溴化苯基镁及其有关物质的分离检测方法及应用与流程

1.本发明涉及分析化学技术领域，尤其是涉及一种溴化苯基镁及其有关物质的分离检测方法及应用。


背景技术：

2.溴化苯基镁是合成反应中的常用原料。溴化苯基镁是由溴苯和镁屑反应制备得到，其起始原料溴苯，易分解产生的苯、苯酚和联苯等杂质。溴化苯基镁中含有多取代苯杂质(4-联苯基溴化镁、3-联苯基溴化镁)，当溴化苯基镁作为反应原料时，其含有的4-联苯基溴化镁、3-联苯基溴化镁容易与其他原料反应生成工艺杂质。为了有效控制成品的质量，对起始物料溴化苯基镁的质量研究至关重要。因此建立溴化苯基镁的多取代苯杂质的检测方法十分必要。
3.鉴于溴化苯基镁为格氏试剂，是活性非常高的亲核试剂，遇水分解，遇空气被氧化，在常规hplc分析检测条件下无法以原型存在，因此对溴化苯基镁中4-联苯基溴化镁、3-联苯基溴化镁进行hplc分析检测难度较大。同时4-联苯基溴化镁、3-联苯基溴化镁为位置异构体，极性非常小且极性极为相近，采用普通的液相色谱洗脱体系难以分离。因此对溴化苯基镁中极性相近的4-联苯基溴化镁、3-联苯基溴化镁进行有效分离检测成为产品质量控制中的技术难点。
4.有鉴于此，特提出本发明。


技术实现要素：

5.本发明的主要目的在于提供一种溴化苯基镁及其有关物质的分离检测方法及应用。
6.作为本发明的第一个方面，本发明提供了一种溴化苯基镁及其有关物质的分离检测方法，采用衍生化试剂对溴化苯基镁及其有关物质进行衍生化反应，采用高效液相色谱法进行分离检测，色谱条件包括：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以水为流动相a，乙腈为流动相b，进行梯度洗脱。
7.需要说明的是，本发明中进行衍生化反应的有关物质包括3-联苯基溴化镁和4-联苯基溴化镁。
8.本发明中溴化苯基镁经衍生化试剂衍生后得到溴化苯基镁衍生物，3-联苯基溴化镁经衍生化试剂衍生后得到3-联苯基溴化镁衍生物，4-联苯基溴化镁经苯甲醛衍生后得到4-联苯基溴化镁衍生物。
9.进一步的，以流动相体积为100％计，梯度设置如下：
[0010][0011]
；a1＝55-70，a2＝25-40，a3＝55-70；b1＝45-30，b2＝75-60，b3＝45-3。
[0012]
进一步的，所用检测器为紫外检测器，检测波长为210-230nm。
[0013]
进一步的，所用检测器为紫外检测器，检测波长为215-225nm。
[0014]
进一步的，所用流速为0.7-1.3ml/min。
[0015]
进一步的，所用流速为0.9-1.1ml/min。
[0016]
进一步的，所用柱温为28-32℃。
[0017]
进一步的，所用柱温为28-30℃。
[0018]
进一步的，采用衍生化试剂对溴化苯基镁及其有关物质进行衍生化反应，采用高效液相色谱法进行分离检测，色谱条件包括：以水为流动相a，乙腈为流动相b，进行梯度洗脱；所用检测器为紫外检测器，检测波长为215-225nm；所用柱温为28-30℃；所用流速为0.9-1.1ml/min，以流动相体积为100％计，梯度设置如下：
[0019][0020]
；a1＝58-65，a2＝28-35，a3＝58-65；b1＝42-35，b2＝72-65，b3＝42-35。进一步的，采用衍生化试剂对溴化苯基镁及其有关物质进行衍生化反应，采用高效液相色谱法进行分离检测，色谱条件包括：以水为流动相a，乙腈为流动相b，进行梯度洗脱；所用检测器为紫外检测器，检测波长为220nm；所用柱温为30℃；所用流速为1.0ml/min，以流动相体积为100％计，梯度设置如下：
[0021][0022]
；a1＝58，a2＝28，a3＝58；b1＝42，b2＝72，b3＝42。
[0023]
进一步的，所述衍生化试剂选自苯甲醛。
[0024]
需要说明的是，本发明中溴化苯基镁经苯甲醛衍生后得到二苯甲醇(溴化苯基镁衍生物)，3-联苯基溴化镁经苯甲醛衍生后得到3-苯基-二苯基甲醇(3-联苯基溴化镁衍生物)，4-联苯基溴化镁经苯甲醛衍生后得到4-苯基-二苯基甲醇(4-联苯基溴化镁衍生物)。
[0025]
进一步的，所述衍生化反应包括如下步骤：苯甲醛与溴化苯基镁样品反应，得到溴化苯基镁及其有关物质的衍生物。
[0026]
进一步的，所述衍生化反应包括如下步骤：将苯甲醛加入溶剂中，缓慢加入溴化苯基镁样品进行反应，得到溴化苯基镁及其有关物质的衍生物。
[0027]
进一步的，所述衍生化反应包括如下步骤：取苯甲醛加入2-甲基四氢呋喃中，缓慢加入溴化苯基镁的2-甲基四氢呋喃溶液进行反应，得到溴化苯基镁及其有关物质的衍生物。
[0028]
进一步的，所述衍生化反应中溴化苯基镁与苯甲醛的摩尔比为1：(1.5-2.5)。
[0029]
进一步的，所述衍生化反应的时间为25-35min。
[0030]
进一步的，所述衍生化反应中溴化苯基镁与苯甲醛的摩尔比为1：2.0。
[0031]
进一步的，所述衍生化反应的时间为28-32min。
[0032]
作为本发明的第二个方面，本发明还提供了上述分离检测方法在溴化苯基镁原料质量控制中的应用。
[0033]
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0034]
本发明提供的溴化苯基镁及其有关物质的分离检测方法，溴化苯基镁与衍生化试剂反应简便易操作，重现性好；通过对流动相、色谱柱等的优化设计，色谱柱易得，流动相体系简单，可准确、有效分离4-联苯基溴化镁衍生物和3-联苯基溴化镁衍生物，分离度良好。本方法专属性、检测限及定量限均良好，能够满足溴化苯基镁的有关物质检测要求，可应用于溴化苯基镁原料的质量控制。
附图说明
[0035]
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0036]
图1为空白溶液的hplc谱图；
[0037]
图2为联苯定位溶液的hplc谱图；
[0038]
图3为溴苯定位溶液的hplc谱图；
[0039]
图4为苯甲醇定位溶液的hplc谱图；
[0040]
图5为苯甲酸定位溶液的hplc谱图；
[0041]
图6为苯甲醛定位溶液的hplc谱图；
[0042]
图7为3-苯基-二苯基甲醇定位溶液的hplc谱图；
[0043]
图8为4-苯基-二苯基甲醇定位溶液的hplc谱图；
[0044]
图9为二苯甲醇定位溶液的hplc谱图。
[0045]
图10为供试品溶液的hplc谱图；
[0046]
图11为3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇的检测限的hplc谱图；
[0047]
图12为3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇的定量限的hplc谱图。
具体实施方式
[0048]
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0049]
3-苯基-二苯基甲醇对照品为自制对照品；
[0050]
4-苯基-二苯基甲醇对照品为自制对照品；
[0051]
二苯甲醇购自萨恩化学技术(上海)有限公司；
[0052]
苯甲醛购自萨恩化学技术(上海)有限公司；
[0053]
苯购自general-reagent；
[0054]
联苯购自damas-beta；
[0055]
溴苯购自萨恩化学技术(上海)有限公司；
[0056]
苯甲醇购自天津市大茂化学试剂厂；
[0057]
苯甲酸购自天津市大茂化学试剂厂；
[0058]
溴化苯基镁的2-甲基四氢呋喃溶液(溴化苯基镁)购自北京百灵威科技有限公司。
[0059]
实施例1专属性试验
[0060]
溶液配制：
[0061]
稀释剂：乙腈-水(40：60)。
[0062]
空白溶液：取苯甲醛1.0ml，置50ml比色管中，置于磁力搅拌器上，在不断搅拌的条件下，加入2-甲基四氢呋喃5.0ml，缓慢滴加2-甲基四氢呋喃1.6ml，继续搅拌30分钟，将50ml比色管置于冰水浴中，静置10分钟，继续搅拌，缓慢加入饱和氯化铵溶液10ml，待滴加结束后将50ml比色管取出，放冷，溶液分层，精密移取上层溶液0.5ml置50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀。
[0063]
联苯定位溶液：取联苯约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为联苯贮备液。精密量取联苯贮备液100μl，置10ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
[0064]
溴苯定位溶液：取溴苯20μl，置10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为溴苯贮备液。精密量取溴苯贮备液100μl，置10ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
[0065]
苯甲醇定位溶液：取苯甲醇约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为苯甲醇贮备液。精密量取苯甲醇贮备液100μl，置10ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
[0066]
苯甲醛定位溶液：取苯甲醛20μl，置10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为苯甲醛贮备液。精密量取苯甲醛贮备液100μl，置10ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
[0067]
苯甲酸定位溶液：取苯甲酸20μl，置10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为苯甲酸贮备液。精密量取苯甲酸贮备液100μl，置10ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
[0068]
3-苯基-二苯基甲醇定位溶液：取3-苯基-二苯基甲醇对照品约2.5mg，精密称定，置5ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取溶液0.1ml，置10ml量瓶中，用稀
释剂稀释至刻度，摇匀，作为3-苯基-二苯基甲醇贮备液。精密量取溶液0.2ml，加稀释剂1ml，摇匀。
[0069]
4-苯基-二苯基甲醇定位溶液：取4-苯基-二苯基甲醇对照品约2.5mg，精密称定，置5ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取溶液0.1ml，置10ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为4-苯基-二苯基甲醇贮备液。精密量取溶液0.2ml，加稀释剂1ml，摇匀。
[0070]
二苯甲醇定位溶液：取二苯甲醇对照品约22mg，精密称定，置20ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为二苯甲醇的贮备液。精密量取二苯甲醇贮备液1ml，置10ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
[0071]
供试品溶液：取苯甲醛1.0ml，置50ml比色管中，置于磁力搅拌器上，在不断搅拌的条件下，加入2-甲基四氢呋喃5.0ml，缓慢滴加溴化苯基镁的2-甲基四氢呋喃溶液1.6ml，继续搅拌30分钟反应完全，将50ml比色管置于冰水浴中，静置10分钟，继续搅拌，缓慢加入饱和氯化铵溶液10ml，待滴加结束后将50ml比色管取出，放冷，溶液分层，精密移取上层溶液0.5ml置50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀。
[0072]
实施例1-1
[0073]
色谱条件：
[0074]
色谱柱：agela venusil xbp c18(l)4.6mm
×
25cm，5μm；
[0075]
检测波长：紫外检测器，检测波长为220nm；
[0076]
流速：0.9ml/min；
[0077]
柱温：30℃；
[0078]
流动相：以水为流动相a，乙腈为流动相b，以流动相体积为100％计，梯度设置如下：
[0079][0080]
精密量取上述溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，按本实施例色谱条件测定，记录色谱图，见图1-12。
[0081]
由图1可知，空白溶剂中苯甲酸、空白溶剂杂质1、空白溶剂杂质2、空白溶剂杂质3的保留时间依次为4.052min、6.096min、7.858min、23.375min。
[0082]
由图2可知，联苯的保留时间为41.461min。
[0083]
由图3可知，溴苯的保留时间为30.732min。
[0084]
由图4可知，苯甲醇的保留时间为4.949min。
[0085]
由图5可知，苯甲酸的保留时间为4.024min。
[0086]
由图6可知，苯甲醛的保留时间为5.771min，另外4.075min处峰为苯甲酸。
[0087]
由图7可知，3-苯基-二苯基甲醇的保留时间为38.893min，另外44.380处峰为3-苯
基-二苯基甲醇引入杂质。
[0088]
由图8可知，4-苯基-二苯基甲醇的保留时间为39.255min。
[0089]
由图9可知，二苯甲醇的保留时间为14.796min。
[0090]
供试品溶液检测结果如表1所示。
[0091]
表1供试品溶液检测结果
[0092][0093]
由图10和表1可知，稀释剂、空白溶液、苯甲醛、苯甲醇、溴苯、联苯对供试品中3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇的测定无干扰，3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇之间的分离度大于1.2，满足检测要求，表明专属性良好。
[0094]
实施例1-2
[0095]
色谱条件：
[0096]
色谱柱：waters xbridge c184.6mm
×
25cm，5μm；
[0097]
检测波长：紫外检测器，检测波长为215nm；
[0098]
流速：1.1ml/min；
[0099]
柱温：28℃；
[0100]
流动相：以水为流动相a，乙腈为流动相b，以流动相体积为100％计，梯度设置如下：
[0101][0102]
供试品溶液检测数据如表2所示。
[0103]
表2供试品溶液检测结果
[0104][0105][0106]
由表2可知，稀释剂、空白溶液、苯甲醛、苯甲醇、溴苯、联苯对供试品中3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇的测定无干扰，3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇之间的分离度大于1.2，满足检测要求，表明专属性良好。
[0107]
实施例1-3
[0108]
色谱条件：
[0109]
色谱柱：agela venusil mp c18(l)4.6mm
×
25cm，5μm；
[0110]
检测波长：紫外检测器，检测波长为225nm；
[0111]
流速：1.1ml/min；
[0112]
柱温：30℃；
[0113]
流动相：以水为流动相a，乙腈为流动相b，以流动相体积为100％计，梯度设置如下：
[0114][0115]
供试品溶液检测数据如表3所示。
[0116]
表3供试品溶液检测结果
[0117][0118][0119]
由表3可知，稀释剂、空白溶液、苯甲醛、苯甲醇、溴苯、联苯对供试品中3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇的测定无干扰，3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇之间的分离度大于1.2，满足检测要求，表明专属性良好。
[0120]
实施例1-4
[0121]
色谱条件：
[0122]
色谱柱：agilent zorbax c184.6mm
×
25cm，5μm；
[0123]
检测波长：紫外检测器，检测波长为210nm；
[0124]
流速：0.9ml/min；
[0125]
柱温：32℃；
[0126]
流动相：以水为流动相a，乙腈为流动相b，以流动相体积为100％计，梯度设置如下：
[0127][0128]
供试品溶液检测数据如表4所示。
[0129]
表4供试品溶液检测结果
[0130][0131]
由表4可知，稀释剂、空白溶液、苯甲醛、苯甲醇、溴苯、联苯对供试品中3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇的测定无干扰，3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇之间的分离度大于1.2，满足检测要求，表明专属性良好。
[0132]
实施例1-5
[0133]
色谱柱：agela venusil xbp c184.6mm
×
25cm，5μm；
[0134]
检测波长：紫外检测器，检测波长为230nm；
[0135]
流速：0.9ml/min；
[0136]
柱温：28℃；
[0137]
流动相：以水为流动相a，乙腈为流动相b，以流动相体积为100％计，梯度设置如下：
[0138][0139]
供试品溶液检测数据如表5所示。
[0140]
表5供试品溶液检测结果
[0141][0142]
由表5可知，稀释剂、空白溶液、苯甲醛、苯甲醇、溴苯、联苯对供试品中3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇的测定无干扰，3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇之间的分离度大于1.2，满足检测要求，表明专属性良好。
[0143]
实施例2灵敏度试验
[0144]
取3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇对照品适量，精密称定，加稀释剂(水-乙腈(60:40))溶解并稀释制成每1ml约含3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇对照品各1μg的贮备液。精密量取贮备液适量，逐级稀释，分别获得相当于供试品溶液浓度水平0.004％和0.01％的溶液，进行灵敏度考察。
[0145]
色谱条件：
[0146]
色谱柱：agela venusil xbp c18(l)4.6mm
×
25cm，5μm；
[0147]
检测波长：紫外检测器，检测波长为220nm；
[0148]
流速：1.0ml/min；
[0149]
柱温：30℃；
[0150]
流动相：以水为流动相a，乙腈为流动相b，以流动相体积为100％计，梯度设置如下：
[0151][0152]
精密量取上述溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图11-12。
[0153]
表6检测限(lod)、定量限(loq)结果
[0154][0155][0156]
由图11-12和表6可知，当3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇的浓度相当于供试品溶液浓度的0.01％时，信噪比大于10，符合定量限要求。当3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇的浓度相当于供试品溶液浓度的0.004％时，信噪比大于3，符合检测限要求。
[0157]
实施例3回收率试验
[0158]
溶液配制：
[0159]
供试品溶液：取苯甲醛1.0ml，置50ml比色管中，置于磁力搅拌器上，在不断搅拌的
条件下，加入2-甲基四氢呋喃5.0ml，缓慢滴加溴化苯基镁的2-甲基四氢呋喃溶液1.6ml，继续搅拌30分钟反应完全，将50ml比色管置于冰水浴中，静置10分钟，继续搅拌，缓慢加入饱和氯化铵溶液10ml，待滴加结束后将50ml比色管取出，放冷，溶液分层，精密移取上层溶液0.5ml置50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀。
[0160]
供试品加标溶液：精密移取供试品溶液的上层溶液0.1ml置10ml量瓶中，加入3-苯基-二苯基甲醇贮备液和4-苯基-二苯基甲醇贮备液各2ml，加稀释剂稀释至刻度，摇匀。
[0161]
混合对照溶液：取3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇对照品约2.5mg，精密称定，置5ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取0.1ml，置10ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为3-苯基-二苯基甲醇贮备液和4-苯基-二苯基甲醇贮备液。精密量取2ml，加稀释剂10ml，摇匀。
[0162]
精密量取上述溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，测定回收率，如表7所示。
[0163]
表7回收率试验结果
[0164][0165]
由表6可见，回收率在90.0％～108％之间，表明有很好的测定准确度。
[0166]
对照实施例1
[0167]
溶液配制：同实施例1。
[0168]
色谱条件：
[0169]
色谱柱：sepax hp-c18(4.6mm
×
250mm，5μm)柱；
[0170]
流动相：乙腈、水和三乙胺(50:50:0.5，v/v/v，用磷酸调节ph＝6.5)；
[0171]
检测波长：紫外检测器，检测波长为258nm；
[0172]
流速：1.0ml/min；
[0173]
柱温：30℃。
[0174]
精密量取上述溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，按本对照实施例色谱条件测定。
[0175]
结果显示，3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇重合，无法完全分离。
[0176]
对照实施例2
[0177]
溶液配制：同实施例1。
[0178]
色谱条件：
[0179]
色谱柱：agilent cn column(4.6mm
×
250mm,5μm)；
[0180]
流动相：乙腈、20mmol/l醋酸铵(50:50，v/v，用甲酸调节ph＝6.5)；
[0181]
检测波长：紫外检测器，检测波长为255nm；
[0182]
流速：1.0ml/min；
[0183]
柱温：30℃。
[0184]
精密量取上述溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，按本对照实施例色谱条件测定。
[0185]
结果显示，3-苯基-二苯基甲醇和4-苯基-二苯基甲醇重合，无法完全分离。
[0186]
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。