一次性肥达外斐实验反应板的制作方法

本发明涉及一种反应板，特别是涉及一种一次性肥达外斐实验反应板。

背景技术：

肥达外斐实验用于临床诊断伤寒或副伤寒、流行性斑疹伤寒、恙虫病等病症，至今仍发挥着不可替代的作用。传统的方法是试管法，其他常见的方法是以细胞培养板法或u型（v型）孔反应板法替代已排列好的试管，除了反应总容积变小外，都不能免除被检血清的系列倍比稀释、诊断菌液的稀释和加样等步骤，不仅操作繁杂，而且实验误差难以避免，甚至出现漏孔或错孔等现象。

技术实现要素：

本发明为解决公知技术中存在的技术问题而提供一种最大程度简化实验操作，同时也消除操作误差及错误的一次性肥达外斐实验反应板。其特征是：反应板1为透明或半透明聚乙烯材料制成的扁长方体形，板面均匀分布6×7排反应孔2，反应孔2直径1cm，孔深1.5cm，孔底微凹。反应板1表面粘贴有塑料覆膜3，反应孔2底部含有冷冻盐水醛化菌液4，实验所用伤寒、副伤寒及变形杆菌经过醛化处理，其盐水溶液数次冻融不会影响菌体抗原的完整性，不影响实验结果的可靠性，反应板1的顶部设一行写有“h、o、甲、乙、1、2、3”的横标5，反应板1的左侧设一列写有“300/40、150/80、75/160、38/320、19/640、nc”的竖标6，便于血清加样及结果判读。

本发明还可以采用以下技术方案：

1.所述的反应孔2直径可以在0.7-1cm之间，孔深可以在1.0-1.5cm之间；

2.所述的竖标6所标示的每行反应孔2应加入的血清容积即“300μl、150μl、75μl、38μl、19μl”依据反应孔2的大小或反应总容积的调整是可以变化的，但每行反应孔2中所含的冷冻盐水醛化菌液4的容积、盐水浓度、菌体浓度也必须作出相应调整，以满足目前本实验通行的技术要求即整板反应孔2中液体总容积全部一致，盐水终浓度均为0.9%，菌体终浓度均为5.0亿/ml。

本发明具有的优点和积极效果是：以往试管法或u型（v型）孔反应板等法中繁杂易错的步骤如整板逐孔加入一定量等渗盐水，每列逐孔作血清倍比稀释，各诊断菌液混匀并稀释后每列逐孔加样等等，若应用本反应板即可免去，操作者只需将被检血清作30倍稀释，再按竖标的提示逐行向每孔中加入一定量的稀释血清即可，不仅大大简化了实验操作，还避免了加样误差及漏孔、错孔等错误的出现。

附图说明

图1是本发明整体结构示意图；

图2是反应板覆膜示意图；

图3是反应孔底部冷冻盐水醛化菌液示意图；

图1—图3中：1.反应板，2.反应孔，3.覆膜，4.冷冻盐水醛化菌液，5.横标6.竖标。

具体实施方式

为能进一步了解本发明内容、特点及效果，兹例举以下实施例，并配合附图详细说明如下，请参阅图1—图3。

如图1—图3所示：反应板1为聚乙烯材料制成的扁长方体形，板面均匀分布6×7排反应孔2，反应孔2直径1cm，孔深1.5cm，孔底微凹。反应板1表面粘贴有塑料覆膜3，反应孔2底部含有冷冻盐水醛化菌液4，反应板1的顶部设一行写有“h、o、甲、乙、1、2、3”的横标5，反应板1的左侧设一列写有“300/40、150/80、75/160、38/320、19/640、nc”的竖标6，便于血清加样及结果判读。

操作时，将反应板从冰箱取出，室温放置30min以融化冷冻的盐水醛化菌液，操作者将被检血清用生理盐水稀释30倍混匀，揭掉覆膜，参照横标和竖标，如下加样：

第一行各孔冰冻菌液容积及菌体浓度分别为100μl、20亿/ml，各孔加入300μl稀释血清，血清终稀释度为1:40；

第二行各孔冰冻菌液容积及菌体浓度分别为250μl、8.0亿/ml，各孔加入150μl稀释血清，血清终稀释度为1:80；

第三行各孔冰冻菌液容积及菌体浓度分别为325μl、6.2亿/ml，各孔加入75μl稀释血清，血清终稀释度为1:160；

第四行各孔冰冻菌液容积及菌体浓度分别为362μl、5.5亿/ml，各孔加入38μl稀释血清，血清终稀释度为1:320；

第五行各孔冰冻菌液容积及菌体浓度分别为381μl、5.3亿/ml，各孔加入19μl稀释血清，血清终稀释度为1:640；

第六行为nc（阴性对照），不加血清，各孔冰冻菌液容积及菌体浓度分别为400μl、5.0亿/ml。

随后震荡混匀1-2min，放入37℃水浴箱中12小时左右即可在适宜光线条件下判读结果：

1）液体混浊，管底细菌均匀平铺无凝集，判为“-”（nc反应孔均应阴性）；

2）液体混浊，管底细菌不均匀凝集但尚无凝块，判为“+”；

3）液体较混浊，管底细菌不均匀凝集且可见凝块，判为“++”。

在每一列出现凝块的反应孔中间，选择“++”孔被检血清的稀释倍数为凝集效价，若都强于“++”则凝集效价判为≥1:640。

其优点是：本反应板提供了成套的实验所需的反应孔，尤其是其中冻存着精确计算好的反应液（含各种菌体抗原及氯化钠），操作者只需将被检血清作一次稀释，即可在横标、竖标的提示下加样及结果判读，不仅大大简化了实验操作，还避免了原来繁杂的操作所连带的各种误差和错误的出现。

以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案如反应孔大小、总反应容积等做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

技术特征：

技术总结
本发明涉及一种一次性肥达外斐实验反应板，反应板为聚乙烯材料制成的扁长方体形，板面均匀分布6×7排反应孔，反应孔直径1cm，孔深1.5cm，孔底微凹。反应板表面盖有覆膜，反应孔底部含有冷冻状态的醛化细菌盐水溶液。优点是：本实验传统所需的试管架、试管及其编号排列、菌液的配制及其加样、阴性对照孔等，本反应板已经完成，操作者仅需将样本血清稀释一次后，逐行向反应孔中加入一定量的稀释血清即可，实验操作被大大简化，同时显著地降低了实验误差及错误。

技术研发人员：傅金瑞;王学超;李会萍;张晨磊
受保护的技术使用者：天津市宝坻区人民医院
技术研发日：2019.04.23
技术公布日：2019.08.13