移取上述对照品溶液5.0ml，置20ml量瓶中，用dmso稀释至刻度，摇匀，得到定量限溶液母液，量取1.5ml定量限溶液母液和0.5mldbu，置20ml顶空瓶中，密封，得到定量限溶液；

检测限溶液的制备：精密移取3.5ml定量限溶液母液置10ml量瓶中，用dmso稀释至刻度，摇匀，得到检测限溶液母液，量取1.5ml检测限溶液母液和0.5mldbu，置20ml顶空瓶中，密封，得到检测限溶液。

将上述空白溶剂、定量限溶液和检测限溶液分别按照上述气相色谱法进行分析，分析条件参照上述色谱参数和计算方式，其中空白溶剂的进样次数为大于或等于1次，定量限溶液的进样次数为6次，检测限溶液的进样次数为1次，二甲胺的检测限和定量限试验结果见表4，色谱图见附图2，从表4和图2结果显示，二甲胺的检测限和定量限均符合接受标准，能满足检测灵敏度要求。

表4检测限和定量限试验结果

线性和范围

空白溶液：按照实施例1所述步骤的空白溶剂的制备重复进行；

定量限溶液：按照实施例1所述的定量限溶液的制备重复进行；

线性储备液：称取40％的二甲胺水溶液125.61mg，置20ml量瓶中，用dmso溶解并稀释至刻度，即得线性储备液母液；精密量取2.0ml线性储备液母液置20ml量瓶中，用dmso稀释至刻度，摇匀，即得线性储备液；

50％线性溶液：取线性储备液0.25ml置25ml量瓶中，用dmso稀释至刻度，即得50％线性溶液母液；量取1.5ml50％线性溶液母液和0.5mldbu，置20ml顶空瓶中，密封，即得50％线性溶液；

80％线性溶液：取线性储备液0.4ml置25ml量瓶中，用dmso稀释至刻度，即得80％线性溶液母液；量取1.5ml80％线性溶液母液和0.5mldub，置20ml顶空瓶中，密封，即得80％线性溶液；

100％线性溶液：；精密量取1.5ml线性储备液和0.5mldbu置20ml顶空瓶中，密封，摇匀，得到100％线性溶液；

150％线性溶液：取线性储备液0.75ml置25ml量瓶中，用dmso稀释至刻度，即得150％线性溶液母液；量取1.5ml150％线性溶液母液和0.5mldbu，置20ml顶空瓶中，密封，即得150％线性溶液；

200％线性溶液：取线性储备液1.0ml置25ml量瓶中，用dmso稀释至刻度，即得200％线性溶液母液；量取1.5ml200％线性溶液母液和0.5mldbu，置20ml顶空瓶中，密封，即得200％线性溶液。

将上述空白溶剂、定量限溶液和各线性溶液分别进行分别按照上述气相色谱法进行分析，分析条件参照上述色谱参数和计算方式，其中空白溶剂的进样次数为大于或等于1次，定量限溶液的进样次数为1次，各线性溶液的进样次数均为1次，二甲胺的线性试验结果见表5，其中二甲胺标准曲线见附图3，结果显示，在定量限～限度浓度的200％范围内浓度与峰面积之间呈现良好的线性，r>0.990。

表5线性试验结果

回收率和准确度

空白溶剂：按照实施例1所述步骤的空白溶剂的制备重复进行；

第一对照品溶液：按照实施例1所述步骤的对照品溶液的制备重复进行，但是二甲胺水溶液的质量为125.61mg；

第二对照品溶液：按照实施例1所述步骤的对照品溶液的制备重复进行，但是二甲胺水溶液的质量为122.47mg；

供试品溶液：按照实施例1所述步骤的供试品溶液的制备重复进行；

50％线性溶液母液、100％线性溶液母液和150％线性溶液母液：按照实施例1所述的50％线性溶液、100％线性溶液和150％线性溶液的制备重复进行；

50％回收率溶液：取597.7mg供试品溶液置20ml顶空瓶中，加入1.5ml50％线性溶液母液和0.5mldbu，密封摇匀，制得50％回收率溶液a；其后重复上述步骤，但盐酸度洛西汀样品的质量分别为596.1mg和594.5mg，制得50％回收率溶液b和50％回收率溶液c；

100％回收率溶液：取605.6mg供试品溶液置20ml顶空瓶中，加入1.5ml100％线性溶液母液和0.5mldbu，密封摇匀，即得100％回收率溶液a；其后重复上述步骤，但盐酸度洛西汀样品的质量分别为603.4mg和604.1mgmg，制得100％回收率溶液b和100％回收率溶液c；

150％回收率溶液：取603.8mg供试品溶液置20ml顶空瓶中，加入1.5ml150％线性溶液母液和0.5mldbu，密封摇匀，制得150％回收率溶液a；其后重复上述步骤，但盐酸度洛西汀样品的质量分别为607.2mg和606.7mg，制得150％回收率溶液b和150％回收率溶液c；。

将上述空白溶剂、第一对照品溶液、第二对照品溶液、供试品溶液和各回收率溶液分别进行分别按照上述气相色谱法进行分析，分析条件参照上述色谱参数和计算方式，其中空白溶剂的进样次数为大于或等于1次，第一对照品溶液、第二对照品溶液、供试品溶液和各回收率溶液的进样次数均为1次，二甲胺的准确度试验结果见表6，从表6结果显示，三个浓度水平的回收率均在85％～120％之间，且每个浓度水平的回收率rsd及所有浓度水平的回收率rsd均小于10.0％，准确度试验结果符合规定。

表6准确度试验结果

进样精密度、重复性和中间精密度

进样精密度：按照实施例1所述步骤的对照品溶液的制备重复进行，制得第一对照品溶液，其后按照上述气相色谱法进行分析，分析条件参照上述色谱参数和计算方式，其中第一对照品溶液进样次数为6次，结果显示，连续6针第一对照品溶液中二甲胺的峰面积rsd为3.1％，保留时间rsd为0.1％，符合接受标准。

重复性：按照实施例1所述步骤的供试品溶液的制备重复进行，制得供试品溶液，按照上述气相色谱法进行分析，分析条件参照上述色谱参数和计算方式，二甲胺的重复性试验见表7，从表7结果显示，6份供试品溶液中二甲胺均未检出，符合接受标准。

表7重复性试验结果

中间精密度：按照实施例1所述步骤的供试品溶液的制备重复进行，制得供试品溶液，其后不同日期，不同人员采用不同仪器按照上述气相色谱法进行分析，结果显示，6份供试品溶液中二甲胺未检出，两人12份供试品溶液中二甲胺均未检出，该方法中间精密度良好。

综上所述，本实施例的检测方法中空白、供试品溶液在二甲胺出峰处无干扰，对照品溶液中二甲胺的峰形和响应良好，系统适应性溶液中其他溶剂不干扰二甲胺的检测；同时本实施例的检测方法能满足检测灵敏度要求，加标供试品溶液中二甲胺的回收率在85.0％-120.0％之间，符合接受标准；连续进样6针对照品溶液时，二甲胺的峰面积rsd仅为3.1％、保留时间rsd为0.1％，重现性好，因此该检测方法可用于盐酸度洛西汀中二甲胺的检测。

实施例2

一种从盐酸度洛西汀中检测二甲胺的方法，其包括步骤：

(1)空白溶剂的制备：精密量取1.6mldmso和0.4mldbu，置20ml顶空瓶中，摇匀，得到空白溶剂；

(2)对照品溶液的制备：称取40％的二甲胺水溶液约125mg，置20ml量瓶中，用dmso溶解并稀释至刻度，即得对照品母液；精密量取2.0ml对照品母液置20ml量瓶中，用dmso稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液；精密量取对照品储备液1.0ml，置50ml量瓶中，用dmso稀释定容至刻度，即得对照品预备溶液；精密量取1.6ml对照品预备溶液和0.4mldbu置20ml顶空瓶中，摇匀，得到对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：称取盐酸度洛西汀样品约600mg，精密称定，置20ml顶空瓶中，加入1.6mldmso和0.4mldbu，密封，摇匀，得到供试品溶液；

(4)分别取上述步骤(1)～(3)得到的空白溶剂、二甲胺对照品溶液、供试品溶液顶空进样，其后通过气相色谱检测，记录所得谱图，色谱参数和计算方法如下表8，空白、供试品溶液在二甲胺出峰处无干扰，对照品溶液中二甲胺的峰形和响应良好，系统适应性溶液中其他溶剂不干扰二甲胺的检测，本实施例的检测方法能满足检测灵敏度要求，加标供试品溶液中二甲胺的回收率在85.0％～120.0％之间，符合接受标准，因此可用于盐酸度洛西汀中二甲胺的检测。

表8色谱参数和计算方式

实施例3

一种从盐酸度洛西汀中检测二甲胺的方法，其包括步骤：

(1)空白溶剂的制备：精密量取1.4mlnmp和0.6mldbu，置20ml顶空瓶中，摇匀，得到空白溶剂；

(2)对照品溶液的制备：称取40％的二甲胺水溶液约125mg，置20ml量瓶中，用nmp溶解并稀释至刻度，即得对照品母液；精密量取2.0ml对照品母液置20ml量瓶中，用nmp稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液；精密量取对照品储备液1.0ml，置50ml量瓶中，用nmp稀释定容至刻度，即得对照品预备溶液；精密量取1.4ml对照品预备溶液和0.6mldbu置20ml顶空瓶中，摇匀，得到对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：称取盐酸度洛西汀样品约600mg，精密称定，置20ml顶空瓶中，加入1.4mlnmp和0.6mldbu，密封，摇匀，得到供试品溶液；

(4)分别取上述步骤(1)～(3)得到的空白溶剂、二甲胺对照品溶液、供试品溶液顶空进样，其后通过气相色谱检测，记录所得谱图，色谱参数和计算方法如下表9，空白、供试品溶液在二甲胺出峰处无干扰，对照品溶液中二甲胺的峰形和响应良好，系统适应性溶液中其他溶剂不干扰二甲胺的检测，本实施例的检测方法能满足检测灵敏度要求，加标供试品溶液中二甲胺的回收率在85.0％～120.0％之间，符合接受标准，因此可用于盐酸度洛西汀中二甲胺的检测。

表9色谱参数和计算方式

对比例1

与实施例1不同的是，本实施例的的稀释剂中使用naoh代替dbu进行试验，结果如图4，色谱条件如下表10，从图4结果显示，供试品溶液在二甲胺出峰位置存在干扰，结果并不理想。

表10色谱条件

对比例2

与对比例1不同的是，本实施例对加热箱、定量环、升温程序的具体参数进行调整并进行试验，结果如图5，色谱条件如下表11，从图5结果显示，①空白无干扰；②系统适应性溶液中其他溶剂不干扰二甲胺的检测；③供试品按400mg/ml计时，对照品溶液中二甲胺的峰形和理论塔板数良好；④供试品溶液中无杂峰干扰二甲胺；⑤加标供试品溶液中二甲胺的回收率不合格(＜60.0％)，结果不合格。

表11色谱条件

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。