甲泼尼龙杂质B的分离纯化方法与流程

本发明涉及分析化学，尤其是涉及一种甲泼尼龙杂质b的分离纯化方法。

背景技术：

1、甲泼尼龙(methylprednisolone，cas：83-43-2)是一种人工合成的不含卤素的糖皮质激素药物，具有抗炎、免疫抑制、抗过敏、抗休克等药理作用。该药的抗炎作用较强，相当于氢化可的松的5倍，是强的松的1.4倍。在众多的糖皮质激素中，甲泼尼龙与糖皮质激素受体的亲和力最强，是氢化可的松的12倍，强的松的23倍。而盐皮质激素样作用(如水、钠潴留)微弱，约为脱氧皮质酮的1/200，并显著小于强的松，对下丘脑—垂体—肾上腺轴的抑制作用较弱，且该药本身即以活性成分形式存在，起效迅速。

2、甲泼尼龙一般通过上碘、置换、水解等步骤获得成品。随着近年来药品审评力度的加大，对于原料药合成过程中起始物、中间体、成品的杂质研究和检测要求越来越高，因此对单个杂质的分离制备方法的开发也显得尤为重要。甲泼尼龙杂质b(简称“21-双羟物”)是甲泼尼龙成品中的杂质，虽然名为单一杂质，但是市场上购买的甲泼尼龙杂质b实际上都是21-双羟物和21-醛的混合物，无法购买获得纯粹的甲泼尼龙杂质b。甲泼尼龙杂质b和甲泼尼龙21-醛杂质的结构式如下：

3、

4、目前usp40、ep10、bp2021对甲泼尼龙的有关物质测定方法均有收载，但方法相差较大，且通过以上方法均无法对甲泼尼龙杂质b和甲泼尼龙21-醛杂质进行有效分离。经文献检索也未发现能对二者进行有效分离的方法。

5、有鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的主要目的在于提供一种甲泼尼龙杂质b的分离纯化方法。

2、本发明提供了一种甲泼尼龙杂质b的分离纯化方法，采用高效液相色谱法，色谱条件包括：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以水-乙腈-酸试剂为流动相a，以乙腈为流动相b，进行梯度洗脱。

3、进一步的，以流动相体积为100％计，梯度设置如下：

4、

5、

6、进一步的，以流动相体积为100％计，梯度设置如下：

7、

8、进一步的，所述流动相a中水、乙腈和酸试剂的体积比选自(92-98)：(2-8)：(0.5-1.5)。

9、进一步的，所述流动相a中水、乙腈和酸试剂的体积比选自(95-98)：(2-5)：(0.5-1)。

10、进一步的，所述酸试剂选自醋酸、甲酸或磷酸。

11、进一步的，所用检测器选自紫外检测器。

12、进一步的，所用波长选自250-260nm。

13、进一步的，所用波长选自252-258nm。

14、进一步的，所用流速选自2.5-3.5ml/min。

15、进一步的，所用流速选自2.8-3.2ml/min。

16、进一步的，采用高效液相色谱法，色谱条件包括：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以水-乙腈-酸试剂为流动相a，以乙腈为流动相b，所述流动相a中水、乙腈和酸试剂的体积比选自(95-98)：(2-5)：(0.5-1)，进行梯度洗脱；所用检测器选自紫外检测器，波长选自252-258nm；流速选自2.8-3.2ml/min；以流动相体积为100％计，梯度设置如下：

17、

18、

19、进一步的，所述流动相a中水、乙腈和醋酸的体积比选自95：5：1。

20、进一步的，所用流速选自3ml/min。

21、进一步的，所用波长选自254nm。

22、进一步的，所述酸试剂选自醋酸。

23、进一步的，以流动相体积为100％计，梯度设置如下：

24、

25、进一步的，采用高效液相色谱法，色谱条件包括：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以水-乙腈-醋酸为流动相a，以乙腈为流动相b，所述流动相a中水、乙腈和醋酸的体积比选自95：5：1，进行梯度洗脱；所用检测器选自紫外检测器，波长选自254nm；所用流速选自3.0ml/min；以流动相体积为100％计，梯度设置如下：

26、

27、进一步的，还包括如下步骤：将甲泼尼龙杂质b溶于溶样液中，得到供试品溶液，将供试品溶液进行纯化分离。

28、进一步的，所述溶样液选自二甲亚砜。

29、进一步的，所用进样量为300μl。

30、本发明中的分离纯化在室温条件下进行，室温条件可以为20-30℃。

31、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

32、本发明提供的甲泼尼龙杂质b的分离纯化方法，通过对流动相、色谱柱等的优化设计，色谱柱易得，流动相体系简单，可准确、有效分离甲泼尼龙杂质b和甲泼尼龙21-醛杂质，可用于市售甲泼尼龙杂质b的分离纯化，以得到高纯度的甲泼尼龙杂质b，填补了市场上没有高纯度杂质b的空缺。

技术特征：

1.一种甲泼尼龙杂质b的分离纯化方法，其特征在于，采用高效液相色谱法，色谱条件包括：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以水-乙腈-酸试剂为流动相a，以乙腈为流动相b，进行梯度洗脱。

2.根据权利要求1所述的甲泼尼龙杂质b的分离纯化方法，其特征在于，以流动相体积为100％计，梯度设置如下：

3.根据权利要求1或2所述的甲泼尼龙杂质b的分离纯化方法，其特征在于，以流动相体积为100％计，梯度设置如下：

4.根据权利要求3所述的甲泼尼龙杂质b的分离纯化方法，其特征在于，所述流动相a中水、乙腈和酸试剂的体积比选自(92-98)：(2-8)：(0.5-1.5)。

5.根据权利要求4所述的甲泼尼龙杂质b的分离纯化方法，其特征在于，所述酸试剂选自醋酸、甲酸或磷酸。

6.根据权利要求1、2、4或5任一项所述的甲泼尼龙杂质b的分离纯化方法，其特征在于，所用流速选自2.5-3.5ml/min。

7.根据权利要求6所述的甲泼尼龙杂质b的分离纯化方法，其特征在于，所用检测器选自紫外检测器，所用波长选自250-260nm。

8.根据权利要求1、2、4、5或7任一项所述的甲泼尼龙杂质b的分离纯化方法，其特征在于，以十八烷基键合硅胶为填充剂，以水-乙腈-酸试剂为流动相a，以乙腈为流动相b，所述流动相a中水、乙腈和酸试剂的体积比选自(95-98)：(2-5)：(0.5-1)，进行梯度洗脱；所用检测器选自紫外检测器，波长选自252-258nm；所用流速选自2.8-3.2ml/min；以流动相体积为100％计，梯度设置如下：

9.根据权利要求8所述的甲泼尼龙杂质b的分离纯化方法，其特征在于，所述酸试剂选自醋酸。

10.根据权利要求1、2、4、5、7或9任一项所述的甲泼尼龙杂质b的分离纯化方法，其特征在于，还包括如下步骤：将甲泼尼龙杂质b溶于溶样液中，得到供试品溶液，将供试品溶液进行纯化分离。

技术总结
本发明提供了一种甲泼尼龙杂质B的分离纯化方法，涉及分析化学技术领域。分离纯化方法采用高效液相色谱法，色谱条件包括：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以水‑乙腈‑酸试剂为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱。本发明提供的甲泼尼龙杂质B的分离纯化方法，通过对流动相、色谱柱等的优化设计，色谱柱易得，流动相体系简单，可准确、有效分离甲泼尼龙杂质B和甲泼尼龙21‑醛杂质，可用于市售甲泼尼龙杂质B的分离纯化，以得到高纯度的甲泼尼龙杂质B，填补了市场上没有高纯度杂质B的空缺。

技术研发人员：丁丽,杨永周
受保护的技术使用者：天津药业研究院股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12