一种尿液样本前处理方法与流程

本发明属于生物检测
技术领域：
，具体涉及一种尿液样本前处理方法。
背景技术：
：尿液检测具有样本收集简便、无创，可提供的生理、病理信息量巨大，并且有利于疾病诊断、治疗及预后进程的跟踪监测等诸多优点而被临床广泛应用。随着医学检验技术的不断发展，临床上采用尿液样本进行检测的项目也不断增多，例如对3-（3-羟基苯基）-3-羟基丙酸（3-（3-hydroxyphenyl）-3-hydroxypropionicacid，hphpa）的检测。研究表明：hphpa是一种3-羟基苯丙氨酸（酪氨酸类似物）的代谢产物，它是由肠道内一种梭状芽孢杆菌代谢产生，通过尿液排出体外，它能够通过消耗大脑中的儿茶酚胺，引起如刻板行为、极度活跃高度-反应性的自闭症样行为。目前，自闭症的实验室筛查诊断主要是利用均相酶免疫（heia）分析法、气相色谱-质谱（gc-ms）分析法、酶联免疫（elisa）分析法等方法检测尿液中的肠道生态失调的一般标志性有机酸，如hphpa等代谢产物。这些方法一般都需要对尿液样本进行前处理，由于传统的尿液样本前处理方法基本为直接离心取上清液，加之目前尿液检测技术水平的局限性，往往导致检测灵敏度较低，很大程度上会造成假阴性结果，从而影响临床诊断与治疗。本发明的尿液样本前处理方法能有效提高尿液检测尤其是尿液中3-（3-羟基苯基）-3-羟基丙酸含量检测的灵敏度，具有较高的临床应用价值。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种尿液样本前处理方法，从而提高尿液检测尤其是尿液中3-（3-羟基苯基）-3-羟基丙酸含量检测的灵敏度。本发明所采取的技术方案是：一种尿液样本前处理方法，包括以下步骤：(1)选用定量分析滤纸，裁剪成长宽比为2∶1的长方形滤纸片，在距离滤纸片任意一条短边0.5-1.5cm处画一条与短边平行的横线，备用；(2)在步骤(1)所画的横线上方正中间滴加0.5-1.5μl有色指示剂；(3)取一个容积为10ml的小烧杯，倒入3-6ml的尿液样本；(4)用镊子将步骤(1)制备的滤纸片放入小烧杯中，滤纸片没有滴加有色指示剂的一端朝下，浸没于尿液中；(5)室温下静置一段时间，待有色指示剂迁移至滤纸片最上端边缘时，表示尿液吸附完成；(6)用镊子将吸附有尿液的滤纸片从烧杯中取出，沿烧杯边缘擦去滤纸片下端多余的尿液，将滤纸片平放入干净的培养皿中，室温下静置一段时间，直至滤纸片完全干燥；(7)待滤纸片晾干后将带有有色指示剂的部分剪去；(8)将滤纸片剪碎，放入15ml规格的离心管中，用0.5-1.5ml的纯化水浸泡1-3小时；(9)浸泡结束后，将离心管横向放入调速多用振荡器低速振荡0.5-1.5小时；(10)震荡完毕后，将离心管放入离心机中，室温下1000-3000r/min离心3-8分钟，将离心后所得上清液从离心管中吸出，作为检测样本使用。优选地，本发明的尿液样本前处理方法，包括以下步骤：(1)选用定量分析滤纸，裁剪成长度为6cm，宽度为3cm的长方形滤纸片，在距离滤纸片任意一条短边1.0cm处画一条与短边平行的横线，备用；(2)在步骤(1)所画的横线上方正中间滴加1.0μl蓝色指示剂；(3)取一个容积为10ml的小烧杯，倒入5ml的尿液样本；(4)用镊子将步骤(1)制备的滤纸片放入小烧杯中，滤纸片没有滴加蓝色指示剂的一端朝下，浸没于尿液中；(5)室温下静置一段时间，待蓝色指示剂迁移至滤纸片最上端边缘时，表示尿液吸附完成；(6)用镊子将吸附有尿液的滤纸片从烧杯中取出，沿烧杯边缘擦去滤纸片下端多余的尿液，将滤纸片平放入干净的培养皿中，室温下静置一段时间，直至滤纸片完全干燥；(7)待滤纸片晾干后将带有蓝色指示剂的部分剪去；(8)将滤纸片剪碎，放入15ml规格的离心管中，用1.0ml的纯化水浸泡2小时；(9)浸泡结束后，将离心管横向放入调速多用振荡器低速振荡1小时；(10)震荡完毕后，将离心管放入离心机中，室温下2000r/min离心5分钟，将离心后所得上清液从离心管中吸出，作为检测样本使用。优选地，本发明的尿液样本前处理方法中所述蓝色指示剂为亮蓝或靛蓝。优选地，将本发明所述尿液样本前处理方法处理后得到的上清液作为检测样本，用于尿液中3-（3-羟基苯基）-3-羟基丙酸含量的检测。本发明的尿液样本前处理方法操作简便，能有效去除尿液中可能存在的干扰物质，可以提高尿液检测尤其是尿液中3-（3-羟基苯基）-3-羟基丙酸含量检测的灵敏度，检测结果具有较高的准确度。因此，本发明的尿液样本前处理方法对于临床尿液样本中3-（3-羟基苯基）-3-羟基丙酸含量检测具有较高的实用价值，适于推广应用。附图说明图1是经实施例1、2、3方法处理与未经处理的样本分析灵敏度比较。具体实施方式为了便于理解本发明，下面结合具体实施例，对本发明做更详细的说明。实施例1尿液样本前处理方法本实施例的尿液样本前处理方法，包括以下具体步骤：(1)选用定量分析滤纸，裁剪成长度为6cm，宽度为3cm的长方形滤纸片，在距离滤纸片任意一条短边1.0cm处画一条与短边平行的横线，备用；(2)在步骤(1)所画的横线上方正中间滴加1.0μl蓝色指示剂；(3)取一个容积为10ml的小烧杯，倒入5ml的尿液样本；(4)用镊子将步骤(1)制备的滤纸片放入小烧杯中，滤纸片没有滴加蓝色指示剂的一端朝下，浸没于尿液中；(5)室温下静置一段时间，待蓝色指示剂迁移至滤纸片最上端边缘时，表示尿液吸附完成；(6)用镊子将吸附有尿液的滤纸片从烧杯中取出，沿烧杯边缘擦去滤纸片下端多余的尿液，将滤纸片平放入干净的培养皿中，室温下静置一段时间，直至滤纸片完全干燥；(7)待滤纸片晾干后将带有蓝色指示剂的部分剪去；(8)将滤纸片剪碎，放入15ml规格的离心管中，用1.0ml的纯化水浸泡2小时；(9)浸泡结束后，将离心管横向放入调速多用振荡器低速振荡1小时；(10)震荡完毕后，将离心管放入离心机中，室温下2000r/min离心5分钟，将离心后所得上清液从离心管中吸出，作为检测样本使用。本实施例中所述的蓝色指示剂为亮蓝。实施例2尿液样本前处理方法本实施例的尿液样本前处理方法，包括以下具体步骤：(1)选用定量分析滤纸，裁剪成长度为5cm，宽度为2.5cm的长方形滤纸片，在距离滤纸片任意一条短边0.5cm处画一条与短边平行的横线，备用；(2)在步骤(1)所画的横线上方正中间滴加0.5μl蓝色指示剂；(3)取一个容积为10ml的小烧杯，倒入3ml的尿液样本；(4)用镊子将步骤(1)制备的滤纸片放入小烧杯中，滤纸片没有滴加蓝色指示剂的一端朝下，浸没于尿液中；(5)室温下静置一段时间，待蓝色指示剂迁移至滤纸片最上端边缘时，表示尿液吸附完成；(6)用镊子将吸附有尿液的滤纸片从烧杯中取出，沿烧杯边缘擦去滤纸片下端多余的尿液，将滤纸片平放入干净的培养皿中，室温下静置一段时间，直至滤纸片完全干燥；(7)待滤纸片晾干后将带有蓝色指示剂的部分剪去；(8)将滤纸片剪碎，放入15ml规格的离心管中，用0.5ml的纯化水浸泡1小时；(9)浸泡结束后，将离心管横向放入调速多用振荡器低速振荡0.5小时；(10)震荡完毕后，将离心管放入离心机中，室温下1000r/min离心3分钟，将离心后所得上清液从离心管中吸出，作为检测样本使用。本实施例中所述的蓝色指示剂为靛蓝。实施例3尿液样本前处理方法本实施例的尿液样本前处理方法，包括以下具体步骤：(1)选用定量分析滤纸，裁剪成长度为7cm，宽度为3.5cm的长方形滤纸片，在距离滤纸片任意一条短边1.5cm处画一条与短边平行的横线，备用；(2)在步骤(1)所画的横线上方正中间滴加1.5μl蓝色指示剂；(3)取一个容积为10ml的小烧杯，倒入6ml的尿液样本；(4)用镊子将步骤(1)制备的滤纸片放入小烧杯中，滤纸片没有滴加蓝色指示剂的一端朝下，浸没于尿液中；(5)室温下静置一段时间，待蓝色指示剂迁移至滤纸片最上端边缘时，表示尿液吸附完成；(6)用镊子将吸附有尿液的滤纸片从烧杯中取出，沿烧杯边缘擦去滤纸片下端多余的尿液，将滤纸片平放入干净的培养皿中，室温下静置一段时间，直至滤纸片完全干燥；(7)待滤纸片晾干后将带有蓝色指示剂的部分剪去；(8)将滤纸片剪碎，放入15ml规格的离心管中，用1.5ml的纯化水浸泡3小时；(9)浸泡结束后，将离心管横向放入调速多用振荡器低速振荡1.5小时；(10)震荡完毕后，将离心管放入离心机中，室温下3000r/min离心8分钟，将离心后所得上清液从离心管中吸出，作为检测样本使用。本实施例中所述的蓝色指示剂为亮蓝。实施例4均相酶免疫法检测hphpha含量的分析灵敏度实验使用苏州博源医疗科技有限公司生产的hphpa均相酶免疫检验检测试剂与日立公司生产的7180全自动生化分析仪进行检测，对不同前处理尿液样本中hphpha含量检测的分析灵敏度进行比较，包括以下操作步骤：（1）将实施例1-3所述尿液样本前处理方法处理后得到的上清液作为检测样本（分别编号为样本1-3），以未经前处理的尿液样本（编号为样本4）和直接离心取上清的尿液样本（编号为样本5）作为对照。（2）将上述样本1-5与检测试剂分别放入生化仪样本仓和试剂仓，按照表1进行检测项目参数设置，由生化仪自动进行检测，并计算出检测样本的分析灵敏度值，实验结果如图1所示。表1.日立7180全自动生化分析仪反应参数项目名称3-（3-羟基苯基）-3-羟基丙酸试剂a160µl试剂b40µl样本量10µl分析方法终点法主波长340nm次波长405nm反应时间10分钟孵育时间5分钟反应方向上升结果μg/ml结果精度0.01定标方法linegraph标准品浓度0.00，2.50，5.00，10.00，20.00，40.00μg/ml以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本
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的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。当前第1页12