一种基于聚酰胺薄层色谱鉴别三叶青药材的方法与流程

1.本发明属于中药鉴别技术领域，具体地，涉及一种基于聚酰胺薄层色谱鉴别三叶青药材的方法。


背景技术：

2.三叶青(tetrastigma hemsleyanum diels et gilg)为葡萄科三叶崖爬藤属多年生常绿藤本植物，是我国特有的珍稀药用植物。三叶青具有清热解毒、消肿止痛、化痰散结的功效，用于治疗高热惊厥、肺炎、肝炎、毒蛇咬伤等症。三叶青主要分布在浙江、江西、福建、湖南、广西、贵州等地。
3.三叶青药材的质量控制成分为三叶青中黄酮类物质。目前，使用硅胶薄层色谱分析法对三叶青块根药材中黄酮类成分进行鉴别时，由于三叶青中黄酮类成分种类较多，需要的样品取样量较大(2.0g)；提取溶剂用量多(50ml)，且提取后溶液需要浓缩和不同溶剂萃取，鉴别方法较为繁琐。
4.因此，需要寻找一种新的三叶青药材质量控制成分鉴别方法，使样品取样量小，提取溶剂用量少，鉴别方法操作简单准确重复性好。


技术实现要素：

5.为了解决上述技术问题中的至少一个，本发明采用的技术方案如下：
6.本发明第一方面提供一种基于聚酰胺薄层色谱鉴定三叶青药材的方法，包括通过以下鉴定黄酮类物质的步骤：
7.s1，取待鉴定三叶青药材，粉碎、过筛后得三叶青药材粉末；
8.s2，取步骤s1获得的三叶青药材粉末，按1g三叶青药材粉末5～10ml的量添加70％甲醇；
9.s3，超声提取30min～2h，冷却至室温；
10.s4，取提取液0.5～1ml，经微孔膜过滤后，取2～6μl点样在聚酰胺薄膜上进行层析展开，然后利用紫外波长检测，
11.根据紫外检测结果，判断三叶青药材质量。
12.聚酰胺对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。这种氢键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。层析时，展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离物质在聚酰胺膜表面发生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程，就能使分离物质达到分离目的。
13.在本发明中，所述黄酮类物质选自黄酮、黄烷醇、异黄酮、黄酮醇和花青素中的至少一种。
14.在本发明的一些实施方案中，步骤s1中，所述过筛是指过40目筛。
15.在本发明的一些实施方案中，步骤s2中，按1g三叶青药材粉末6～8ml的量添加70％甲醇；在本发明的一些具体实施方案，按1g三叶青药材粉末6～8ml的量添加70％甲醇，
例如，三叶青药材粉末的量为0.5g，可添加3ml 70％甲醇。再如，三叶青药材粉末的量为0.3g，可添加2ml 70％甲醇。
16.在本发明的一些实施方案中，步骤s3中，超声提取的条件为功率：400w，频率：40khz。在本发明的一些具体实施方案中，步骤s3中，超声提取1h。
17.在本发明的一些实施方案中，步骤s4中，所述微孔膜的微孔直径为0.45μm。
18.在本发明的一些实施方案中，步骤s4中，所述进行层析展开的展开剂为乙腈:水:丙酮:甲酸＝6.5:3:0.5:0.1(v/v)。
19.在本发明的一些实施方案中，所述进行层析展开的显色剂为3％三氯化铝乙醇溶液。
20.在本发明的一些实施方案中，利用紫外检测的紫外波长为360nm。
21.本发明的第二方面提供用于鉴定黄酮类物质的聚酰胺薄层色谱试剂在制备用于鉴定三叶青药材的试剂盒中的用途。
22.在本发明的一些实施方案中，所述黄酮类物质选自黄酮、黄烷醇、异黄酮、黄酮醇和花青素中的至少一种。
23.本发明的有益效果
24.相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
25.本发明利用聚酰胺薄层层析展开，在常压下即可完成对三叶青药材中黄酮类物质的鉴定，方便快速、准确可靠。
26.利用本发明的方法对三叶青药物中黄酮类物质进行鉴定，黄酮类成分荧光斑点清晰，分离度和rf值均较理想，满足鉴定的条件，为三叶青药物质量控制提供技术支持。
附图说明
27.图1示出了本发明实施例1中对三叶青药材中黄酮类物质进行薄层鉴定的结果。1、对照品：山柰酚
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芸香糖苷、芦丁、异檞皮；2、三叶青药材：供试品点样量5μl。
28.图2示出了本发明实施例2中对三叶青药材中黄酮类物质进行薄层鉴定的结果。1、对照品：山柰酚
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芸香糖苷、芦丁、异檞皮；2、三叶青药材：供试品点样量2μl；3、三叶青药材：供试品点样量3μl。
具体实施方式
29.为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。
30.实施例
31.以下例子在此用于示范本发明的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白，下述例子中披露的技术代表发明人发现的可以用于实施本发明的技术，因此可以视为实施本发明的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白，这里所公开的特定实施例可以做很多修改，仍然能得到相同的或者类似的结果，而非背离本发明的精神或范围。
32.除非另有定义，所有在此使用的技术和科学的术语，和本发明所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同，在此公开引用及他们引用的材料都将以引用的方式被并入。
33.那些本领域内的技术人员将意识到或者通过常规试验就能了解许多这里所描述
的发明的特定实施方案的许多等同技术。这些等同将被包含在权利要求书中。
34.下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的仪器设备，如无特殊说明，均为实验室常规仪器设备；下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
35.实施例1
36.1、仪器与试药
37.mettler.ae.50电子天平；高速多功能粉碎机(永康市铂欧五金制品有限公司600y型)；薄层层析展开缸(120mm
×
120mm)；tlc visualizer型薄层色谱数码成像系统(瑞士卡玛)；kq
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400db型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；10cm
×
10cm聚酰胺薄膜(台州市路桥四甲生化塑料厂)。
38.供试品三叶青块根饮片药材从亳州市齐心药业销售有限公司购入(批号：20200825)；山柰酚
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芸香糖苷对照品(批号：af8112493，纯度：98％)购自成都埃法生物科技有限公司；芦丁对照品(批号：bcy
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000507，纯度：98％)购自江西佰草源生物科技有限公司；异檞皮苷对照品(批号：af9102022，纯度：98％)购自成都埃法生物科技有限公司。
39.甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、甲酸、三氯化铝均为分析纯；水(超纯水)。
40.2、方法
41.2.1薄层色谱条件
42.薄层层析展开缸(120mm
×
120mm)；聚酰胺薄膜(10cm
×
5cm)。
43.点样量：对照品溶液3μl、供试品溶液5μl。紫外检测波长：360nm。
44.2.2溶液的制备
45.2.2.1对照品溶液
46.精密称取山柰酚
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芸香糖苷、芦丁、异檞皮苷对照品各约1.5mg，分别加甲醇定容至1ml，取0.1ml置于2ml容量瓶中，再加甲醇定容至刻度线。得浓度约为0.075mg/ml对照品溶液，备用。
47.2.2.2供试品溶液
48.取三叶青中药饮片适量，粉碎，过40目筛，精密称取三叶青粉末约0.5g，置于5ml离心瓶中，加3ml 70％甲醇定容至刻度线，密塞，超声(功率：400w，频率：40khz)60min，放冷至室温，取1ml该溶液经0.45μm微孔滤膜滤过，取过滤液作为供试品溶液。
49.2.3薄层层析色谱
50.取2.2.1项下对照品溶液、2.2.2项下供试品溶液，按2.1项下薄层色谱条件点样展开，展开剂(乙腈:水:丙酮:甲酸＝6.5:3:0.5:0.1(v/v))展开距离约为6cm，显色剂为3％三氯化铝乙醇溶液，紫外检测薄层色谱图在与对照品相应位置黄酮类成分荧光斑点清晰，如图1所示。其中，山柰酚
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芸香糖苷分离度r值大于1.5，rf值为0.41；芦丁分离度r值为1.1，rf值为0.32；异檞皮苷r值大于1.5，rf值为0.25；分离度和rf值均较理想。
51.实施例2
52.仪器与试药同实施例1。
53.1、方法
54.1.1薄层色谱条件
55.薄层层析展开缸(120mm
×
120mm)；10cm
×
5cm聚酰胺薄膜。
56.点样量：对照品溶液3μl、供试品溶液2μl、3μl。紫外检测波长：360nm。
57.2.2溶液的制备
58.2.2.1对照品溶液
59.精密称取山柰酚
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芸香糖苷、芦丁、异檞皮苷对照品各约1.5mg，分别加甲醇定容至1ml，取0.1ml置于2ml容量瓶中，再加甲醇定容至刻度线。得浓度约为0.075mg/ml对照品溶液，备用。
60.2.2.2供试品溶液
61.取三叶青中药饮片适量，粉碎，过筛，精密称取三叶青粉末约0.3g，置于5ml离心瓶中，加2ml 70％甲醇定容至刻度线，密塞，超声(功率：400w，频率：40khz)60min，放冷至室温，取1ml该溶液经0.45μm微孔滤膜滤过，取过滤液作为供试品溶液。
62.2.3薄层层析色谱
63.取2.2.1项下对照品溶液、2.2.2项下供试品溶液，按2.1项下薄层色谱条件点样展开，展开剂(乙腈:水:丙酮:甲酸＝6.5:3:0.5:0.1(v/v))展开距离约为6cm，显色剂为3％三氯化铝乙醇溶液，紫外检测薄层色谱图在与对照品相应位置黄酮类成分荧光斑点清晰，如图2所示。山柰酚
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芸香糖苷分离度r值大于1.5，rf值为0.39；芦丁分离度r值大于1.5，rf值为0.33；异檞皮苷r值大于1.5，rf值为0.26；分离度和rf值均较理想。
64.在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。