一种对菟丝子和炒菟丝子药材中金丝桃苷薄层色谱鉴别法

1.本发明涉及中药材的薄层色谱鉴别技术领域，尤其涉及一种对菟丝子和炒菟丝子药材中金丝桃苷薄层色谱鉴别法。


背景技术：

2.菟丝子来源于旋花科菟丝子属植物南方菟丝子或菟丝子的干燥成熟种子，主产于吉林、辽宁、黑龙江和内蒙古等地。清炒作为菟丝子较好的炮制方法之一，其方法简单，易于操作，并有利于煎煮和粉碎。国家中医药管理局下发的《古代经典名方目录(第一批)》第64条“固阴煎”中明确使用菟丝子(炒香)该炮制品规格，但目前有关炒菟丝子质量控制指标仍无明确要求。金丝桃苷作为菟丝子、炒菟丝子的主要药效成分之一，具有良好的抗肿瘤、抗氧化、抗抑郁、保护心/脑缺血、保肝、免疫调节等作用。因此，对菟丝子和炒菟丝子中金丝桃苷的鉴别显得尤为重要。
3.经检索，中国专利申请号为cn200710026902.2的专利，公开了一种构建菟丝子药材hplc标准指纹图谱和鉴别药材质量的方法，用于菟丝子药材质量的鉴别，它公开了供试品中粉在20ml80％甲醇溶液中超声提取60min后，过滤得供试品溶液；高效液相色谱条件：色谱柱迪马c18柱(200
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4.6mm，5μm)，柱温30℃；流动相乙腈-1％乙酸溶液，梯度洗脱，流速1ml/min；检测波长350nm。取10批内蒙古产菟丝子药材进行测定，找出共有特征峰，经软件拟合建立标准指纹图谱，共有6个主要共有特征峰，为t1至t6号峰，保留时间分别为31.8min，44.3min，46.2min，46.7min，50.1min，68.4min；再用待测药材测定的指纹图谱与标准指纹图谱比较，其相似度大于0.900的药材应用于产品生产。上述专利中的构建菟丝子药材hplc标准指纹图谱和鉴别药材质量的方法存在以下不足：鉴别过程中供试品溶液制备时间长达1小时以上，使得鉴别效率低。


技术实现要素：

4.本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种对菟丝子和炒菟丝子药材中金丝桃苷薄层色谱鉴别法。
5.为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
6.一种对菟丝子和炒菟丝子药材中金丝桃苷薄层色谱鉴别法，包括如下步骤：
7.s1：对照品溶液的制备：取金丝桃苷对照品5mg，加甲醇适量溶解，备用；
8.s2：供试品溶液及对照药材溶液的制备；
9.s3：点样：用毛细管吸取对照品溶液、供试品溶液及对照药材溶液各1-2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上同一起始线上；
10.s4：展开剂的制备：分别移取体积比为8：2：2：1的甲醇、丙酮、乙酸乙酯和乙酸，置于干燥的分液漏斗中，混匀，排气，静置待用；
11.s5：展开；
12.s6：显色：将展开后的薄层板取出，晾干，喷上三氯化铝试液，二次晾干，加热至斑
点清晰，置于紫外灯365nm下检视。
13.优选地：所述对照品溶液为每1ml甲醇含1mg金丝桃苷。
14.优选地：所述供试品溶液的制备方式为将菟丝子和炒菟丝子粉末过四号筛，取0.4g粉末，加甲醇40ml，超声提取10min，过滤，滤液浓缩至5ml。
15.优选地：所述照药材溶液的制备方式为取南方菟丝子对照药材0.5g，加甲醇40ml，超声提取10min，过滤，滤液浓缩至5ml。
16.优选地：所述s3中点样时端点距离聚酰胺薄膜左、右边缘及各点间距离≥1cm，起始线距离聚酰胺薄膜下边缘≥1cm。
17.优选地：所述s5中展开操作具体为先取适量展开剂加入双槽展开缸的一侧，并贴上与展开缸同等高度的滤纸条，一端浸入展开剂中，密闭20min，然后将已点样的薄层板固定于另一侧预平衡40min后，置于展开剂一侧进行展开，展距8cm。
18.优选地：所述三氯化铝试液为1％三氯化铝的乙醇溶液。
19.优选地：所述s5中展开温度为4℃～40℃，相对湿度为32％～88％。
20.本发明的有益效果为：
21.1.本发明提取供试品溶液及对照药材溶液方法时间较短，相比传统的加热方法，更为快速便捷，提高鉴别效率。
22.2.本发明以体积比为8：2：2：1的甲醇、丙酮、乙酸乙酯和乙酸为展开剂，相比以甲醇-冰醋酸-水作为展开剂，具有良好的分离度及展开效果，展开效果清晰。
23.3.本发明吸取对照品溶液、供试品溶液及对照药材溶液各1～2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，利用展开剂展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于紫外光灯365nm下检视，操作简单。
附图说明
24.图1为本发明提出的一种对菟丝子和炒菟丝子药材中金丝桃苷薄层色谱鉴别法的流程示意图；
25.图2为本发明提出的一种对菟丝子和炒菟丝子药材中金丝桃苷薄层色谱鉴别法的实施例1温度25℃湿度40％环境下菟丝子与炒菟丝子薄层色谱图；
26.图3为本发明提出的一种对菟丝子和炒菟丝子药材中金丝桃苷薄层色谱鉴别法的实施例2温度25℃湿度40％环境下菟丝子与炒菟丝子薄层色谱图。
27.图中：1～7：菟丝子、8：金丝桃苷对照品、9：南方菟丝子对照药材、10～16：炒菟丝子。
具体实施方式
28.下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
29.下面详细描述本专利的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利，而不能理解为对本专利的限制。
30.在本专利的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的
方位或位置关系，仅是为了便于描述本专利和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本专利的限制。
31.在本专利的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“设置”应做广义理解，例如，可以是固定相连、设置，也可以是可拆卸连接、设置，或一体地连接、设置。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本专利中的具体含义。
32.实施例1：
33.一种对菟丝子和炒菟丝子药材中金丝桃苷薄层色谱鉴别法，如图1和图2所示，包括如下步骤：
34.s1：对照品溶液的制备：取金丝桃苷对照品5mg，加甲醇适量溶解，备用；
35.s2：供试品溶液及对照药材溶液的制备；
36.s3：点样：用毛细管吸取对照品溶液、供试品溶液及对照药材溶液各1-2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上同一起始线上；
37.s4：展开剂的制备：分别精密移取体积比为8：2：2：1的甲醇、丙酮、乙酸乙酯和乙酸，置于干燥的分液漏斗中，混匀，排气，静置待用；
38.s5：展开；
39.s6：显色：将展开后的薄层板取出，晾干，喷上三氯化铝试液，二次晾干，加热至斑点清晰，置于紫外灯365nm下检视。
40.所述对照品溶液为每1ml甲醇含1mg金丝桃苷。
41.所述供试品溶液的制备方式为将菟丝子和炒菟丝子粉末过四号筛，取0.4g粉末，加甲醇40ml，超声提取10min，过滤，滤液浓缩至5ml。
42.所述照药材溶液的制备方式为取南方菟丝子对照药材0.5g，加甲醇40ml，超声提取10min，过滤，滤液浓缩至5ml。
43.所述s3中点样时端点距离聚酰胺薄膜左、右边缘及各点间距离≥1cm，起始线距离聚酰胺薄膜下边缘≥1cm。
44.所述s5中展开操作具体为先取适量展开剂加入双槽展开缸的一侧，并在该侧内壁贴上与展开缸同等高度的滤纸条，一端浸入展开剂中，密闭20min，然后将已点样的薄层板固定于另一侧预平衡40min后，置于展开剂一侧进行展开，展距8cm。
45.所述三氯化铝试液为1％三氯化铝的乙醇溶液。
46.所述s5中展开温度为4℃～40℃，相对湿度为32％～88％，本实施例中，优选的温度25℃湿度40％，在此环境中分离度和展开效果良好，温度和相对湿度对薄层色谱结果无显著影响。
47.本实施例在使用时，吸取对照品溶液、供试品溶液及对照药材溶液各1～2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以体积比为8：2：2：1的甲醇、丙酮、乙酸乙酯和乙酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于紫外光灯365nm下检视，相比以甲醇-冰醋酸-水作为展开剂，具有良好的分离度及展开效果，展开效果清晰。
48.实施例2：
49.一种对菟丝子和炒菟丝子药材中金丝桃苷薄层色谱鉴别法，如图1和图3所示，包括如下步骤：
50.s1：对照品溶液的制备：取金丝桃苷对照品5mg，加甲醇适量溶解，备用；
51.s2：供试品溶液及对照药材溶液的制备；
52.s3：点样：用毛细管吸取对照品溶液、供试品溶液及对照药材溶液各1-2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上同一起始线上；
53.s4：展开剂的制备：分别精密移取体积比为8：2：2：1的甲醇、丙酮、乙酸乙酯和乙酸，置于干燥的分液漏斗中，混匀，排气，静置待用；
54.s5：展开；
55.s6：显色：将展开后的薄层板取出，晾干，喷上三氯化铝试液，二次晾干，加热至斑点清晰，置于紫外灯365nm下检视。
56.所述对照品溶液为每1ml甲醇含1mg金丝桃苷。
57.所述供试品溶液的制备方式为将菟丝子和炒菟丝子粉末过四号筛，取0.5g粉末，加甲醇40ml，超声提取10min，过滤，滤液浓缩至5ml。
58.所述照药材溶液的制备方式为取南方菟丝子对照药材0.5g，加甲醇40ml，超声提取10min，过滤，滤液浓缩至5ml。
59.所述s3中点样时端点距离聚酰胺薄膜左、右边缘及各点间距离≥1cm，起始线距离聚酰胺薄膜下边缘≥1cm。
60.所述s5中展开操作具体为先取适量展开剂加入双槽展开缸的一侧，并在该侧内壁贴上与展开缸同等高度的滤纸条，一端浸入展开剂中，密闭15min，然后将已点样的薄层板固定于另一侧预平衡60min后，置于展开剂一侧进行展开，展距8cm。
61.所述三氯化铝试液为1％三氯化铝的乙醇溶液。
62.所述s5中展开温度为4℃～40℃，相对湿度为32％～88％，本实施例中，优选的温度25℃湿度40％，在此环境中分离度和展开效果良好，温度和相对湿度对薄层色谱结果无显著影响。
63.本实施例在使用时，吸取对照品溶液、供试品溶液及对照药材溶液各1～2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以体积比为8：2：2：1的甲醇、丙酮、乙酸乙酯和乙酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于紫外光灯365nm下检视，相比以甲醇-冰醋酸-水作为展开剂，具有良好的分离度及展开效果。
64.以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。