一种快速测定食品中苯甲酸钠含量的方法

1.本发明涉及食品分析检测技术领域。更具体地说，本发明涉及一种快速测定食品中苯甲酸钠含量的方法。


背景技术：

2.食品添加剂是为改善食品色、香、味等品质，以及为防腐和加工工艺的需求而加入食品中的人工合成或者天然物质。目前我国食品添加剂有23个类别，包括着色剂、酸度调节剂、膨松剂、甜味剂、防腐剂等。食品添加剂大大促进食品工业的发展，被誉为食品工业的灵魂。其中防腐剂在现代食品技术中已成为一种越来越重要的食品添加剂，防腐剂可以防止由微生物引起的食品腐败变质，延长食品的保存期，同时还具有防止微生物污染引起的食物中毒作用。食品防腐通常使用化学防腐剂，如苯甲酸和山梨酸及其各自的钠、钾和钙盐。其中，苯甲酸钠廉价易得，是我国乃至全世界普遍使用的化学合成防腐剂，长期以来一直用在果酱、碳酸饮料、果汁饮料、酱油等多种食品中。虽然苯甲酸钠广泛用于保存，但是人体一旦摄入这种防腐剂超过允许限度，可能会导致非免疫接触性荨麻疹和哮喘等过敏反应。基于防腐剂的规定和症状，建立快速高灵敏度的苯甲酸钠快检方法是食品行业和监管当局的一个重要问题。
3.苯甲酸钠的常规检测方法有高效液相色谱法(hplc)、薄层色谱(tlc)、气相色谱
‑
质谱联用(gc
‑
ms)、液相色谱
‑
质谱联用(lc
‑
ms)、毛细管电泳(ce)和胶束电动色谱法等。尽管这些方法测定的精密度和准确度较高，但是缺陷也是显而易见的，包括仪器设备昂贵、需要专人操作、检测成本高，样品前处理费时费力等等，因此在食品监管过程中难以用于现场即时检测。开发低成本、易于操作和快速的苯甲酸钠检测方法仍然是十分迫切的需要。目前，可用于食品中苯甲酸钠含量测定的可视化传感方法还未见报道。


技术实现要素：

4.本发明的目的是提供一种快速测定食品中苯甲酸钠含量的方法，其具有可视化的优点，可实现食品中苯甲酸钠含量的精准检测。
5.为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种快速测定食品中苯甲酸钠含量的方法，包括以下步骤：
6.s1、将待测溶液与daao、d型氨基酸在第一缓冲液中混合反应，得到第一混合液，备用；
7.s2、将s1得到的第一混合液加入到含有2d
‑
mof、tmb的第二缓冲液中，反应得到第二混合液；
8.s3、设置多组实验例，每组实验例的待测溶液中的苯甲酸钠的含量由0依次递增至6.90mmol/l，根据每组实验例得到的所述第二混合液的颜色，制作得到苯甲酸钠含量比色卡；
9.s4、将待测食品依次进行上述s1
‑
s2的操作，将反应得到第二混合液的颜色与s3中
的得到的苯甲酸钠含量对比系统进行比，从而快色测定食品中苯甲酸钠含量。
10.优选的是，所述的一种快速测定食品中苯甲酸钠含量的方法中，s1中待测溶液与daao、d型氨基酸在第一缓冲液中混合反应前，首先对待测溶液进行稀释，然后对稀释后的待测样品依次进行离心和过滤的操作，将得到的滤液作为待测溶液与daao、d型氨基酸在第一缓冲液中混合反应。
11.优选的是，所述的一种快速测定食品中苯甲酸钠含量的方法中，s1中所使用的d型氨基酸为d型丝氨酸、d型丙氨酸、d型苯丙氨酸、d型酪氨酸或d型亮氨酸中的任意一种。
12.优选的是，所述的一种快速测定食品中苯甲酸钠含量的方法中，s1中所使用的daao的浓度为5
‑
15u/ml，d型氨基酸的浓度为20
‑
80mmol/l。
13.优选的是，所述的一种快速测定食品中苯甲酸钠含量的方法中，s1中所述第一缓冲液为tris
‑
hcl缓冲体系或者磷酸缓冲体系，其ph为5.0
‑
8.5。
14.优选的是，所述的一种快速测定食品中苯甲酸钠含量的方法中，s1中将待测溶液与daao、d型氨基酸在第一缓冲液中混合反应时，反应温度为37℃，反应时间为2
‑
10分钟。
15.优选的是，所述的一种快速测定食品中苯甲酸钠含量的方法中，s2中的2d
‑
mof为以四(4
‑
羧基苯基)卟啉氯化铁(tcpp(fe))为有机配体，以cu
2+
、co
2+
或zn
2+
为中心离子制备的mof材料。
16.优选的是，所述的一种快速测定食品中苯甲酸钠含量的方法中，s2中的2d
‑
mof的浓度为1mg/ml，tmb的浓度为5mg/ml。
17.优选的是，所述的一种快速测定食品中苯甲酸钠含量的方法中，s2中所述第二缓冲液为乙酸缓冲体系或者磷酸缓冲体系，其ph为3.0
‑
5.5。
18.优选的是，所述的一种快速测定食品中苯甲酸钠含量的方法中，s2中将s1得到的第一混合液加入到含有2d
‑
mof、tmb的第二缓冲液中反应时的反应温度为37℃，反应时间为15
‑
25分钟。
19.本发明的有益效果是：
20.1、本发明中测定食品中苯甲酸钠含量的方法选择性良好，食品中其他常见添加剂，如对羟基苯甲酸乙酯、山梨酸钾、4
‑
氨基苯甲酸、乳酸钙以及柠檬酸等，对测定均无干扰。
21.2、本发明中测定食品中苯甲酸钠含量的方法准确度高，回收率在95.0
‑
105.0％之间
22.3、本发明中测定食品中苯甲酸钠含量的方法可在30分钟以内实现食品中苯甲酸钠的可视化测定。本发明操作简便，可实现快速测定，选择性高，成本低廉，实用性强，在实际推广中具有重要的意义。
23.本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
24.图1为本发明所述的苯甲酸钠含量比色卡的示意图；
25.图2为本发明中各组实验例得到的第二混合液的吸光度；
26.图3为本发明中实施例1的可视化测定结果；
27.图4为本发明中实施例2的可视化测定结果；
28.图5为本发明中实施例3的可视化测定结果。
具体实施方式
29.下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
30.需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
31.<实施例1>
32.利用本发明中的快速测定食品中苯甲酸钠含量的方法测定碳酸饮料中的苯甲酸含量：
33.从当地超市购买碳酸饮料，充分摇匀后取样品50μl，稀释100倍，然后离心，上清液用0.22μm滤膜过滤，滤液作为待测溶液使用。
34.取50μl待测样品与50μl daao(10u/ml)、50μl d
‑
丝氨酸(50mmol/l)以及100μl tris
‑
hcl缓冲液(ph为7.0)，37℃反应5分钟。
35.酶反应结束后，取40μl上述混合液，加到870μl的醋酸缓冲液(ph为4.0)、40μl tmb(5mg/ml)和50μl的2d
‑
mof分散液[cu
‑
tcpp(fe)，1mg/ml]中，37℃条件下反应20分钟。
[0036]
反应结束后，观察样品颜色变化，并与苯甲酸钠标准溶液(浓度为国标规定限度6.90mmol/l)参与反应的样品颜色进行目测对比，进而测定样品在652nm的紫外吸收值。结果表明，某品牌碳酸饮料中苯甲酸钠含量远低于国标规定限度，通过紫外测定以及定量分析，得出其中苯甲酸钠浓度为3.50mmol/l。
[0037]
<实施例2>
[0038]
利用本发明中的快速测定食品中苯甲酸钠含量的方法测定某品牌果汁中的苯甲酸含量：
[0039]
从当地超市购买果汁饮料，充分摇匀后取样品50μl，稀释100倍，然后离心，上清液用0.22μm滤膜过滤，滤液作为待测溶液使用。
[0040]
取50μl待测样品与50μl的daao(15u/ml)、50μl d
‑
丝氨酸(75mmol/l)以及100μl的tris
‑
hcl缓冲液(ph为7.0)，37℃条件下反应5分钟。
[0041]
酶反应结束后，取40μl上述混合液，加到870μl的醋酸缓冲液(ph为3.5)、40μl tmb(5mg/ml)和50μl的2d mof分散液[co
‑
tcpp(fe)，1mg/ml]中，37℃的条件下反应20分钟。
[0042]
反应结束后，观察样品颜色变化，并与苯甲酸钠标准溶液(浓度为国标规定限度6.90mmol/l)参与反应的样品颜色进行目测对比，进而测定样品在652nm的紫外吸收值。结果表明，果汁饮料中苯甲酸钠含量远低于国标规定限度，通过紫外测定以及定量分析，得出其中苯甲酸钠浓度为2.45mmol/l。
[0043]
<实施例3>
[0044]
利用本发明中的快速测定食品中苯甲酸钠含量的方法测定食用醋中的苯甲酸含量：
[0045]
从当地超市购买果汁饮料，充分摇匀后取样品50μl，稀释500倍，然后离心，上清液用0.22μm滤膜过滤，滤液作为待测溶液使用。
[0046]
取50μl待测样品与50μl daao(5u/ml)、50μl d
‑
丝氨酸(30mmol/l)以及100μl tris
‑
hcl缓冲液(ph为8.0)，37℃条件下反应5分钟。
[0047]
酶反应结束后，取40μl上述混合液，加到870μl的醋酸缓冲液(ph 3.5)、40μl tmb(5mg/ml)和50μl 2d mof分散液[zn
‑
tcpp(fe)，1mg/ml]中，37℃条件下反应20分钟。
[0048]
反应结束后，观察样品颜色变化，并与苯甲酸钠标准溶液(浓度为国标规定限度6.90mmol/l)参与反应的样品颜色进行目测对比，进而测定样品在652nm的紫外吸收值。结果表明，食用醋中苯甲酸钠含量接近国标规定限度，通过紫外测定以及定量分析，得出其中苯甲酸钠浓度为6.82mmol/l。
[0049]
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。