一种补体旁路途径B因子功能检测试剂盒的制作方法

本实用新型属于试剂盒技术领域，涉及一种补体旁路途径b因子功能检测试剂盒。

背景技术：

补体是存在于正常人和脊椎动物的血清和组织液中的一组具有酶原活性的蛋白质，包括30余种可溶性蛋白质分子组成的复杂调控系统。补体是免疫系统的重要组成部分，在天然防御和免疫调控中具有重要的功能。补体功能检测的实验要求较高，步骤较复杂，目前临床检验已基本不开展此类检测，而只开展补体相关成分含量的检测。但由于补体成分含量和补体活性之间并无显著性的相关关系，因此，含量测定和活性测定并不能相互取代。

补体的激活分为经典途径、旁路途径和凝集素途径。其中，补体旁路途径b因子是决定补体旁路途径c3转化酶形成的重要因子。而补体旁路途径b因子的功能检测较为复杂，一般情况下，非专业实验室或非专业检测人员无法开展此项检测。本实用新型针对目前临床检测和科研中缺乏补体旁路途径b因子的功能检测试剂盒的现状，旨在提供一种可方便地进行补体旁路途径b因子功能检测的试剂盒。

技术实现要素：

为解决上述现有技术存在的问题，本实用新型的目的在于提供一种补体旁路途径b因子功能检测试剂盒。

为达到上述目的，本实用新型的技术方案为：一种补体旁路途径b因子功能检测试剂盒。所述盒体1包括试管区域5，试剂瓶区域4，放置槽区域17，其他区域8；试管区域5上表面有一层纸板，该纸板上有试管孔，待测血清反应管10和对照组试管18穿过纸板上的孔，试管区域5的中间位置有一层平行于盒体1底面的纸板9，纸板9设有与试管区域5上表面纸板对应的孔，试管区域5底部设置底座11，底座11上有与试管底部对应的半圆形凹槽13，半圆形凹槽13与纸板9上的孔位置对应，半圆形凹槽13表面铺设海绵12；试剂瓶区域4有多个凹槽，用于放置试剂瓶；放置槽区域17包括试剂瓶移放槽15和容量瓶放置槽14，试剂瓶移放槽15用于实验操作过程中试剂瓶的暂时放置，容量瓶放置槽14用于放置稀释溶液的容量瓶；所述其他区域8上设有u形凹槽6和多个吸管放置槽7；盒体1的侧面均为双层侧面3，该双层侧面3中间留有缝隙。

优选的，所述试剂瓶区域4放置眼镜蛇毒因子401、乏b因子血清402，兔红细胞403，含2mmmg2+和8mmegta的明胶巴比妥缓冲液(简称mg-egta缓冲液)404，正常参考血清405。

优选的，所述盒体1上有盒盖2，盒盖2周围能折叠，当盒盖2盖上时，盒盖2周围的折叠面卡入双层侧面3中间的缝隙。

优选的，所述盒体1的外表面为防水材料。

优选的，所述试剂瓶区域4、其他区域8的材料为泡沫材料。

优选的，所述正常参考血清405、眼镜蛇毒因子401、乏b因子血清402的复溶体积分别为1ml、0.1ml、1ml；所述兔红细胞403的体积是1ml、mg-egta缓冲液404体积是3.5ml。

优选的，所述盒体1内侧设有透明袋16，透明袋16里用于放置操作用手套。

优选的，所述u形凹槽6用于放置冷生理盐水瓶，冷生理盐水体积是5ml。

优选的，所述对照组试管18和待测血清反应管10为多个。

相对于现有技术，本实用新型的有益效果为：1、本实用新型采用试管区域，试剂瓶区域，放置槽区域，其他区域的有效划分，使实验操作起来方便有条理，使用简便、快速、重复性好、试剂及样品消耗少。2、本实用新型试管区域的中间位置有一层平行于盒体底面的纸板，该纸板在反应管的中间位置将其固定，底座上的半圆形凹槽有海绵，避免反应管损坏。3、本实用新型盒体侧面为双层结构，盒盖能卡紧在双层侧面的缝隙中，实现盖体和盒体紧固封闭。4、本实用新型盒体内侧有透明袋，用于放置操作用手套，方便操作，减少细菌对操作的影响。

附图说明

图1为本实用新型的结构示意图。

图2为本实用新型的反应管和底座的主视图。

图3是本实用新型试管区域5平面示意图。

图中：1-盒体，2-盒盖，3-双层侧面，4-试剂瓶区域，401-眼镜蛇毒因子，402-乏b因子血清，403-兔红细胞，404-mg-egta缓冲液，405-正常参考血清，5-试管区域，6-u形凹槽，7-吸管放置槽，8-其他区域，9-纸板，10-待测血清反应管，11-底座，12-海绵，13-半圆形凹槽,14-容量瓶放置槽，15-试剂瓶移放槽，16-透明袋，17-放置槽区域。

具体实施方式

一种补体旁路途径b因子功能检测试剂盒。一种补体旁路途径b因子功能检测试剂盒。所述盒体1包括试管区域5，试剂瓶区域4，放置槽区域17，其他区域8；试管区域5上表面有一层纸板，该纸板上有试管孔，待测血清反应管10和对照组试管18穿过纸板上的孔，试管区域5的中间位置有一层平行于盒体1底面的纸板9，纸板9设有与试管区域5上表面纸板对应的孔，试管区域5底部设置底座11，底座11上有与试管底部对应的半圆形凹槽13，半圆形凹槽13与纸板9上的孔位置对应，半圆形凹槽13表面铺设海绵12；试剂瓶区域4有多个凹槽，用于放置试剂瓶；放置槽区域17包括试剂瓶移放槽15和容量瓶放置槽14，试剂瓶移放槽15用于实验操作过程中试剂瓶的暂时放置，容量瓶放置槽14用于放置稀释溶液的容量瓶；所述其他区域8上设有u形凹槽6和多个吸管放置槽7；盒体1的侧面均为双层侧面3，该双层侧面3中间留有缝隙。

所述试剂瓶区域4放置眼镜蛇毒因子401、乏b因子血清402，兔红细胞403，mg-egta缓冲液404，正常参考血清405。

所述盒体1上有盒盖2，盒盖2周围能折叠，当盒盖2盖上时，盒盖2周围的折叠面卡入双层侧面3中间的缝隙。

所述盒体1的外表面为防水材料。

所述试剂瓶区域4、其他区域8的材料为泡沫材料。

所述正常参考血清405、眼镜蛇毒因子401、乏b因子血清402的复溶体积分别为1ml、0.1ml、1ml；所述兔红细胞403的体积是1ml、mg-egta缓冲液404体积是3.5ml。

所述盒体1内侧设有透明袋16，透明袋16里用于放置操作用手套。

所述u形凹槽6用于放置冷生理盐水瓶，冷生理盐水体积是5ml。

所述对照组试管18和待测血清反应管10为多个。

工作原理是：该试剂盒利用cvf能特异激活血清补体旁路途径的特点，构建灵敏的补体旁路途径溶血反应体系。cvf能与血清补体b因子特异结合，形成cvfb复合物，在有mg2+和d因子的条件下，cvfb复合物能被d因子识别并酶切成cvfbb，cvfbb具有c3/c5转化酶活性，从而可以特异激活补体旁路途径，产生溶血反应。b因子是影响旁路途径转化酶形成的关键因子。试剂盒使用的乏b因子血清保证了参与形成cvfbb的b因子均来自待检血清，溶血反应的程度高低也就反映了待检血清中的b因子含量和活性高低，从而可以衡量待检血清中b因子功能的正常与否。反应体系中使用的mg-egta缓冲液保证血清补体不会产生经典途径的溶血反应，从而排除了补体旁路途径以外的其它途径对检测的可能干扰。

盒体1封闭时，该试剂盒的盒盖2周围可折叠的插入试剂盒的双层侧面3中的缝隙里，使得盒盖封闭的更严实。使用时，盒体1打开，盒盖2内部有透明袋16，透明袋里放置操作用手套，戴上操作用手套，开始操作。盒子的试剂瓶区域放置的眼镜蛇毒因子401、乏b因子血清402，兔红细胞403，mg-egta缓冲液404和正常参考血清405作为实验的反应物质，实验组在待测血清反应管10中进行，对照组在对照组试验管18中进行，对照组用正常参考血清代替待测血清进行检测反应。待测血清反应管10和对照组试管18穿过纸板9上的孔放在半圆形凹槽13里，使得待测血清反应管10和对照组试验管18放置在盒子里不易因移动而损坏。容量瓶放置槽14用于放置稀释溶液的容量瓶，便于实验过程中稀释溶液；实验中用到冷生理盐水，冷生理盐水放置在u形凹槽中，其他所有的物质加完后再加冷生理盐水终止反应。吸管放置槽7里面有多个吸管，实验过程中用吸管滴取液体。

具体为：首先，用mg-egta缓冲液将正常参考血清、眼镜蛇毒因子、乏b因子血清复溶至指定体积，备用。取待测血清，用mg-egta缓冲液按1∶20稀释，取100ul加入到反应管中；正常对照组以正常参考血清代替待检血清进行检测。取100μl用mg-egta缓冲液1∶20稀释的乏b因子血清，加入到反应管中。反应管中加入100μl兔红细胞(1×10⁸/ml)，轻轻混合均匀。加入10μl浓度为1μg/ml的cvf，轻轻混合均匀，37℃孵育30min。加入0.5ml冷生理盐水终止反应，以2000r/min离心10min。取上清液于412nm处测吸光度(od值)。计算血清样本待检因子活性：血清样本待检因子活性(％)＝(待检血清od值/正常对照组od值)×100％。

以上所述，仅为本实用新型的具体实施方式，但本实用新型的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本实用新型的保护范围之内。因此，本实用新型的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。