一种液相色谱法分离测定泊沙康唑及其杂质的方法与流程

本发明属分析化学领域，具体涉及分离测定泊沙康唑及其杂质的方法。

背景技术：

泊沙康唑(posaconazole，商品名诺科飞、noxafil)是新的吡咯类抗真菌药，由原先灵葆雅公司研发，其口服混悬液2005年11月在欧洲首次上市，美国fda2006年9月i5日批准上市，我国2013年6月通过cfda批准。泊沙康唑通过抑制麦角固醇的生物合成而发挥其抗真菌活性，属脂溶性药物，高脂饮食增加其吸收。临床用于治疗和预防侵袭性真菌感染，具有高效、低毒和广谱的特点，尤其对多烯类和其他三唑类药物的耐药菌，包括对隐球菌属、新型细球菌属、念珠菌属等感染均具有较好的临床疗效。

泊沙康唑产品根据合成路线有可能存在以下的杂质a、b、c、d，这些杂质结构式分别如下所示：

为了保证泊沙康唑后续的研发和生产质量，需要对原料药及其制剂的质量进行控制。因此，研究获得一种泊沙康唑的有关物质杂质检查和含量测定的检测方法，这对医药生产企业来说显得尤为迫切。有鉴于此，有必要对现有技术中的泊沙康唑的含量及其杂质含量的分析方法予以改进，以解决上述问题。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是提供一种以反相色谱柱分离测定泊沙康唑及其4个杂质的高效液相色谱方法，从而实现泊沙康唑与其杂质的分离测定。

本发明提供的液相色谱法分离测定泊沙康唑及其杂质的方法，其特征在于：以碳6键的苯基为固定相的色谱柱，以乙腈-缓冲溶液为流动相，采用梯度洗脱，其中乙腈-缓冲溶液起始体积比为30：70～10：90，优选为25：75，所述的缓冲溶液为0.1%磷酸。

所述的梯度洗脱优选为：

所述的方法，优选在于包括以下步骤：

1)取泊沙康唑或含泊沙康唑的制剂适量，用60%乙腈水溶液，溶解样品，并配制成每1ml中含泊沙康唑0.2～5mg的样品溶液；

2)设置流动相流速为0.5～1.5ml/min，检测波长为210～350nm，色谱柱柱温箱温度为30～60℃；

3)取1)的样品溶液2～50μl，注入高效液相色谱仪，进行梯度洗脱，完成泊沙康唑及其杂质的分离测定。

所述的方法，色谱柱优选为选自牌号为geminic6-phenyl110a（优选4.6mm×150mm，3μm）色谱柱。

该方法中，通过在样品溶液中含有60%乙腈水溶液，可以确保泊沙康唑在溶液中的稳定性。

本发明所述的分离测定方法，可按以下方法实现：

1）取泊沙康唑或含泊沙康唑的制剂适量，用60%乙腈水溶液，溶解样品，并配制成每1ml中含泊沙康唑0.2～5mg的样品溶液；

2）设置流动相的流速为0.5～1.5ml/min，流动相的流速优选为1.0ml/min；检测波长为200～350nm，最佳检测波长为293nm；色谱柱柱温箱温度为30～60℃，最佳柱温为50℃；

3)取1）的样品溶液2～50μl，注入高效液相色谱仪，完成泊沙康唑性与其杂质的分离测定。

其中：

高效液相色谱仪：戴安u3000型高效液相色谱仪

色谱柱：geminic6-phenyl110a

柱温：50℃

流动相：

流量：1.0ml/min

检测波长：256nm

进样体积：10μl

本发明采用ageminic6-phenyl110a色谱柱，能够有效分离测定泊沙康唑与其4个杂质；选用60%乙腈水溶液溶解样品，确保了溶液的稳定性；选用进样体积为10μl，柱温为50℃，提高了色谱峰的对称性。本发明解决了分离测定泊沙康唑与其杂质的测定问题，从而保证了泊沙康唑及其制剂的质量可控。经反复试验发现，用geminic6-phenyl110a（4.6mm×150mm，3μm）色谱柱，以乙腈、缓冲液为流动相，在起始比例为乙腈-缓冲液（25：75）条件下，采用梯度洗脱。可以将泊沙康唑与其杂质有效分离，从而可以准确控制盐酸莫西沙星的质量。本发明的方法能简单、快速、准确地分离、检测出泊沙康唑及其杂质。

附图：图1：泊沙康唑、杂质a、杂质b、杂质c及杂质d的液相分离色谱图。

具体实施方式

实施例1

仪器与条件

戴安u3000型高效液相色谱系统及工作站；自动进样；geminic6-phenyl110a色谱柱（4.6mm×150mm，3μm）为分离柱；紫外检测波长：256nm；流动相：乙腈-缓冲溶液（0.1%磷酸水溶液）起始体积比为（25：75），采用梯度洗脱；柱温50℃；进样体积为10μl，流速为1.0ml/min。

实验步骤

取泊沙康唑及其杂质（杂质a、b、c、d）各适量，用60%乙腈水溶液溶解并稀释制成每1ml中约含泊沙康唑1.0mg和各杂质约含10μg的溶液，作为系统适用性试验溶液。

再取泊沙康唑原料药适量（含泊沙康唑50mg，陕西海润生物技术有限公司生产，批号181101），置50ml量瓶中，加60%乙腈水溶液适量，振摇使主药溶解，并用此溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密量取供试品溶液适量，加此溶液并稀释制成每1ml中约含1μg的溶液，作为对照溶液。

梯度洗脱表如下：

精密量取系统适用性试验溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品主峰与杂质f、杂质a的分离度应符合规定，理论板数按泊沙康唑峰计算应不低于3000。取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10％～25％；再分别精密量取供试品溶液及对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按自身对照法以峰面积计算泊沙康唑的含量，应不得过0.1％。杂质a、杂质b、杂质c、泊沙康唑、杂质d的色谱峰依次试验出峰顺序结果见表1及图1。

表1系统适用性试验结果

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