一种甜味溶液检测装置及方法与流程

本发明涉及溶液检测技术领域，尤其涉及一种甜味溶液检测装置及方法。

背景技术：

味觉细胞传感器是细胞传感器的一种，它把味觉受体细胞作为分子识别元件，可以确定某类味型(如甜味、苦味、咸味、酸味等)的存在与否及浓度大小，从而达到定性定量测试分析，以及实时、快速和无损的智能检测的程度。

目前的检测方法有膜片钳方法、仿生味觉检测法、电化学细胞传感器方法。膜片钳方法虽然可以检测单细胞的离子通道响应信号，但是其仪器使用操作不方便，而且只能在实验室使用。仿生味觉检测技术虽然可以一定程度上实现味觉物质的分类，但是其重复性和准确性都有局限性。电化学细胞传感器方法虽然可以一定程度上实现味觉物质的检测目标，但是其重复性也存在局限性。

技术实现要素：

本发明为了解决上述技术问题，提供了一种甜味溶液检测装置及方法，其利用细胞成像的方法，不与被测细胞有接触，极大的降低了外界带来的干扰，排除了影响细胞瞬间生理状态的干扰因素，检测时效快，检测准确度高。

为了解决上述问题，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明的一种甜味溶液检测装置，包括计算机、相差显微镜、输液设备和用于放置味觉受体细胞的放置模块，所述放置模块包括玻片，所述玻片上表面设有用于放置味觉受体细胞的放置槽，所述玻片上表面两侧分别设有进液口和出液口，所述玻片上表面还设有连通进液口与放置槽的第一导流槽、连通出液口与放置槽的第二导流槽，所述进液口通过管路与输液设备连通，所述出液口通过管路连接废液收集器，所述相差显微镜与计算机电连接。

在本方案中，检测时，将味觉受体细胞放置在玻片的放置槽内，将玻片固定在相差显微镜的载物台上，输液设备将pbs缓冲液从进液口输入放置槽内清洗味觉受体细胞，接着，输液设备将待测甜味溶液从进液口输入放置槽内，pbs缓冲液凶出液口排出，输液设备输入设定量的待测甜味溶液后，待测甜味溶液包裹住味觉受体细胞，此时，相差显微镜采集味觉受体细胞的形态特征、颜色特征、纹理特征并输送到计算机，重复上述步骤多次，计算机综合分析味觉受体细胞的形态特征、颜色特征、纹理特征的变化情况判断待测甜味溶液属于哪种甜味溶液以及相应的浓度。

检测过程中，温度保持在37℃±0.2℃。味觉受体细胞为lm3肝癌细胞。

作为优选，所述输液设备包括微量蠕动泵。

作为优选，所述第一导流槽的轴线与第二导流槽的轴线位于同一直线。

作为优选，所述第一导流槽的轴线与第二导流槽的轴线都穿过放置槽的中心。

本发明的一种甜味溶液检测方法，用于上述的一种甜味溶液检测装置，包括以下步骤：

s1：微量蠕动泵将pbs缓冲液输送到放置槽内清洗味觉受体细胞，接着微量蠕动泵将待测甜味溶液输送到放置槽内的味觉受体细胞上进行刺激，相差显微镜采集味觉受体细胞的形态特征、颜色特征、纹理特征并输送到计算机，计算机计算出评价指标kc1、评价指标kc2；

s2：重复执行步骤是s1n次，得到n个评价指标kc1、n个评价指标kc2；

s3：将n个评价指标kc1作为输入数据kc1(t)输入一层非线性动力学模型：

其中，v(x，t)为势函数，x(t)为布朗运动粒子运动轨迹函数，a、b、c为设定的常数，ξ(t)为激励噪声，d为激励噪声强度，为周期性正弦信号，a是信号幅度，f是信号频率，t为运动时间，为相位，设

计算v(x，t)对于x的一阶导数和二阶导数，并且使等式等于0，得到二层非线性动力学模型：

设定噪声强度d＝0，kcl(t)＝0；计算得到a的临界值为将a的临界值代入一层非线性动力学模型中，并设定x0(t)＝0，sn0＝0，采用四阶珑格库塔算法求解一层非线性动力学模型，得到：

并计算：

其中，xn(t)为x(t)的第n阶导数，snn-1为s(t)的第n-1阶导数在t＝0处的值，snn+1为s(t)的第n+1阶导数在t＝0处的值，n＝0，1，…，n-1；可以得到x1(t)，x2(t)，…，xn+1(t)的值；

对x1(t)，x2(t)，…，xn+1(t)进行积分，得到x(t)，计算出x(t)的绝对值最大值x(t)m，x(t)的均值

利用公式计算二阶非线性动力学模型输出的信噪比snr，其中，δu＝3a³/20bc²，

以激励噪声强度d为x轴，信噪比snr为y轴建立直角坐标系，画出信噪比snr曲线，找出信噪比snr曲线中特征峰的横坐标值xe，并将横坐标值xe与预先取得的各种甜味溶液对应的特征峰横坐标值范围比较，如果xe位于哪种甜味溶液对应的特征峰横坐标值范围内，则待测甜味溶液即为相应的甜味溶液；

s4：将n个评价指标kc2取平均，得到平均值作为y′值代入对应甜味溶液的检测模型中y′＝hx′+k，h、k为常数，x′为溶液浓度，计算出待测甜味溶液的浓度。

预先取得蔗糖、葡萄糖、山梨醇、三氯蔗糖、甜菊双糖对应的特征峰横坐标值范围，测得的待测甜味溶液对应的特征峰横坐标值位于上述哪种甜味溶液对应的特征峰横坐标值范围，则待测甜味溶液即为对应的甜味溶液，实现待测甜味溶液的定性分析。

作为优选，所述相差显微镜采集味觉受体细胞的形态特征、颜色特征、纹理特征并输送到计算机，计算机计算出评价指标kc1、评价指标kc2的方法如下：

m1：相差显微镜提取味觉受体细胞的细胞面积a′、细胞周长ps、细胞偏心率ecr、细胞圆度rcr；

m2：相差显微镜提取味觉受体细胞的细胞像素值空间分布的均值mvs、标准差sds、平滑度evs、三阶矩tms、一致性css、熵ens；

m3：计算出细胞形态特征因子

计算出细胞颜色特征因子

计算出细胞纹理特征因子

m4：计算出评价指标kc1、评价指标kc2：

面积a′＝∑f(x，y)，即统计满足条件f(x，y)＝1的像素点的个数。

周长ps：为细胞边界所占据的所有像素点的总和，通过计算细胞区域边界上相邻像素点的距离之和来表示，假设细胞区域的边界链码为{a1a2…an}，并且每个码段ai的长度δli表示，则周长的表达式为：

其中，nu为链码中偶数码的数量，ns为链码找那个奇数码的数量。

偏心率ecr：用于计算细胞核在细胞内的偏心位置，为细胞范围内具有等同标准二阶中心距的离心率，其中c为细胞范围内的半焦距，q为细胞范围内的半长轴距。

细胞圆度rcr：

假设z表示灰度级的随机量，那么对应的直方图为：p(zi)，i＝0，1，2…，l-1，l表示灰度级数量，

均值

标准差

平滑度

三阶矩

一致性

熵

评价指标kc1，是用来突出检测过程中形态、颜色对于细胞的影响，同时差异化使用了细胞纹理指标对细胞检测效果的距离拉大作用，主要体现在kc1定义式中，形态和纹理之乘积是被加和的，而分母中颜色与纹理之乘积是被减除的，这样可以进一步加大不同种类溶液刺激下细胞响应信号的差异化，有利于区分判别。

评价指标kc2，是综合利用了细胞的形态、颜色和纹理检测参量，分子上近似于采用这三个参数构建一个三坐标下类球形体系，将细胞的形态、颜色和纹理变化，映射到类球形体系的外部形状特征中去。同时在单次指数条件下，差异化使用了细胞纹理指标对细胞检测效果的拉大作用，也就是说分母中纹理质保是被减除的，这样可以进一步加大不同种类溶液刺激下细胞形态、颜色和纹理响应信号映射出类球形体系的区分，加强了区分判别的效果。

作为优选，取得某一种甜味溶液的检测模型的方法包括以下步骤：

将g个不同浓度的某一种甜味溶液分别单独输送到味觉受体细胞上进行刺激，每次刺激味觉受体细胞得到相应的评价指标kc2，将甜味溶液浓度作为x轴，评价指标kc2作为y轴，建立直角坐标系，每个甜味溶液浓度及其对应评价指标kc2构成的点在直角坐标系中标出，线性拟合得到该甜味溶液的检测模型y′＝hx′+k。

本发明的有益效果是：(1)利用细胞成像的方法，检测系统不与被测细胞有接触，因此对于被测细胞来说是无损非接触式的，这样对细胞成像来说，极大的降低了外界带来的干扰，排除了影响细胞瞬间生理状态的干扰因素。(2)检测时效好，几乎是瞬时就可以标定细胞的胞内生理状态，而诸如膜片钳或者电化学的方法，则需要一定的响应时间，因此，本发明所提出的方法具有很高的检测时效。(3)根据获取的细胞图像，综合性的将多个细胞图像特征量归纳为形态、颜色和纹理三个主要指标，可以较好的体现细胞在收到味觉物质刺激过程中的全方位生理变化，具有很高的检测准确度。

附图说明

图1是玻片的结构示意图；

图2是实施例的流程图；

图3是味觉受体细胞的图像；

图4是多个溶液刺激味觉受体细胞得到的信噪比曲线图。

图中：1、玻片，2、放置槽，3、进液口，4、出液口，5、第一导流槽，6、第二导流槽。

具体实施方式

下面通过实施例，并结合附图，对本发明的技术方案作进一步具体的说明。

实施例：本实施例的一种甜味溶液检测装置，如图1所示，包括计算机、相差显微镜、输液设备和用于放置味觉受体细胞的放置模块，放置模块包括玻片1，玻片1上表面设有用于放置味觉受体细胞的放置槽2，玻片1上表面两侧分别设有进液口3和出液口4，玻片1上表面还设有连通进液口3与放置槽2的第一导流槽5、连通出液口4与放置槽2的第二导流槽6，进液口3通过管路与输液设备连通，出液口4通过管路连接废液收集器，相差显微镜与计算机电连接。

输液设备包括微量蠕动泵。第一导流槽的轴线与第二导流槽的轴线位于同一直线。放置槽呈圆形，第一导流槽的轴线与第二导流槽的轴线都穿过放置槽的中心。

在本方案中，检测时，将味觉受体细胞放置在玻片的放置槽内，将玻片固定在相差显微镜的载物台上，输液设备将pbs缓冲液从进液口输入放置槽内清洗味觉受体细胞，接着，输液设备将待测甜味溶液从进液口输入放置槽内，pbs缓冲液凶出液口排出，输液设备输入设定量的待测甜味溶液后，待测甜味溶液包裹住味觉受体细胞，此时，相差显微镜采集味觉受体细胞的形态特征、颜色特征、纹理特征并输送到计算机，重复上述步骤多次，计算机综合分析味觉受体细胞的形态特征、颜色特征、纹理特征的变化情况判断待测甜味溶液属于哪种甜味溶液以及相应的浓度。

检测过程中，温度保持在37℃±0.2℃。味觉受体细胞为lm3肝癌细胞。

本实施例的一种甜味溶液检测方法，用于上述的一种甜味溶液检测装置，如图2所示，包括以下步骤：

s1：微量蠕动泵将pbs缓冲液输送到放置槽内清洗味觉受体细胞，接着微量蠕动泵将待测甜味溶液输送到放置槽内的味觉受体细胞上进行刺激，相差显微镜采集味觉受体细胞的形态特征、颜色特征、纹理特征并输送到计算机，计算机计算出评价指标kc1、评价指标kc2；

相差显微镜采集味觉受体细胞的形态特征、颜色特征、纹理特征并输送到计算机，计算机计算出评价指标kc1、评价指标kc2的方法如下：

m1：相差显微镜提取味觉受体细胞的细胞面积a′、细胞周长ps、细胞偏心率ecr、细胞圆度rcr；

面积a′＝∑f(x，y)，即统计满足条件f(x，y)＝1的像素点的个数；

周长ps：为细胞边界所占据的所有像素点的总和，通过计算细胞区域边界上相邻像素点的距离之和来表示，假设细胞区域的边界链码为{a1a2…an}，并且每个码段ai的长度δli表示，则周长的表达式为：

其中，nu为链码中偶数码的数量，ns为链码找那个奇数码的数量；

偏心率ecr：用于计算细胞核在细胞内的偏心位置，为细胞范围内具有等同标准二阶中心距的离心率，其中c为细胞范围内的半焦距，q为细胞范围内的半长轴距；

细胞圆度rcr：

m2：相差显微镜提取味觉受体细胞的细胞像素值空间分布的均值mvs、标准差sds、平滑度evs、三阶矩tms、一致性css、熵ens；

假设z表示灰度级的随机量，那么对应的直方图为：p(zi)，i＝0，1，2…，l-1，l表示灰度级数量，

均值

标准差

平滑度

三阶矩

一致性

熵

m3：计算出细胞形态特征因子

计算出细胞颜色特征因子

计算出细胞纹理特征因子

m4：计算出评价指标kc1、评价指标kc2：

s2：重复执行步骤是s1n次，得到n个评价指标kc1、n个评价指标kc2；

s3：将n个评价指标kc1作为输入数据kc1(t)输入一层非线性动力学模型：

其中，v(x，t)为势函数，x(t)为布朗运动粒子运动轨迹函数，a、b、c为设定的常数，ξ(t)为激励噪声，d为激励噪声强度，为周期性正弦信号，a是信号幅度，f是信号频率，t为运动时间，为相位，设

计算v(x，t)对于x的一阶导数和二阶导数，并且使等式等于0，得到二层非线性动力学模型：

设定噪声强度d＝0，kc1(t)＝0；计算得到a的临界值为将a的临界值代入一层非线性动力学模型中，并设定x0(t)＝0，sn0＝0，采用四阶珑格库塔算法求解一层非线性动力学模型，得到：

并计算：

其中，xn(t)为x(t)的第n阶导数，snn-1为s(t)的第n-1阶导数在t＝0处的值，snn+1为s(t)的第n+1阶导数在t＝0处的值，n＝0，1，…，n-1；可以得到x1(t)，x2(t)，…，xn+1(t)的值；

对x1(t)，x2(t)，…，xn+1(t)进行积分，得到x(t)，计算出x(t)的绝对值最大值x(t)m，x(t)的均值

利用公式计算二阶非线性动力学模型输出的信噪比snr，其中，δu＝3a³/20bc²，

以激励噪声强度d为x轴，信噪比snr为y轴建立直角坐标系，画出信噪比snr曲线，找出信噪比snr曲线中特征峰的横坐标值xe，并将横坐标值xe与预先取得的各种甜味溶液对应的特征峰横坐标值范围比较，如果xe位于哪种甜味溶液对应的特征峰横坐标值范围内，则待测甜味溶液即为相应的甜味溶液；

s3：将n个评价指标kc2取平均，得到平均值作为y′值代入对应甜味溶液的检测模型中y′＝hx′+k，h、k为常数，x′为溶液浓度，计算出待测甜味溶液的浓度。

取得某一种甜味溶液的检测模型的方法包括以下步骤：

将g个不同浓度的某一种甜味溶液分别单独输送到味觉受体细胞上进行刺激，每次刺激味觉受体细胞得到相应的评价指标kc2，将甜味溶液浓度作为x轴，评价指标kc2作为y轴，建立直角坐标系，每个甜味溶液浓度及其对应评价指标kc2构成的点在直角坐标系中标出，线性拟合得到该甜味溶液的检测模型y′＝hx′+k。

在本方案中，味觉受体细胞的图像如图3所示。味觉受体细胞为lm3肝癌细胞，能够区分辨别蔗糖、葡萄糖、山梨醇、三氯蔗糖、甜菊双糖。预先取得蔗糖、葡萄糖、山梨醇、三氯蔗糖、甜菊双糖对应的特征峰横坐标值范围，测得的待测甜味溶液对应的特征峰横坐标值位于上述哪种甜味溶液对应的特征峰横坐标值范围，则待测甜味溶液即为对应的甜味溶液，实现待测甜味溶液的定性分析。

蔗糖溶液对应的特征峰横坐标值范围：[63.2，64.1]；

葡萄糖溶液对应的特征峰横坐标值范围：[77.0，80.9]；

山梨醇对应的特征峰横坐标值范围：[68.5，70.4]；

三氯蔗糖对应的特征峰横坐标值范围：[60.3，61.6]；

甜菊双糖对应的特征峰横坐标值范围：[84.9，85.5]。

评价指标kc1，是用来突出检测过程中形态、颜色对于细胞的影响，同时差异化使用了细胞纹理指标对细胞检测效果的距离拉大作用，主要体现在kc1定义式中，形态和纹理之乘积是被加和的，而分母中颜色与纹理之乘积是被减除的，这样可以进一步加大不同种类溶液刺激下细胞响应信号的差异化，有利于区分判别。

评价指标kc2，是综合利用了细胞的形态、颜色和纹理检测参量，分子上近似于采用这三个参数构建一个三坐标下类球形体系，将细胞的形态、颜色和纹理变化，映射到类球形体系的外部形状特征中去。同时在单次指数条件下，差异化使用了细胞纹理指标对细胞检测效果的拉大作用，也就是说分母中纹理质保是被减除的，这样可以进一步加大不同种类溶液刺激下细胞形态、颜色和纹理响应信号映射出类球形体系的区分，加强了区分判别的效果。

例如：预先取7种不同浓度的蔗糖、葡萄糖、山梨醇、三氯蔗糖、甜菊双糖溶液，如表一所示，

表一

上述每个溶液第一个con1浓度刺激味觉受体细胞得到的检测结果如表二所示，

表二

采用实施例的方法检测出每个浓度溶液刺激味觉受体细胞得到相应的评价指标kc2，线性拟合得到每种甜味溶液的检测模型如下：蔗糖溶液浓度检测模型：y′＝1.85x′+3.45，r²＝0.89591。

葡萄糖溶液浓度检测模型：y′＝1.63x′+2.69，r²＝0.97848。

山梨醇溶液浓度检测模型：y′＝1.32x′+1.72，r²＝0.87141。

三氯蔗糖溶液浓度检测模型：y′＝1.73x′+1139.2，r²＝0.8698。

甜菊双糖溶液浓度检测模型：y′＝1.86x′+1608.5，r²＝0.83679。

将每个溶液第一个con1浓度刺激味觉受体细胞得到的信噪比snr曲线，如图4所示，横坐标为激励噪声强度d，纵坐标为信噪比snr，每个信噪比snr曲线的峰值为对应的特征峰。