本发明涉及药品，具体涉及一种麻附辛麻附辛制剂的鉴别方法，属药品
技术领域：
。技术背景麻附辛制剂是麻黄附子细辛汤方制成制剂的简称，由附子、麻黄、细辛组成，具有解表散寒，固本通阳的功效。麻附辛制剂中含有附子。麻黄、细辛三种药物成分，制成制剂后外观与其他中药制剂基本一致，无法进行直观鉴别，现有方法用于麻附辛制剂中药味鉴别通过试验验证，鉴别麻附辛制剂中附子、麻黄、细辛专属性均差，因此，为保证麻附辛制剂的药品质量，提供一种可靠性高、简便、快捷的鉴别方法十分重要。技术实现要素：本发明的目的是为了提供一种麻附辛制剂的鉴别方法，本发明用高效液相色谱法鉴别麻附辛制剂中的附子，用薄层色谱法鉴别麻附辛制剂中的麻黄，用薄层色谱法鉴别麻附辛制剂中的细辛，阴性无干扰，专属性、耐用性均良好。本发明的目的通过以下技术方案实现：一种麻附辛制剂的鉴别方法，其特征在于：采用薄层色谱法鉴别麻附辛制剂中的麻黄和细辛，采用高效液相色谱法鉴别麻附辛制剂中的附子。本发明所述的一种麻附辛制剂的鉴别方法，其特征在于采用薄层色谱法，鉴别麻附辛制剂中的麻黄：取检品研细，称取0.5-2g，加浓氨数滴，加三氯甲烷30ml，加热回流60min，放冷，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，即得供试品溶液；另取盐酸麻黄碱对照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述两种溶液各5-15μl，分别点于硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（20：5：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的红色斑点，即判定是含有麻黄的麻附辛制剂；本发明所述的一种麻附辛制剂的鉴别方法，其特征在于采用薄层色谱法，鉴别麻附辛制剂中的细辛：取检品研细，称取2-6g，加甲醇100ml，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣用水30ml溶解，用乙醚振摇提取3次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液；另取细辛对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取细辛脂素对照品，加甲醇配制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述三种溶液各5-15μl，分别点于硅胶g薄层板上，以正己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯（16:3:4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰检视；供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应位置上，应显相同的颜色斑点，即判定是含有细辛的麻附辛制剂；本发明所述的一种麻附辛制剂的鉴别方法，其特征在于采用高效液相色谱法，鉴别麻附辛制剂中的附子：色谱条件与系统适用性试验以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.092%磷酸溶液(含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺)（21:79)为流动相；检测波长为222-242nm；理论板数按苯甲酰新乌头原碱峰计算应不低于10000；对照品溶液的制备取苯甲酰新乌头原碱对照品、苯甲酰乌头原碱对照品、苯甲酰次乌头原碱对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1ml分别含50μg、10μg、10μg的混合溶液，作为对照品贮备液；精密量取对照品储备液5ml，置25ml量瓶中，加0.1%磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得；供试品溶液的制备取检品研细，称取0.3-2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.lmol/l盐酸溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250w，频率40khz)40分钟并时时振摇，放冷，再称定重量，用0.lmol/l盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，离心（转速为每分钟4000转)30分钟，滤过，精密量取续滤液10ml，加在固相萃取柱（以混合型阳离子交换反相吸附剂为填充剂，150mg或200mg，容量为6ml，预先依次用乙腈、水各6ml洗脱)上，依次以水3ml、氨溶液(5→100)、水、甲醇、乙腈各5ml洗脱，待洗脱液流尽后，放置5分钟，继用乙腈-浓氨试液（90:10)的混合溶液10ml洗脱，收集洗脱液，于40°c以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入乙腈-0.1%磷酸溶液(20:80)的混合溶液5ml使溶解，滤过，取续滤液，即得；测定法精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10-30μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；供试品色谱中，在与苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱色谱相应位置上，有色谱峰响应，即判定是含有附子的麻附辛制剂。为了更好的理解本发明，以下通过本发明方法学研究进一步说明本发明的有益效果。方法学旨在进一步说明本发明的作用，而非本发明的限制。一、制备样品1、制备麻附辛颗粒剂取附子10kg，麻黄7kg，细辛3.5kg，加水煎煮两次，第一次加10倍量水，煎煮2小时，第二次加8倍量水，煎煮2小时，合并两次煎液，滤过，浓缩至稠膏状，在80℃以下减压干燥，粉碎，与适量糊精混匀，制成颗粒，干燥，整粒，得麻附辛颗粒剂。2、制备不含细辛的阴性颗粒剂取附子135g，麻黄90g，照麻附辛颗粒剂制法，制得不含细辛的阴性颗粒剂。3、制备不含附子的阴性颗粒剂取麻黄120g，细辛60g照麻附辛颗粒剂制法，制得不含细辛的阴性颗粒剂。4、制备不含麻黄的阴性颗粒剂取附子120g，细辛40g，照麻附辛颗粒剂制法，制得不含麻黄的阴性颗粒剂。二、采用薄层色谱法鉴别麻附辛药品中的麻黄1、专属性试验取本品内容物适量，称取0.8g，加浓氨试液数滴，加三氯甲烷30ml，加热回流60min，放冷，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，即得供试品溶液。同法制备麻黄阴性供试品溶液。对照品溶液制备取盐酸麻黄碱对照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，即得。吸取上述三种溶液，对照品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液各10μl，分别点于硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（20：5：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰检视。图谱显示在与对照品色谱相应位置上，供试品溶液有相同红色斑点，且阴性供试品溶液在相应位置无斑点，证明本方法专属性好，适用于麻附辛颗粒中麻黄鉴别。2、溶液稳定性试验照前述方法制备供试品溶液、对照药材溶液，供试品溶液室温下放置，分别放置0、4、8小时。分别在0、4、8小时吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，分别点于硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（20：5：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰检视。结果表明供试品溶液在室温放置8小时，对本法鉴别麻黄无影响，供试品溶稳定性良好。3、不同厂牌薄层板取溶液稳定性试验项下样品，照前法使用不同薄层板对本品麻黄进行鉴别试验。结果显示用不同薄层板对本品麻黄鉴别无影响。4、展开温度取溶液稳定性试验项下样品点样，分别于10℃、20℃、30℃下展开，对本品麻黄进行鉴别试验。结果常温范围内可对麻黄进行有效鉴别。研究结果表明，本法适用于麻附辛颗粒中麻黄的鉴别。三、采用薄层色谱法鉴别麻附辛药品中的细辛取本品4g，加甲醇100ml，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣用水30ml溶解，用乙醚振摇提取3次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。阴性供试品溶液制备取细辛阴性制剂7g，同供试品溶液制备方法制备。对照药材溶液：取对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液。吸取上述三种溶液对照品溶液10μl，供试品溶液、对照药材供试品溶液各10μl，分别点于硅胶g薄层板上，以正己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯（16:3:4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰检视。供试品溶液斑点清晰，在细辛脂素和对照药材相应位置，显相同颜色斑点，且阴性供试品溶液无干扰，结果表明本方法专属性好，适用于麻附辛颗粒中细辛鉴别。1、不同厂牌薄层板照前法使用不同薄层板对本品进行鉴别试验。结果显示用不同薄层板对本品细辛鉴别无影响。2、展开温度取各溶液点样，分别与15、25、30℃下展开。结果常温范围内可有效对细辛进行鉴别。试验结果表明，本法适用于麻附辛颗粒中细辛的鉴别。四、采用高效液相色谱法鉴别附子1、专属性试验色谱条件与系统适用性试验以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.092%磷酸溶液(含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺)（21:79)为流动相；检测波长为232nm。理论板数按苯甲酰新乌头原碱峰计算应不低于10000。对照品溶液的制备取苯甲酰新乌头原碱对照品、苯甲酰乌头原碱对照品、苯甲酰次乌头原碱对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1ml分别含50μg、10μg、10μg的混合溶液，作为对照品贮备液。精密量取对照品储备液5ml，置25ml量瓶中，加0.1%磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备取本品内容物约0.7g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.lmol/l盐酸溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250w，频率40khz)40分钟并时时振摇，放冷，再称定重量，用0.lmol/l盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，离心（转速为每分钟4000转)30分钟，滤过，精密量取续滤液10ml，加在固相萃取柱（以混合型阳离子交换反相吸附剂为填充剂，150mg或200mg，容量为6ml，预先依次用乙腈、水各6ml洗脱)上，依次以水3ml、氨溶液(5→100)、水、甲醇、乙腈各5ml洗脱，待洗脱液流尽后，放置5分钟，继用乙腈-浓氨试液（90:10)的混合溶液10ml洗脱，收集洗脱液，于40°c以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入乙腈-0.1%磷酸溶液(20:80)的混合溶液5ml使溶解，并定容至5ml，滤过，取续滤液，即得。阴性供试品溶液的制备取附片（黑顺片）阴性样品，同上法制备阴性供试品溶液，即得。测定法精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性供试品溶液各20μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。结果显示，阴性无干扰，且分离好，表明此方法用于测定麻附辛颗粒中单酯型生物碱专属性强。2、本发明高效液相色谱法鉴别麻附辛药品中的附子方法学验证2.1、系统适用性试验对照品溶液连续进样5针测定，考察系统适用性。结果见下表：系统适用性试验结果注：分离度是用于评价待测组分与相邻共存物或难分离物质之间的分离程度的指标，指表中“--”表示此目标峰前没有色谱峰检出，因此积分表中不显示分离度这一指标。系统适用性试验结果显示本法测定各单酯型生物碱色谱峰重复性、理论板数、分离度、拖尾因子均符合高效液相色谱法中相应规定，表明本法测定系统适用性良好。2.2、被测溶液稳定性取供试品溶液室温放置，分别于第0、8、16、24小时吸取20μl，注入液相色谱仪，测定。被测溶液稳定性结果放置时间0小时8小时16小时24小时rsd%苯甲酰新乌头原碱峰面积637940.688642634.938636349.625638929.8130.42苯甲酰乌头原碱峰面积73126.20373002.60273256.0007206201020.75%苯甲酰次乌头原碱峰面积125136.000125152.297125698.000125989.0000.34%结果表明供试品溶液在24小时内稳定性良好。2.3、重复性取本品内容物，照前法操作，分别测定6次，对测定结果进行比较。重复性结果123456平均rsd%苯甲酰新乌头原碱（μg/g）652.91642.79641.61646.02647.35649.15646.640.972苯甲酰乌头原碱（μg/g）90.8286.4690.4589.0789.0488.7489.101.763苯甲酰次乌头原碱（μg/g）142.34139.50140.77141.52140.47139.53140.690.798三种生物碱总和（μg/g）886.07868.75872.84876.61876.86877.43876.430.658结果表明本方法测定麻附辛颗粒中单酯型生物碱重复性良好。2.4、耐用性试验ⅰ不同流动相比例取本品内容物，照前法操作，采用不同流动相比例进行测定。不同流动相比例结果流动相不同比例20.5:79.521:7920:80rsd%苯甲酰新乌头原碱μg/g637.24629.37634.810.64苯甲酰乌头原碱μg/g87.6388.1588.080.32苯甲酰次乌头原碱μg/g142.98144.04146.341.19三种生物碱总和μg/g867.84869.23861.560.471结果表明本方法对流动相比例在一定范围内改变时耐用性良好。ⅱ不同色谱柱取本品内容物，照前法操作，分别使用色谱柱、进行测定。不同色谱柱测定不同色谱柱结果结果表明本方法对不同厂牌色谱柱耐用性良好。ⅲ柱温取本品内容物，照前法操作，分别采用25、30、35℃柱温进行测定。不同柱温测定结果不同柱温柱温25℃柱温30℃柱温35℃rsd%苯甲酰新乌头原碱μg/g637.07626.97640.881.13苯甲酰乌头原碱μg/g87.7687.0489.441.240苯甲酰次乌头原碱μg/g144.97145.19145.800.30三种生物碱总和μg/g869.80859.19872.560.99结果表明本方法在柱温为25～35℃时，耐用性良好。ⅳ流速取本品内容物，照前法操作，分别采用0.8、1.0、1.2ml/min流速进行测定。不同流速测定结果不同流速流速0.8ml/min流速1.0ml/min流速1.2ml/minrsd%苯甲酰新乌头原碱μg/g638.04642.59633.800.69苯甲酰乌头原碱μg/g87.8384.7886.351.77苯甲酰次乌头原碱μg/g145.79144.84145.490.33三种生物碱总和μg/g871.66872.21865.640.42结果表明本方法在流速为0.8～1.2ml/min时，耐用性良好。ⅴ不同波长取本品内容物，照前法操作，分别采用230nm、232nm、234nm波长进行测定。不同波长测定结果不同波长230nm232nm234nmrsd%苯甲酰新乌头原碱μg/g649.25641.99636.980.96苯甲酰乌头原碱μg/g91.3890.4889.331.20苯甲酰次乌头原碱μg/g147.19150.68142.432.68三种生物碱总和μg/g887.82883.14869.031.11结果表明本方法在波长波动±2范围内变动时，耐用性良好。试验结果表明，本法适用于麻附辛颗粒中附子的鉴别。实施例下面通过具体实施例近一步说明本发明。实施例1：麻附辛胶囊剂鉴别（1）制备胶囊剂：取细辛12kg，麻黄8kg，细辛4kg，加水煎煮两次，第一次加8倍量水，煎煮2小时，第二次加8倍量水，煎煮2小时，合并两次煎液，滤过，浓缩至稠膏状，在80℃以下减压干燥，粉碎，与适量淀粉混匀，灌制胶囊，得麻附辛胶囊剂。（2）鉴别试验ⅰ附子鉴别色谱条件与系统适用性试验以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.092%磷酸溶液(含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺)（21:79)为流动相；检测波长为222nm。理论板数按苯甲酰新乌头原碱峰计算应不低于10000。对照品溶液的制备取苯甲酰新乌头原碱对照品、苯甲酰乌头原碱对照品、苯甲酰次乌头原碱对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1ml分别含50μg、10μg、10μg的混合溶液，作为对照品贮备液。精密量取对照品储备液5ml，置25ml量瓶中，加0.1%磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备取检品研细，称取0.3g，置具塞锥形瓶中，精密加入0.lmol/l盐酸溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250w，频率40khz)40分钟并时时振摇，放冷，再称定重量，用0.lmol/l盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，离心（转速为每分钟4000转)30分钟，滤过，精密量取续滤液10ml，加在固相萃取柱（以混合型阳离子交换反相吸附剂为填充剂，150mg或200mg，容量为6ml，预先依次用乙腈、水各6ml洗脱)上，依次以水3ml、氨溶液(5→100)、水、甲醇、乙腈各5ml洗脱，待洗脱液流尽后，放置5分钟，继用乙腈-浓氨试液（90:10)的混合溶液10ml洗脱，收集洗脱液，于40°c以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入乙腈-0.1%磷酸溶液(20:80)的混合溶液5ml使溶解，并定容至5ml，滤过，取续滤液，即得。测定法精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。结果：供试品色谱中，在与苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱色谱相应位置上，有色谱峰响应。结论：检品麻附辛胶囊含有附子。ⅱ麻黄鉴别取本品内容物适量，称取0.5g，加浓氨试液数滴，加三氯甲烷30ml，加热回流60min，放冷，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，即得供试品溶液。对照品溶液制备取盐酸麻黄碱对照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，即得。吸取上述溶液，对照品溶液、供试品溶液、供试品溶液各5μl，分别点于硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（20：5：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，应显相同的红色斑点。结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的红色斑点。结论：检品麻附辛胶囊含有麻黄。ⅲ细辛鉴别取本品2g，加甲醇100ml，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣用水30ml溶解，用乙醚振摇提取3次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。对照药材溶液：取对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液。吸取上述三种溶液对照品溶液10μl，供试品溶液、对照药材供试品溶液各5μl，分别点于硅胶g薄层板上，以正己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯（16:3:4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰检视。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应位置上，应显相同的颜色斑点。结果：供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应位置上，显相同的颜色斑点。结论：检品麻附辛胶囊含有细辛。实施例2：麻附辛片剂鉴别（1）制备片剂：取细辛13kg，麻黄7kg，细辛5kg，加水煎煮两次，第一次加10倍量水，煎煮2小时，第二次加8倍量水，煎煮1小时，滤液合并，浓缩至稠膏状，在80℃以下减压干燥，粉碎，与适量淀粉混匀，70%乙醇作润湿剂制粒，加适量硬脂酸镁，混匀，压片，得麻附辛片剂。（2）鉴别试验ⅰ附子鉴别色谱条件与系统适用性试验以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.092%磷酸溶液(含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺)（21:79)为流动相；检测波长为242nm。理论板数按苯甲酰新乌头原碱峰计算应不低于10000。对照品溶液的制备取苯甲酰新乌头原碱对照品、苯甲酰乌头原碱对照品、苯甲酰次乌头原碱对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1ml分别含50μg、10μg、10μg的混合溶液，作为对照品贮备液。精密量取对照品储备液5ml，置25ml量瓶中，加0.1%磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备取检品研细，称取2g，置具塞锥形瓶中，精密加入0.lmol/l盐酸溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250w，频率40khz)40分钟并时时振摇，放冷，再称定重量，用0.lmol/l盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，离心（转速为每分钟4000转)30分钟，滤过，精密量取续滤液10ml，加在固相萃取柱（以混合型阳离子交换反相吸附剂为填充剂，150mg或200mg，容量为6ml，预先依次用乙腈、水各6ml洗脱)上，依次以水3ml、氨溶液(5→100)、水、甲醇、乙腈各5ml洗脱，待洗脱液流尽后，放置5分钟，继用乙腈-浓氨试液（90:10)的混合溶液10ml洗脱，收集洗脱液，于40°c以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入乙腈-0.1%磷酸溶液(20:80)的混合溶液5ml使溶解，并定容至5ml，滤过，取续滤液，即得。测定法精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性供试品溶液各30μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。结果：供试品色谱中，在与苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱色谱相应位置上，有色谱峰响应。结论：检品麻附辛片剂含有附子。ⅱ麻黄鉴别取检品研细，称取2g，加浓氨试液数滴，加三氯甲烷30ml，加热回流60min，放冷，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，即得供试品溶液。对照品溶液制备取盐酸麻黄碱对照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，即得。吸取上述溶液，对照品溶液、供试品溶液、供试品溶液各15μl，分别点于硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（20：5：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，应显相同的红色斑点。结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的红色斑点。结论：检品麻附辛片剂含有麻黄。ⅲ细辛鉴别取检品研细，称取6g，加甲醇100ml，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣用水30ml溶解，用乙醚振摇提取3次，每次30ml，合并乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。对照药材溶液：取对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液。吸取上述三种溶液对照品溶液10μl，供试品溶液、对照药材供试品溶液各15μl，分别点于硅胶g薄层板上，以正己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯（16:3:4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰检视。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应位置上，应显相同的颜色斑点。结果：供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应位置上，显相同的颜色斑点。结论：检品麻附辛片剂含有麻黄。当前第1页1 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