一种单组份TMB显色液及制备方法与流程

本发明涉及生物体外诊断试剂，具体涉及一种单组份tmb显色液。

背景技术：

1、tmb中文名是3,3',5,5'-四甲基联苯胺，为白色结晶粉末，无嗅、无味，难溶于水，易溶于丙酮、乙醚、二甲亚砜、二甲基甲酰胺等有机溶剂。属于一种新型安全的显色试剂。tmb已在逐步取代强致癌物联苯胺和其他致癌性的联苯胺衍生物，应用于临床化验、法医检验、刑事侦破及环境监测等领域；尤其是在临床生化检验方面，tmb作为过氧化酶的新底物，在酶免疫分析法(eia)和酶联免疫吸附检验法(elisa)中获得了广泛的应用；主要应用于:潜血指纹检测；唾液中酒精的快速检测；尿联试纸的配制；肝炎病毒检测；妊娠检测试验；血液和尿液中葡萄糖、血红蛋白、白蛋白的快速测定；粪便隐血试验；血液中粒细胞值的测定、类固醇、性激素的检测；酶活性的测定；抗原、抗体及遗传物质的分析、检测；生物样品的染色；水质检测(余氯、亚硝酸盐等)。

2、tmb显色机理：其氧化产物联苯醌在波长450nm处有最大消光系数，如果hrp量少，过氧化氢溶液和tmb过量时，则形成蓝色的阳离子根。降低ph，即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌。

3、经对现有技术比较研究分析发现，组份不同缓冲液都能支持完成酶促反应，完成显色反应，使用多种缓冲体系可以进行单组分tmb显色液的配制，tmb溶解多使用二甲基亚砜；但在实际配制过程中，因各种组份及配伍不同，导致在配制tmb使用时，可能会有沉淀析出，影响检测结果的可靠性。终止之后的溶液的稳定性也不太理想。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种显色效果并且稳定性好的单组分tmb显色液体系，解决现行显色剂高成本，稳定性差，终止显色后容易有沉淀的问题。

2、本发明提供技术方案如下：

3、一种单组份tmb显色液，每1l的单组份tmb显色液包括以下组分：tmb 50-70mg，dmso 5-10ml，甘油0.5-1.0ml，醋酸钠·3h2o 0.023-0.046g，柠檬酸·h2o 0.21-0.42g，30％h2o20.2-0.3ml；终止液为0.05-0.1mol/l h2so4。

4、优选的，每1l的单组份tmb显色液包括以下组分：tmb 50mg，dmso 5ml，甘油0.5ml，醋酸钠·3h2o 0.023g，柠檬酸·h2o 0.21g，30％h2o20.2ml；终止液为0.05mol/l h2so4。

5、上述单组份tmb显色液按以下配比配制：1l蒸馏水中，加入2-4ml tmb底物缓冲液，0.2-0.3ml 30％h2o2，5-7ml tmb储存液。所述tmb储存液由以下原料按如下重量体积比配制：tmb 5g,dmso 450ml,甘油50ml，加蒸馏水定容到1l。所述tmb底物缓冲液由以下原料按如下重量体积比配制：醋酸钠·3h2o 112.7g，柠檬酸·h2o 105.0g，蒸馏水800ml，用浓盐酸调节ph至3.6，加蒸馏水定容到1000ml。

6、优选的，单组份tmb显色液1l按以下配比配制：1l蒸馏水中，加入2ml tmb底物缓冲液，0.2ml30％h2o2，5mltmb储存液；终止液为0.05mol/l h2so4。

7、对上述单组分tmb显色液进行稳定性验证，并和其他市售产品进行对照实验，显示了经所述单组分tmb显色液显色并终止，避免了沉淀形成，避光保存在4℃有效使用期限至少为2年。

8、本发明中单组份显色液为即用型，无需混合，方便快捷，有效的减少操作误差。稳定性好：2-8℃保存，有效期不低于24个月，显色终止后读数稳定，即使室温也可以20小时放置，且没有沉淀形成。背景低：单组分显色液在370nm检测时od值小于0.2。

技术特征：

1.一种单组份tmb显色液，其特征在于，每1l单组份tmb显色液包括以下组分：tmb 50-70mg，dmso5-10ml，甘油0.5-1.0ml，醋酸钠·3h2o0.023-0.046g，柠檬酸·h2o0.21-0.42g，30%h2o20.2-0.3ml；终止液为0.05-0.1mol/l h2so4。

2.根据权利要求1所述的单组份tmb显色液，其特征在于，每1l的单组份tmb显色液包括以下组分：tmb50mg，dmso5ml，甘油0.5ml，醋酸钠·3h2o0.023g，柠檬酸·h2o 0.21g，30%h2o20.2ml；终止液为0.05 mol/l h2so4。

3.权利要求1所述的单组份tmb显色液的配制方法，其特征在于，单组份tmb显色液按以下配比配制：1l蒸馏水中，加入2-4mltmb底物缓冲液，0.2-0.3ml 30%h2o2，5-7mltmb储存液；所述tmb储存液由以下原料按如下重量体积比配制：tmb5g，dmso450ml，甘油50ml，加蒸馏水定容到1l；所述tmb底物缓冲液由以下原料按如下重量体积比配制：醋酸钠·3h2o112.7g，柠檬酸·h2o105.0g，蒸馏水800ml，用浓盐酸调节ph至3.6，加蒸馏水定容到1000ml。

4.根据权利要求3所述的单组份tmb显色液的配制方法，其特征在于，单组份tmb显色液1l按以下配比配制：1l蒸馏水中，加入2mltmb底物缓冲液，0.2ml30% h2o2，5mltmb储存液；终止液为0.05 mol/l h2so4。

技术总结
本发明提供了一种单组份TMB显色液及制备方法。解决现有技术中涉及的单组份TMB配制使用试剂多、配制过程复杂且不易控制的缺点，还解决了现市售部分单组份TMB试剂加入终止液后容易产生沉淀的问题。本发明所提供显色液配制过程简单，为即用型产品，方便快捷，稳定性好，2‑8°C保存，有效期不低于24个月，显色终止后读数稳定，即使室温也可以20小时放置，也没有沉淀形成；TMB单组分显色液在370nm检测时OD值小于0.2。

技术研发人员：刘晓志,李耿,周美玲,段迎霞,葛琳,张斌,潘永刚,任华景,张勇,宋子龙,常亮,郑海洲,张爱玲,魏敬双,高健
受保护的技术使用者：华北制药集团新药研究开发有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12