一种新型冠状病毒特异性抗体双抗原夹心ELISA检测试剂盒及其制备方法与流程

文档序号:21772828发布日期:2020-08-07 19:20阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种新型冠状病毒sars-cov-2特异性抗体双抗原夹心elisa检测试剂盒,其特征在于,包括包被有新型冠状病毒sars-cov-2的np抗原和s1抗原的酶联板,以及酶标记的新型冠状病毒sars-cov-2的np抗原和s1抗原;

所述np抗原以seqid.no.1所示序列进行原核表达制备获得,所述s1抗原以seqid.no.2所示序列进行真核表达制备获得。

2.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,所述酶联板中np抗原和s1抗原的浓度比为1:1-3:1。

3.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,所述酶标记的新型冠状病毒sars-cov-2的np抗原和s1抗原的浓度比为1:1-3:1。

4.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,所述原核表达为通过bl21de3原核表达系统表达。

5.根据权利要求1所述试剂盒,其特征在于,所述真核表达为通过hek293真核表达系统表达。

6.根据权利要求1-5任意一项所述试剂盒,其特征在于,还包括如下组分中的一种或两种以上:

样品稀释液、洗涤液、酶标稀释液、显色剂、显色反应终止液、阴性血清、阳性血清。

7.权利要求1所述试剂盒的制备方法,其特征在于,包括:

步骤1、分别在seqid.no.1-2所示序列上添加筛选标签以及在序列两端添加酶切位点,然后再分别转入细菌表达质粒和真核表达质粒上,通过原核表达系统和真核表达系统表达出新型冠状病毒sars-cov-2的np抗原和s1抗原;

步骤2、将np抗原和s1抗原包被于酶联板上,采用封闭液封闭,获得包被有新型冠状病毒sars-cov-2的np抗原和s1抗原的酶联板;将np抗原和s1抗原用过碘酸钠法与hrp偶联,标记抗原透析后,分装后加入bsa和甘油,获得酶标记的新型冠状病毒sars-cov-2的np抗原和s1抗原。

8.根据权利要求7所述制备方法,其特征在于,所述细菌表达质粒为pet-28a。

9.根据权利要求7所述制备方法,其特征在于,所述真核表达质粒为pcmv5。


技术总结
本发明涉及生物技术领域,公开了一种新型冠状病毒特异性抗体双抗原夹心ELISA检测试剂盒及其制备方法。本发明所述试剂盒包括包被有新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的NP抗原和S1抗原的酶联板,以及酶标记的新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的NP抗原和S1抗原。本发明采用基因工程表达的经糖蛋白后修饰的S1蛋白以及NP蛋白,共同作为抗原建立了基于双抗原夹心的ELISA检测试剂盒,由于血清不需要稀释,灵敏度较间接ELISA高;而且双抗原夹心无需使用酶标二抗,因此试剂的特异性也高于ELISA间接法。本发明试剂盒可以快速、准确地进行SARS‑CoV‑2病毒感染后的确诊,提高检出率和正确率。

技术研发人员:张晓雷;李桂林;赵巧辉;徐延伟;付光宇
受保护的技术使用者:郑州伊美诺生物技术有限公司
技术研发日:2020.04.28
技术公布日:2020.08.07
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