快速定性麦卢卡蜂蜜的方法与流程

本发明涉及检测领域，特别是涉及麦卢卡蜂蜜的检测领域，更为具体的说是涉及快速定性麦卢卡蜂蜜的方法。

背景技术：

麦卢卡蜂蜜是新西兰特有的一种珍贵蜜种，是由蜜蜂采集当地一种灌木植物—麦卢卡(leptospermumscoparium)的花蜜酿造而成的。麦卢卡蜂蜜与其他蜂蜜的区别在于其具有强大而独特的抗菌活性。蜂蜜一般都具有抗菌活性，这是由蜂蜜本身的高渗透性、较强的酸度并且一般含有过氧化物造成的。而麦卢卡蜂蜜的抗菌活性则不依赖于过氧化物，因此被称为非过氧化抗菌活性(non-peroxideantibacterialactivity,npa)。医学研究表明，麦卢卡蜂蜜优越的抗菌活性在预防伤口感染，促进伤口愈合、治疗足部溃疡等疾病方面，都体现出了它独特的药用价值。

随着麦卢卡蜂蜜的市场价值不断提高，其销量也逐年上升。据统计，新西兰的麦卢卡蜂蜜出口近10年来每年增长10％左右。

但是同时巨大的市场利益也催生了相关产品的造假。根据新西兰一家蜂农协会的统计，新西兰每年大约生产1700吨至2000吨麦卢卡蜂蜜，而在全球范围内，每年以麦卢卡名义出售的蜂蜜高达1万吨以上。由此可见，市场销售的麦卢卡蜂蜜中造假产品的所占比例已高达80％。

目前现有的检测技术中使用较广的是以特定的特征标志物进行检测，但是这种方法有其弊端。一来，这种方法依赖于样品的精确分离，因而通常需要在检测中配置高效液相色谱仪等仪器设备，不仅价格昂贵而且必须送检到特定的实验室，无法实现现场、快速检测；二来，最纯正的麦卢卡蜂蜜是来自单花种麦卢卡，该种蜂蜜称为单花种麦卢卡蜂蜜，是等级最高的麦卢卡蜂蜜，但是由于在麦卢卡生长环境中存在有其他花种，因此极有可能混入其他花蜜，在现有技术中这种蜂蜜被称为多花种麦卢卡蜂蜜，二者虽然均存在有特征标志物，但是其级别不同，因此现有的依赖单一特征标志物的检测方法无法很好的区分出单花种麦卢卡蜂蜜和多花种麦卢卡蜂蜜。

综上所说，对于本领域的技术人员来说，如何能够有效区分掺假蜂蜜、单花种麦卢卡蜂蜜、多花种麦卢卡蜂蜜是研究的热点和科研难点。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是，如何快速、有效的区分掺假麦卢卡蜂蜜与天然麦卢卡蜂蜜，特别是区分天然麦卢卡蜂蜜中的单花种麦卢卡蜂蜜与多花种麦卢卡蜂蜜，从而快速定性待检样品。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种快速定性麦卢卡蜂蜜的方法，该方法为分子荧光法，是以270nm为激发波长，照射待检样品，并在280nm～550nm范围内扫描发射光谱，

a.如果在305nm和360nm处各有一个荧光峰，且在360nm处的特征荧光峰强度为305nm处荧光峰强度的2倍以上，则该待检样品为麦卢卡蜂蜜，且为单花种麦卢卡蜂蜜；

b.如果在305nm和360nm处各有一个荧光峰，且360nm处的荧光峰强度为305nm处荧光峰强度的1倍-2倍之间，则该待检样品为麦卢卡蜂蜜，且为多花种麦卢卡蜂蜜；

c.如果在360nm处无荧光峰，则该待检样品为非麦卢卡蜂蜜。

进一步优选地，所述待检样品以水稀释定容。本发明的发明人意外发现仅以水为稀释溶液进行样品前处理，可以直接得到可用于荧光检测的样品溶液，而无需像现有技术中那样，需要通过高效液相色谱仪进行预处理。

进一步优选地，所述分子荧光法是以荧光分光光度计进行检测，其检测条件为：激发波长：270nm；激发狭缝：10nm；发射狭缝：10nm；发射光谱扫描范围：280nm～550nm；扫描速度：1200nm/min。

在一个优选的技术方案中，所述稀释倍数为50。也就是说将1g样品稀释在50ml的水中。从而可以获得更好的荧光吸收色谱峰。

采用本发明公开的定性检测方法能够快速、准确的定性检测出单花种麦卢卡蜂蜜、多花种麦卢卡蜂蜜以及其他掺假蜂蜜。本方法无需高效液相色谱仪等昂贵仪器和复杂的分离处理，因此无需送检到特定实验室进行检测，从而能够满足实际工作中对于麦卢卡蜂蜜定性检测的各种场合。

附图说明

图1为单花种麦卢卡蜂蜜荧光光谱图。

图2为多花种麦卢卡蜂蜜荧光光谱图。

图3为三叶草蜂蜜荧光光谱图。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面我们结合具体的实施例对本发明进行进一步的阐述。

本发明实施例中采用仪器为f-4600分子荧光仪(日本hitachi公司)。试剂与材料除非有特别声明，其他均为市售产品。

本发明实施例中所用的蜂巢成熟原蜜来源于新西兰各地区；商品化蜂蜜购自各大超市。

实施例1

样品前处理：

准确称取1.000g样品，置于50ml带盖聚四氟乙烯离心管中，用高纯水稀释定容至50ml，涡旋振荡混匀，取约5ml上层清液，过0.45μm尼龙微孔滤膜，待仪器检测。

仪器测定条件：

激发波长：270nm；激发狭缝：10nm；发射狭缝：10nm；发射光谱扫描范围：280nm～550nm；扫描速度：1200nm/min。

如图1中所示，麦卢卡单花种蜂蜜在305nm和360nm处各有一个荧光峰，但360nm处的特征荧光峰强度为305nm处荧光峰强度的2倍以上；如图2中所示麦卢卡多花种蜂蜜在305nm和360nm处各有一个明显的荧光峰，且两者荧光强度相差不大，在1-2倍之间；如图3中所示，三叶草作为一种非麦卢卡蜂蜜，其在360nm处无明显的特征荧光峰。

实施例2

按照实施例1中的方法使用分子荧光光谱分析方法对已知来源的来自新西兰不同产地的麦卢卡、卡奴卡、三叶草、圣诞花、瑞瓦瑞瓦、甘露蜜等共计14个取自蜂巢的成熟原蜜样品进行检测。

分别将不同来源的麦卢卡、卡奴卡、三叶草、圣诞花、瑞瓦瑞瓦、甘露蜜等6个不同品种共计13个样品进行编号，并且记录其对应的蜂蜜种类。

然后按照实施例1中的方法使用分子荧光光谱分析方法对上述13个样品进行检测，并将检测结果与已知并记录的蜂蜜种类进行对照，检测及对照结果如表1所示，

表1：

由表1结果表明，我们所公开的检测方法结果与实际样品一致，表明本发明公开的检测方法准确、可靠。

实施例3

分别按照本发明(实施例1)公开的分子荧光光谱分析方法和新西兰初级产业部官方发布的花粉dna检测方法对来自新西兰和澳大利亚的42个商品化蜂蜜样品进行检测，检测结果如表2所示；

表2：

根据表2可以看出：20个来自新西兰标明为麦卢卡的商品化蜂蜜中，有18个样品为麦卢卡蜂蜜且为单花种麦卢卡蜂蜜，2个为非麦卢卡蜂蜜；2个来自新西兰标明为麦卢卡混合蜜的商品化蜂蜜中，有1个样品为多花种麦卢卡蜂蜜，另一个为非麦卢卡蜂蜜；2个来自澳大利亚标明为麦卢卡的商品化蜂蜜中，有1个样品为麦卢卡蜂蜜，且为单花种麦卢卡蜂蜜，另一个为非麦卢卡蜂蜜；来自新西兰和澳大利亚共计18个标明为非麦卢卡的商品化蜂蜜中检测结果中均不具有360nm荧光峰，为非麦卢卡蜂蜜。

并且通过对照上述42个来自新西兰和澳大利亚的商品化蜂蜜样品的检测结果与新西兰初级产业部官方的花粉dan检测结果完全一致，说明本发明的检测结果准确、可靠，与麦卢卡花粉dna检测结果准确性一致。相较于dna检测方法，由于其需要先提取dna，再进行pcr扩增，检测周期较长，因此本发明公开的方法局域快速、灵敏、结果稳定可靠的优势。

以上所述是本发明的具体实施方式。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。