血清中VEGFB的水平作为情绪紊乱相关疾病的标志物及其应用的制作方法

血清中vegfb的水平作为情绪紊乱相关疾病的标志物及其应用
技术领域
1.本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及检测血清中vegfb的水平作为焦虑抑郁的潜在标志物及其应用。


背景技术：

2.抑郁症是一种常见的精神疾病，以显著而持久的心境低落与兴趣减少为主要临床特征。抑郁症是中国乃至世界发病率较高的一种精神类疾病，它是导致全球疾病负担的一个重大因素。与一般人群相比，重度抑郁症(major depressivedisorder；mdd)患者的自杀风险显著增加。与其他精神疾病一样，抑郁症的病因复杂，缺乏特异的症诊断工具。而临床使用精神分析量表的方法诊断会受到患者主观意识的影响，且依赖医生的主管判断，容易导致诊断出现偏差。
3.另外，由于精神疾病的特殊性，无法通过脑组织活检进行病理性诊断。因此，临床上需要一种客观且可行的诊断方法，以加强抑郁症的防治，提高患者的生存质量。而外周血取样无创、安全、简便，有望作为脑组织活检的替代物用于抑郁症等中枢神经系统疾病的诊断。外周血基因标志物在抑郁症领域被广泛研究，但是将其用作抑郁症的诊断还面临着问题——不同研究得到的标志物不尽相同，且诊断模型不具备普适性，临床诊断存在差异。


技术实现要素：

4.vegf-b是血管内皮生长因子中的一种，被发现在氧化应激相关疾病方面具有治疗作用。尽管如此，然而对抗氧化剂vegf-b的认识仍然是有限的。
5.在本研究中，发明人通过蛋白芯片筛选长期压力下执行某任务的青年男性血清中的潜在抑郁标志物，发现与执行任务前相比，执行任务后血清中vegfb 水平下降。为了进一步证明vegfb与抑郁的关系，发明人建立了经典的诱导小鼠焦虑抑郁模型，通过elisa检测分析模型中小鼠血清vegfb水平的变化，结果发现vegfb水平在对照小鼠中没有明显变化，但是在焦虑抑郁小鼠中显著下降，提示血清vegfb水平可能是抑郁的外周标志物。进而，发明人又通过不同地区抑郁症患者，以及焦虑抑郁症候群与精神分裂症、阿尔茨海默病和血管性痴呆症患者的临床诊断结果发现，同健康对照相比，焦虑抑郁症候群患者血清中vegfp水平显著下降，进一步证明了vegfb可以作为诊断抑郁症和/或评估罹患抑郁症风险的标志物，从而完成了本发明。
6.一方面，本发明提供vegfb作为标志物用于制备诊断情绪紊乱相关症状疾病和/或评估罹患情绪紊乱相关症状疾病风险的产品或药物中的应用。
7.vegfb可以作为检测对象，优选血清vegfb，血液样品或血清样品中表达下调或者水平降低，产品包括芯片或试剂盒。
8.本发明中所述情绪紊乱相关症状疾病优选为抑郁症或精神分裂症。
9.在本发明中vegfb在筛选治疗情绪紊乱相关症状疾病和/或缓解情绪紊乱相关症
状的药物中的应用。
10.vegfb可以作为检测对象，优选血清vegfb。在情绪紊乱相关症状疾病或者具有罹患情绪紊乱相关症状疾病高风险的个体的血液样品或血清样品中表达下调或者水平降低。
11.根据本发明，与相同个体未被诊断为抑郁症时的vegfb水平或者健康个体群组的平均vegfb水平相比，待测个体的vegfb的表达下调或者水平降低至少 30％或更多，例如至少40％、至少50％或至少60％，则可以预示待测个体患有抑郁症或者具有罹患抑郁症的高风险。
12.根据本发明，所述产品包括芯片或试剂盒。所述试剂盒包括但不限于，elisa 检测试剂盒、胶体金检测试剂盒、免疫共沉淀试剂盒、化学发光试剂盒、免疫荧光试剂盒等。可根据本领域的常规方法制备这些试剂盒。例如，elisa检测试剂盒包括：包被特异性与血清vegfb结合的抗体的固相载体，酶标抗体，酶的底物，vegfb标准品，阴性对照品，稀释液，洗涤液，酶反应终止液等。其中，所述特异性与血清vegfb结合的抗体可以为vegfb单克隆抗体。
13.另一方面，本发明提供vegfb在筛选治疗抑郁症和/或缓解抑郁症症状的药物中的应用。
14.根据本发明，所述抑郁症包括轻度、中度和重度抑郁症，产后抑郁症、青春期抑郁症、成年抑郁症、老年抑郁症等。所述抑郁症状包括被诊断为抑郁症的患者的心境低落、兴趣减退、无用感、自责自罪、思维迟缓、行为缓慢、认知功能损伤、近事记忆力下降、注意力障碍、睡眠障碍、食欲减退、性欲减退等症状。
15.根据本发明，所述药物可以为任何临床上合适的剂型，包括但不限于，片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、注射剂、口服液等。
16.有益效果
17.发明人发现了抑郁症的一种新的潜在标志物，即血清vegfb；在经典的抑郁小鼠模型中，血清vegfb水平显著降低。针对这一潜在标志物，发明人通过不同地区，不同焦虑抑郁症候群患者的临床实验进行了验证，不仅验证了vegfb 可以作为抑郁症的标记物，并且验证了其主要与情绪紊乱相关的疾病相关，对精神分裂症也有临床鉴别和诊断意义。
附图说明
18.图1示出了蛋白芯片结果。
19.图2示出了模型小鼠血清vegfb水平的elisa结果。
20.图3示出了北京和四川抑郁症患者的临床检测结果血清vegfb水平的 elisa结果。
21.图4示出了焦虑抑郁症候群与精神分裂症、阿尔茨海默病和血管性痴呆症患者的临床诊断结果。
具体实施方式
22.下文将结合具体实施例对本发明做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。
23.除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已
知方法制备。
[0024][0025]
实施例1
[0026]
一、材料和方法 (一)高通量细胞因子芯片筛选
[0027]
针对执行某长期任务中面对较大精神心里压力的青年男性，分别于执行任务前、后取外周静脉血，其中执行任务前样品8例，任务后样品12例。利用的是raybiotech公司aah-blg-1芯片，从507个因子中筛选目标蛋白。读出结果为荧光强度，经过标准化后，数值越高表明蛋白浓度越高。
[0028]
(二)统计学分析
[0029]
应用graphpad prism 6.01和spss19.0软件对所有数据进行统计学分析。计量资料结果以均数
±
标准差(mean
±
sd)表示，组间均值用t检验统计分析，p《0.05 认为差异有统计学意义
[0030]
二、结果
[0031]
1.蛋白芯片筛选结果(图1)说明，长期压力下执行任务的青年男性血清中vegfb水平下降。p＝0.027342，具有统计学意义。
[0032]
实施例2
[0033]
一、材料和方法
[0034]
将50ml尖底离心管的管壁及管盖上凿出通气小孔制成束缚装置，孔壁尽量圆滑，避免对小鼠带来不必要的伤害。将束缚组小鼠放入离心管中，尾巴从管盖中央通气孔穿出，拧紧管盖以限制小鼠活动，使离心管呈45
°
倾斜，并保证小鼠头部向上。束缚应激在每天的固定时间段8：00～14：00进行，结束后洗净离心管，并确保离心管清洁、无二便及气味残留，自然风干后回收备用。束缚应激共持续8天。然后眼眶静脉丛采血。
[0035]
利用武汉菲恩公司的小鼠vegfb elisa试剂盒(货号：em0216)，按照说明书进行检测。
[0036]
应用graphpad prism 6.01和spss19.0软件对所有数据进行统计学分析。计量资料结果以均数
±
标准差(mean
±
sd)表示，组间均值用t检验统计分析，p《0.05 认为差异有统计学意义。
[0037]
二、结果
[0038]
每天束缚小鼠6小时连续8天是经典的诱导小鼠焦虑的模型，经过elisa 检测，发现束缚后小鼠血清vegfb水平明显降低(p＝0.000104)(图2)，提示血清vegfb水平可能是抑郁的外周标志物。
[0039]
实施例3
[0040]
一、材料和方法
[0041]
取2019年6月到2019年8月期间在解放军总医院第一医学中心就诊的抑郁焦虑症候群患者，共23例，对照来源于同时期解放军总医院第一医学中心体检但各项指标均正常的健康志愿者，共收集20例。取2020年10月23日四川省成都市第四人民医院住院的抑郁焦虑症候群患者19例。取获取所有对象的肘正中静脉血5ml，室温静置30min，1000
×
g离心15min，分装冻存于-70度冰箱。
[0042]
人血清vegfb水平检测，由于缺乏敏感的elisa试剂盒，人血清验证利用的是定制
型raybiotech公司aah-blg-1芯片，专门分析人血清中vegfb的水平。
[0043]
应用graphpad prism 6.01和spss19.0软件对所有数据进行统计学分析。计量资料结果以均数
±
标准差(mean
±
sd)表示，组间均值用t检验统计分析，p《0.05 认为差异有统计学意义。
[0044]
二、结果
[0045]
经检测，无论是北京的焦虑抑郁症候群患者，还是四川的患者，均呈现血清vegfb水平下降，北京患者与健康对照的差异显著(p＝0.001019)，四川患者与健康对照的差异也显著(p＝0.012789)。北京患者与四川患者之间无统计学差异(p＝0.997859)。具体结果可参见图3所示。
[0046]
实施例4
[0047]
一、材料和方法
[0048]
取2019年6月到2019年8月期间在解放军总医院第一医学中心就诊的抑郁焦虑症候群患者，共23例，对照来源于同时期解放军总医院第一医学中心体检但各项指标均正常的健康志愿者，共收集20例。取2020年10月23日四川省成都市第四人民医院住院的抑郁焦虑症候群患者19例,精神分裂症患者20例，阿尔茨海默病患者13例，血管性痴呆患者6例。取获取所有对象的肘正中静脉血5ml，室温静置30min，1000
×
g离心15min，分装冻存于-70度冰箱。
[0049]
人血清vegfb水平检测，由于缺乏敏感的elisa试剂盒，人血清验证利用的是定制型raybiotech公司aah-blg-1芯片，专门分析人血清中vegfb的水平。
[0050]
应用graphpad prism 6.01和spss19.0软件对所有数据进行统计学分析。计量资料结果以均数
±
标准差(mean
±
sd)表示，组间均值用t检验统计分析，p《0.05 认为差异有统计学意义。
[0051]
二、结果
[0052]
把北京患者和四川患者合并成一组，同健康对照相比，焦虑抑郁症候群患者血清中vegfp水平显著下降(p＝000356)。精神分裂症患者血清vegfb水平与健康对照相比也显著下降(p＝000338)，同焦虑抑郁症候群患者无显著差异(p＝482373)。阿尔茨海默病和血管性痴呆患者血清vegfb水平接近 (p＝0.933026)，因为两组患者人数均较少，将两组合并为痴呆组，痴呆患者与健康对照无统计学差异(p＝0.209745)，同焦虑抑郁症候群患者差异显著 (p＝0.012426)。所以vegfb有一定鉴别诊断的意义，提示其主要与情绪紊乱相关。具体结果可参见图4所示。
[0053]
以上对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。