一种(6-氨基吡啶-2-基)(1-甲基哌啶-4-基)甲酮双盐酸盐的检测方法与流程

一种(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐的检测方法
技术领域
1.本发明属于有机物检测分析技术领域，特别涉及一种(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐的检测方法。


背景技术：

2.(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐，cas号：613678
‑
10
‑
7，该化合物是生产药物拉司米地坦的重要中间体，其纯度、杂质直接影响该药物的纯度、杂质的大小，从而直接影响该药物疗效。
3.目前，还未发现(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐的纯度检测方法的相关文献及报道，为了加强(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐的质量控制，进一步控制拉司米地坦的质量，提供一种(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐的纯度及杂质含量的检测方法尤为重要。


技术实现要素：

4.本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐的检测方法，该检测方法具有简便、准确、重复性好、快速、可靠等优点。
5.本发明一方面在于提供一种(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐的检测方法，包括如下步骤：
6.采用液相色谱法对(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐进行检测；
7.所述液相色谱法的条件包括：采用的流动相包括流动相a和流动相b；所述流动相a为磷酸盐缓冲液；所述流动相b为乙腈；
8.所述流动相按如下梯度洗脱：
9.0分钟，流动相a为65
‑
75％，流动相b为25
‑
35％；
10.5分钟，流动相a为65
‑
75％，流动相b为25
‑
35％；
11.25分钟，流动相a为15
‑
25％，流动相b为75
‑
85％；
12.30分钟，流动相a为15
‑
25％，流动相b为75
‑
85％；
13.35分钟，流动相a为65
‑
75％，流动相b为25
‑
35％；
14.40分钟，流动相a为65
‑
75％，流动相b为25
‑
35％。
15.优选地，所述检测方法包括如下步骤：
16.将(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐溶于稀释液，得到对照品溶液；
17.将含(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐的供试品溶于稀释液，得到供试品溶液；
18.取所述对照品溶液，以液相色谱进行检测，记录色谱图a；
19.取所述供试品溶液，以液相色谱进行检测，记录色谱图b；
20.根据所述色谱图a和所述色谱图b计算(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐的纯度；
21.所述液相色谱法的条件包括：采用的流动相包括流动相a和流动相b；所述流动相a为磷酸盐缓冲液；所述流动相b为乙腈；
22.所述流动相按如下梯度洗脱：
23.0分钟，流动相a为65
‑
75％，流动相b为25
‑
35％，优选为流动相a为70％，流动相b为20％；
24.5分钟，流动相a为65
‑
75％，流动相b为25
‑
35％，优选为流动相a为70％，流动相b为20％；
25.25分钟，流动相a为15
‑
25％，流动相b为75
‑
85％，优选为流动相a为20％，流动相b为70％；
26.30分钟，流动相a为15
‑
25％，流动相b为75
‑
85％，优选为流动相a为20％，流动相b为70％；
27.35分钟，流动相a为65
‑
75％，流动相b为25
‑
35％，优选为流动相a为70％，流动相b为20％；
28.40分钟，流动相a为65
‑
75％，流动相b为25
‑
35％，优选为流动相a为70％，流动相b为20％。
29.优选地，所述稀释液为水和乙腈的混合物，所述稀释液中的水和乙腈的体积比为(1
‑
2):(1
‑
2)，更优选为体积比为1:1；所述对照品溶液中，所述(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐的浓度为0.25
‑
1mg/ml，更优选为0.5mg/ml；所述供试品溶液中，所述供试品的浓度为0.25
‑
1mg/ml，更优选为0.5mg/ml。
30.优选地，所述检测方法还包括的步骤为系统适用性试验，所述系统适用性试验为：取(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐、(6
‑
溴
‑2‑
吡啶基)(1
‑
甲基
‑4‑
哌啶基)甲酮和(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)(吡咯烷
‑1‑
基)甲酮，用稀释液溶解，得到系统适用性溶液；对所述系统适用性溶液采用液相色谱进行检测，记录色谱图c。系统适用性试验的目的主要是为了确定分析使用的色谱系统是有效的、适用的。
31.优选地，所述系统适用性溶液中，所述(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐的浓度为0.25
‑
1mg/ml，，更优选为0.5mg/ml；所述(6
‑
溴
‑2‑
吡啶基)(1
‑
甲基
‑4‑
哌啶基)甲酮的浓度为0.15
‑
0.5mg/ml，，更优选为0.25mg/ml；所述(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)(吡咯烷
‑1‑
基)甲酮的浓度为0.15
‑
0.5mg/ml，更优选为0.25mg/ml。
32.优选地，所述检测的结果：理论板数按(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐计算应不低于2000，主峰与相邻杂质的分离度应大于1.5。
33.优选地，所述检测方法还包括的步骤为空白试验，所述空白试验为：将所述稀释液以液相色谱进行检测，记录色谱图d，色谱图b扣除掉色谱图d中的色谱峰后，按面积归一化法计算。空白试验目的在于消除稀释液所带来的影响，可进一步提高检测的精确度。
34.优选地，所述磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钾缓冲液；所述磷酸二氢钾缓冲液的浓度为0.01
‑
0.03mol/l，更优选为0.01mol/l；所述磷酸二氢钾缓冲液的ph为5.0
‑
8.0，更优选为
7.0。所述磷酸盐缓冲液的ph的选择有助于改善峰型，特别是当ph为7.0，峰型最佳。
35.优选地，所述液相色谱法的条件还包括：
36.色谱柱：wondasil c18 superb(5um,4.6*250mm)(w)及其等同性能的c18色谱柱；
37.进样量：5
‑
30μl，更优选为10μl；
38.流动相流速：0.5
‑
0.7ml/min，更优选为0.6ml/min；
39.柱温：20
‑
30℃，更优选为26℃；
40.检测波长：210
‑
220nm，更优选为215nm；
41.检测器：紫外检测器。
42.本发明另一方面在于提供上述检测方法在制备拉司米地坦中的应用。
43.具体提供上述(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐的检测方法在制备拉司米地坦中的应用。
44.相对于现有技术，本发明的有益效果如下：
45.1.本发明采用磷酸盐缓冲液作为流动相a以及乙腈作为流动相b，并按照一定比例的梯度洗脱，能使(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐及其已知杂质、未知杂质均能实现有效分离，改善分离效果，提高检测准确度、检测速度和灵敏度。
46.2.本发明检测方法具有简便、准确、重复性好、快速、可靠等优点，有利于加强(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐的质量控制，进一步控制拉司米地坦的质量。
附图说明
47.图1是本发明实施例1系统适用性溶液的液相色谱图；
48.图2是本发明实施例1对照品溶液的第一次液相色谱图；
49.图3是本发明实施例1对照品溶液的第二次液相色谱图；
50.图4是本发明实施例1供试品溶液的液相色谱图；
51.图5是本发明实施例2供试品溶液的液相色谱图；
52.图6是本发明实施例3供试品溶液的液相色谱图；
53.图7是本发明实施例4供试品溶液的液相色谱图；
54.图8是本发明实施例5系统适用性溶液的液相色谱图；
55.图9是本发明实施例6系统适用性溶液的液相色谱图；
56.图10是本发明对比例1系统适用性溶液的液相色谱图；
57.图11是本发明对比例2系统适用性溶液的液相色谱图；
58.图12是本发明对比例3系统适用性溶液的液相色谱图。
具体实施方式
59.为了让本领域技术人员更加清楚明白本发明所述技术方案，现列举以下实施例进行说明。需要指出的是，以下实施例对本发明要求的保护范围不构成限制作用。
60.以下实施例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者可以通过现有已知方法得到。
61.取四批同一生产规格指令生产的(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双
盐酸盐产品作为供试品1
‑
4，分别按照实施例1
‑
4的检测方法进行检测，采用面积归一化法进行纯度及其杂质计算。(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐产品中的已知杂质有：(6
‑
溴
‑2‑
吡啶基)(1
‑
甲基
‑4‑
哌啶基)甲酮和(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)(吡咯烷
‑1‑
基)甲酮。
62.实施例1
63.一种(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐的检测方法，包括如下步骤：
64.1)对照品溶液配制：取适量的(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐对照品，用体积百分浓度为50％的乙腈水溶液溶解，得到浓度为0.5mg/ml的对照品溶液；
65.2)供试品溶液配制：取适量的(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐供试品，用体积百分浓度为50％的乙腈水溶液溶解，得到浓度为0.5mg/ml的对照品溶液；
66.3)系统适用性溶液配制：取适量的(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐对照品、(6
‑
溴
‑2‑
吡啶基)(1
‑
甲基
‑4‑
哌啶基)甲酮和(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)(吡咯烷
‑1‑
基)甲酮置于同一容量瓶中，用体积百分浓度为50％的乙腈水溶液溶解，配置成每毫升含0.5mg的(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐对照品、0.25mg/ml的(6
‑
溴
‑2‑
吡啶基)(1
‑
甲基
‑4‑
哌啶基)甲酮和0.25mg/ml的(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)(吡咯烷
‑1‑
基)甲酮的溶液，得到系统适用性溶液；
67.4)空白试验:精密量取体积百分浓度为50％的乙腈水溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；空白不得有干扰；
68.5)系统适用性试验：精密量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，其中，理论板数按(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐计算应不低于2000，主峰与相邻杂质的分离度应大于1.5；
69.6)供试品溶液试验：精密量取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，从供试品溶液的色谱图中扣除空白试验的色谱峰，按面积归一化法计算供试品的浓度。
70.本实施例的液相色谱仪的测试条件设定为：色谱柱为规格为4.6
×
250mm，5μm的岛津wondasil c18 superb色谱柱，柱温为26℃；采用双流动相进行梯度洗脱，流动相a为浓度为0.01mol/l的磷酸二氢钾缓冲液(用氢氧化钠溶液调ph至7.0)，流动相b为乙腈，流动相流速为0.6ml/min；检测器为紫外检测器，检测波长为215nm；梯度洗脱的条件如表1所示，流动相a和流动相b的体积比为匀速渐变。
71.表1梯度洗脱条件
72.时间(％)流动相a(％)流动相b(％)0703057030252080302080357030407030
73.本实施例系统适用性溶液的色谱图如图1所示，图1中的“1”表示(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)(吡咯烷
‑1‑
基)甲酮对应的峰，“2”表示(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双
盐酸盐对应的峰，“3”表示(6
‑
溴
‑2‑
吡啶基)(1
‑
甲基
‑4‑
哌啶基)甲酮对应的峰，“4、5、6、7”表示其他杂质对应的峰(图1中的纵坐标“absorbance”表示吸光度，单位为mau)。通过图1可以看出3个主峰之间分离度大于1.5，塔板数高。其积分结果以及检测结果如表2、表3所示。
74.表2色谱图的积分结果
[0075][0076]
表3系统适用性溶液的检测结果
[0077][0078][0079]
本实施例将对照品溶液分别进行两次检测，对照品溶液的两次色谱图分别如图2、
图3所示，图2、图3中的“2”表示(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐对应的峰，“1、3、4”表示其他杂质对应的峰(图2、图3中的纵坐标“absorbance”表示吸光度，单位为mau)。其两次的积分结果以及检测结果如表4、表5、表6和表7所示。
[0080]
表4第一次色谱图的积分结果
[0081][0082]
表5对照品溶液的第一次检测结果
[0083][0084]
表6第二次色谱图的积分结果
[0085][0086]
表7对照品溶液的第二次检测结果
[0087][0088]
分析两次测定的峰面积，计算其相对标准偏差(rsd)为：0.02％，重复性好。分析两次测定的纯度(相对峰面积)，计算其相对标准偏差(rsd)为：0.01％，重复性好。
[0089]
本实施例供试品溶液的色谱图如图4所示，图4中的“2”表示(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)(吡咯烷
‑1‑
基)甲酮对应的峰，“3”表示(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐对应的峰，“4”表示最大单杂对应的峰，“1、5、6”表示其他杂质对应的峰(图4中的纵坐标“absorbance”表示吸光度，单位为mau)。其积分结果以及检测结果如表8、表9所示。
[0090]
表8色谱图的积分结果
[0091][0092]
表9供试品溶液的检测结果
[0093][0094][0095]
实施例2
[0096]
一种(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐的检测方法，包括如下步骤：
[0097]
1)对照品溶液配制：取适量的(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐对照品，用体积百分浓度为50％的乙腈水溶液溶解，得到浓度为0.5mg/ml的对照品溶液；
[0098]
2)供试品溶液配制：取适量的(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐供试品，用体积百分浓度为50％的乙腈水溶液溶解，得到浓度为0.5mg/ml的对照品溶液；
[0099]
3)系统适用性溶液配制：取适量的(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐对照品、(6
‑
溴
‑2‑
吡啶基)(1
‑
甲基
‑4‑
哌啶基)甲酮和(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)(吡咯烷
‑1‑
基)甲酮置于同一容量瓶中，用体积百分浓度为50％的乙腈水溶液溶解，配置成每毫升含0.5mg的(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐对照品、0.25mg/ml的(6
‑
溴
‑2‑
吡啶基)(1
‑
甲基
‑4‑
哌啶基)甲酮和0.25mg/ml的(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)(吡咯烷
‑1‑
基)甲酮的溶液，得到系统适用性溶液；
[0100]
4)空白试验:精密量取体积百分浓度为50％的乙腈水溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；空白不得有干扰；
[0101]
5)系统适用性试验：精密量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱
图，其中，理论板数按(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐计算应不低于2000，主峰与相邻杂质的分离度应大于1.5；
[0102]
6)供试品溶液试验：精密量取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，从供试品溶液的色谱图中扣除空白试验的色谱峰，按面积归一化法计算供试品的浓度。
[0103]
本实施例的液相色谱仪的测试条件设定为：色谱柱为规格为4.6
×
250mm，5μm的岛津wondasil c18 superb色谱柱，柱温为26℃；采用双流动相进行梯度洗脱，流动相a为浓度为0.01mol/l的磷酸二氢钾缓冲液(用氢氧化钠溶液调ph至7.0)，流动相b为乙腈，流动相流速为0.6ml/min；检测器为紫外检测器，检测波长为215nm；梯度洗脱的条件如表10所示。
[0104]
表10梯度洗脱条件
[0105]
时间(％)流动相a(％)流动相b(％)0703057030252080302080357030407030
[0106]
本实施例供试品溶液的色谱图及积分结果如图5所示，图5中的“2”表示(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)(吡咯烷
‑1‑
基)甲酮对应的峰，“3”表示(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐对应的峰，“4”表示最大单杂对应的峰，“1、5”表示其他杂质对应的峰(图5中的纵坐标“absorbance”表示吸光度，单位为mau)。其积分结果以及检测结果如表11、表12所示。
[0107]
表11色谱图的积分结果
[0108][0109]
表12供试品溶液的检测结果
[0110]
[0111][0112]
实施例3
[0113]
一种(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐的检测方法，包括如下步骤：
[0114]
1)对照品溶液配制：取适量的(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐对照品，用体积百分浓度为50％的乙腈水溶液溶解，得到浓度为0.5mg/ml的对照品溶液；
[0115]
2)供试品溶液配制：取适量的(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐供试品，用体积百分浓度为50％的乙腈水溶液溶解，得到浓度为0.5mg/ml的对照品溶液；
[0116]
3)系统适用性溶液配制：取适量的(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐对照品、(6
‑
溴
‑2‑
吡啶基)(1
‑
甲基
‑4‑
哌啶基)甲酮和(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)(吡咯烷
‑1‑
基)甲酮置于同一容量瓶中，用体积百分浓度为50％的乙腈水溶液溶解，配置成每毫升含0.5mg的(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐对照品、0.25mg/ml的(6
‑
溴
‑2‑
吡啶基)(1
‑
甲基
‑4‑
哌啶基)甲酮和0.25mg/ml的(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)(吡咯烷
‑1‑
基)甲酮的溶液，得到系统适用性溶液；
[0117]
4)空白试验:精密量取体积百分浓度为50％的乙腈水溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；空白不得有干扰；
[0118]
5)系统适用性试验：精密量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，其中，理论板数按(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐计算应不低于2000，主峰与相邻杂质的分离度应大于1.5；
[0119]
6)供试品溶液试验：精密量取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，从供试品溶液的色谱图中扣除空白试验的色谱峰，按面积归一化法计算供试品的浓度。
[0120]
本实施例的液相色谱仪的测试条件设定为：色谱柱为规格为4.6
×
250mm，5μm的岛津wondasil c18 superb色谱柱，柱温为26℃；采用双流动相进行梯度洗脱，流动相a为浓度为0.01mol/l的磷酸二氢钾缓冲液(用氢氧化钠溶液调ph至7.0)，流动相b为乙腈，流动相流速为0.6ml/min；检测器为紫外检测器，检测波长为215nm；梯度洗脱的条件如表13所示。
[0121]
表13梯度洗脱条件
[0122]
时间(％)流动相a(％)流动相b(％)0703057030252080302080357030407030
[0123]
本实施例供试品溶液的色谱图及积分结果如图6所示，图6中的“2”表示(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)(吡咯烷
‑1‑
基)甲酮对应的峰，“3”表示(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐对应的峰，“4”表示最大单杂对应的峰，“1、5、6、7”表示其他杂质对应的峰(图6中的纵坐标“absorbance”表示吸光度，单位为mau)。其积分结果以及检测结果如表14、表15所示。
[0124]
表14色谱图的积分结果
[0125][0126][0127]
表15供试品溶液的检测结果
[0128][0129][0130]
实施例4
[0131]
一种(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐的检测方法，包括如下步骤：
[0132]
1)对照品溶液配制：取适量的(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐对照品，用体积百分浓度为50％的乙腈水溶液溶解，得到浓度为0.5mg/ml的对照品溶液；
[0133]
2)供试品溶液配制：取适量的(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐供试品，用体积百分浓度为50％的乙腈水溶液溶解，得到浓度为0.5mg/ml的对照品溶液；
[0134]
3)系统适用性溶液配制：取适量的(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐对照品、(6
‑
溴
‑2‑
吡啶基)(1
‑
甲基
‑4‑
哌啶基)甲酮和(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)(吡咯烷
‑1‑
基)甲酮置于同一容量瓶中，用体积百分浓度为50％的乙腈水溶液溶解，配置成每毫升含0.5mg的(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐对照品、0.25mg/ml的(6
‑
溴
‑2‑
吡啶基)(1
‑
甲基
‑4‑
哌啶基)甲酮和0.25mg/ml的(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)(吡咯烷
‑1‑
基)甲酮的溶液，得到系统适用性溶液；
[0135]
4)空白试验:精密量取体积百分浓度为50％的乙腈水溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；空白不得有干扰；
[0136]
5)系统适用性试验：精密量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，其中，理论板数按(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐计算应不低于
2000，主峰与相邻杂质的分离度应大于1.5；
[0137]
6)供试品溶液试验：精密量取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，从供试品溶液的色谱图中扣除空白试验的色谱峰，按面积归一化法计算供试品的浓度。
[0138]
本实施例的液相色谱仪的测试条件设定为：色谱柱为规格为4.6
×
250mm，5μm的岛津wondasil c18 superb色谱柱，柱温为26℃；采用双流动相进行梯度洗脱，流动相a为浓度为0.01mol/l的磷酸二氢钾缓冲液(用氢氧化钠溶液调ph至7.0)，流动相b为乙腈，流动相流速为0.6ml/min；检测器为紫外检测器，检测波长为215nm；梯度洗脱的条件如表16所示。
[0139]
表16梯度洗脱条件
[0140][0141][0142]
本实施例供试品溶液的色谱图及积分结果如图7所示，图7中的“1”表示最大单杂对应的峰，“2”表示(6
‑
氨基吡啶
‑2‑
基)(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)甲酮双盐酸盐对应的峰，“3、4”表示其他杂质对应的峰(图7中的纵坐标“absorbance”表示吸光度，单位为mau)。其积分结果以及检测结果如表17、表18所示。
[0143]
表17色谱图的积分结果
[0144][0145]
表18供试品溶液的检测结果
[0146][0147][0148]
由实施例1
‑
4的检测结果可知，对不同批次的供试品可以检测出不同的纯度及其已知杂质、未知杂质，本发明检测方法准确度高，灵敏度高。
[0149]
实施例5
[0150]
实施例5与实施例1的区别在于，流动相a磷酸二氢钾缓冲液的ph值为8.5，其他条件同实施例1。将实施例5的系统适用性溶液进行系统适用性试验，其色谱图如图8所示。由图8可以看出，当磷酸二氢钾缓冲液的ph不在本发明限定范围时，已知杂质(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)(吡咯烷
‑1‑
基)甲酮的峰分叉，峰型不好，影响未知杂质与已知杂质的判断。其积分结果如表19所示。
[0151]
表19色谱图的积分结果
[0152][0153][0154]
实施例6
[0155]
实施例6与实施例1的区别在于，流动相a磷酸二氢钾缓冲液的ph值为4.5，其他条件同实施例1。将实施例6的系统适用性溶液进行系统适用性试验，其色谱图如图9所示。由图9可以看出，当磷酸二氢钾缓冲液的ph不在本发明限定范围时，物质分不开，分离度极差，峰型也较差。其积分结果如表20所示。
[0156]
表20色谱图的积分结果
[0157][0158]
对比例1
[0159]
对比例1与实施例1的区别在于，对比例1采用等度洗脱，其洗脱条件如表21所示。
[0160]
表21等度洗脱条件
[0161]
时间(％)流动相a(％)流动相b(％)05050305050
[0162]
将本对比例的系统适用性溶液进行系统适用性试验，其色谱图如图10所示。由图
10可以看出，对比例1由于采用等度洗脱，导致物质之间的分离度差，峰型差，该色谱系统不适用。其积分结果如表22所示。
[0163]
表22色谱图的积分结果
[0164][0165]
对比例2
[0166]
对比例2与实施例1的区别在于，对比例2的梯度洗脱不在本发明限定范围，其梯度洗脱条件如表23所示。
[0167]
表23梯度洗脱条件
[0168]
时间(％)流动相a(％)流动相b(％)0604056040253070303070356040406040
[0169]
将本对比例的系统适用性溶液进行系统适用性试验，其色谱图如图11所示。由图11可以看出，对比例2由于梯度洗脱条件不在本发明限定的范围内，导致物质之间的分离度差，峰型差，该色谱系统不适用。其积分结果见表24所示。
[0170]
表24色谱图的积分结果
[0171]
[0172][0173]
对比例3
[0174]
对比例3与实施例1的区别在于，对比例3流动相b采用甲醇替换乙腈，其他条件和检测方法同实施例1。将本对比例的系统适用性溶液进行系统适用性试验，其色谱图如图12所示。由图12可以看出，对比例3由于采用甲醇替换乙腈，分离度虽好，但峰型及基线较差。其积分结果见表25所示。
[0175]
表25色谱图的积分结果
[0176][0177][0178]
以上对本发明的较佳实施方式进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明精神的前提下还可作出种种的等同变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本技术权利要求所限定的范围内。