一种乳胶微球免疫检测试纸条、试剂盒及方法与流程

1.本发明涉及毒品检测技术领域，特别是涉及一种乳胶微球免疫检测毛发中羟考酮和苯环己哌啶的试纸条、试剂盒及方法。


背景技术：

2.苯环己哌啶是一种有麻醉作用的致幻类药物。苯环己哌啶通过影响人的大脑及中枢神经活动对人体产生多种作用。大剂量服用苯环己哌啶将产生幻觉和惊厥、昏迷甚至死亡等急性中毒症状。大剂量用药后1～2小时，吸毒者开始出现情绪不稳、兴奋躁动、失去痛感、神经麻木、并自感失重，继而注意力不能集中，产生思维障碍，逐渐出现幻觉，有的还因此导致进攻行为或自残行为。
3.羟考酮是一种从毒品蒂巴因提取的一种生物碱，它是阿片类的一种毒品，它的成分与吗啡比较类似，作用在人体是一种抑制类毒品。它是一个强效的一个镇痛药，长期服用会使人形成一定的瘾，如果不按医生的处方而滥用，就会产生一种成瘾阶段的一个反应。
4.针对吸毒者体内毒品含量的检测，体液(主要指尿液和血液)仍是检验毒品较好的生物检材。然而体液中毒品的检出时限短，吸毒者吸毒后，一般在3至7天就由于代谢而难以通过尿液、血液、唾液精确检测出毒品成分及含量，且体液不易保存，不能探究受检者更长一段时间内的吸毒信息，导致部分吸毒人员借此规避查处和管理。而传统的毛发检测技术中，高效液相色谱法得到结果需要的时间长，操作复杂，不适用于现场执法工作。


技术实现要素：

5.基于此，有必要针对苯环己哌啶和羟考酮检出时限短、检测时间长、操作复杂的问题，提供一种能够快速检测、灵敏度高、特异性好的乳胶微球免疫检测试纸条、试剂盒及使用该乳胶微球免疫检测试纸条的毒品检测方法。
6.一种乳胶微球免疫检测试纸条，包括：样品垫、结合垫、检测膜、吸收垫和底板，所述样品垫、所述结合垫、所述检测膜和所述吸收垫在所述底板的一端至另一端依次连接；
7.所述结合垫包被有乳胶微球标记的特异性单克隆抗体，所述乳胶微球标记的特异性单克隆抗体可以与毒品反应，所述毒品包含有苯环已哌啶以及羟考酮；
8.所述检测膜上设有检测线以及质控蛋白构成的质控线，所述检测线包被有相应毒品的合成抗原。
9.在其中一个实施例中，所述乳胶微球为聚苯乙烯红色乳胶微球。
10.在其中一个实施例中，检测羟考酮的特异性单克隆抗体的所述羟考酮合成抗原为羟考酮偶联蛋白复合物；检测苯环己哌啶的特异性单克隆抗体的所述苯环己哌啶合成抗原为苯环己哌啶偶联蛋白复合物。
11.在其中一个实施例中，所述偶联蛋白为牛血清白蛋白或酪蛋白。
12.在其中一个实施例中，所述质控蛋白为羊抗鼠igg抗体。
13.在其中一个实施例中，所述结合垫选自玻璃纤维膜或聚酯膜。
14.在其中一个实施例中，所述检测膜选自硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。
15.在其中一个实施例中，所述底板为pvc底板或其他硬质不吸水的材料底板。
16.在其中一个实施例中，所述检测膜上从所述样品垫至所述吸收垫一端，依次为检测苯环己哌啶的单克隆抗体的检测线、检测羟考酮的单克隆抗体的检测线以及所述质控线。
17.在其中一个实施例中，所述检测线和所述质控线的间隔、以及相邻的所述检测线的间隔为3.5mm～4.5mm。
18.一种如上所述的乳胶微球免疫检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：
19.分别制备所述结合垫和所述检测膜，其中，
20.制备所述结合垫包括如下步骤：制备获得包含所述乳胶微球标记的特异性单克隆抗体的溶液，将制备得到的乳胶微球标记的特异性单克隆抗体喷点于结合垫，将结合垫进行干燥；
21.制备所述检测膜包括如下步骤：制备获得包含羟考酮合成抗原的溶液、包含苯环己哌啶合成抗原的溶液以及包含质控蛋白的溶液，分别划线于检测膜，将检测膜进行干燥；
22.组装所述的样品垫、结合垫、检测膜、吸收垫以及所述的底板。
23.在其中一个实施例中，所述乳胶微球标记的毒品的特异性单克隆抗体的溶液浓度为0.1mg/ml～1mg/ml。
24.在其中一个实施例中，所述羟考酮合成抗原的喷点浓度为0.3mg/ml～1mg/ml；所述苯环己哌啶合成抗原的喷点浓度为0.3mg/ml～1mg/ml。
25.在其中一个实施例中，所述羊抗鼠igg抗体的浓度为1mg/ml～3mg/ml。
26.在其中一个实施例中，制备获得包含所述乳胶微球标记的羟考酮特异性单克隆抗体的溶液的步骤包括：
27.将乳胶微球溶于mes缓冲液中，加入edc/nhs活化剂活化，洗涤、离心后，将乳胶微球用硼酸缓冲液复溶，制备获得混合液a；
28.取羟考酮特异性单克隆抗体，分散于偶联缓冲液中，制备获得混合液b；
29.在所述混合液a中加入混合液b进行反应，制备获得混合液c；
30.对混合液c进行离心，去除上清，再加入封闭液混合，制备获得混合液d；
31.将混合液d洗涤、离心，去除上清，用硼酸缓冲液及封闭剂将乳胶微球复溶，超声波振荡，使乳胶微球均匀分散在缓冲液中，2～8℃避光保存。
32.在其中一个实施例中，所述混合液a的制备步骤中，所述乳胶微球的质量浓度为10％～40％。
33.在其中一个实施例中，所述活化是于24℃～28℃活化0.3h～0.6h。
34.在其中一个实施例中，所述离心是于12000rpm～15000rpm下冷冻离心8min～12min。
35.在其中一个实施例的所述混合液c的制备步骤中，所述混合液a中加入混合液b进行反应，所述乳胶微球与苯环己哌啶特异性单克隆抗体的质量比为1mg：0.5mg～1mg：0.01mg；和/或，所述乳胶微球与羟考酮特异性单克隆抗体的质量比为1mg：0.5mg～1mg：0.01mg。
36.在其中一个实施例的所述混合液c的制备步骤中，反应条件是在25℃～37℃下超
声波振荡0.5h～2h。
37.在其中一个实施例的所述混合液d的制备步骤中，所述离心是于8000rpm～10000rpm下冷冻离心5min～10min。
38.在其中一个实施例的所述混合液d的制备步骤中，所述超声波振荡是于25℃～37℃下振荡0.5h～2h。
39.在其中一个实施例中，对所述混合液d进行离心是于8000rpm～10000rpm下冷冻离心5min～10min。
40.在其中一个实施例中，所述封闭剂是牛血清白蛋白。
41.一种乳胶微球免疫检测试剂盒，包括：检测卡、样品裂解液以及如上所述的乳胶微球免疫检测试纸条；
42.所述检测卡具有检测腔，并设有与所述检测腔连通的加样槽和观察窗，所述的乳胶微球免疫检测试纸条安装在所述检测腔内；所述样品垫位于所述检测卡的加样槽中，且所述检测线和所述质控线露于所述检测卡的观察窗；
43.所述样品裂解液分装至2ml冻存管内保存。
44.一种乳胶微球免疫检测方法，所述乳胶微球免疫检测方法包括：
45.取待测样品滴加至前述任意一项所述的乳胶微球免疫检测试纸条的样品垫上，或滴加至前述的乳胶微球免疫检测试剂盒的检测卡的加样槽内，荧光检测。
46.本发明的有益效果如下：
47.1、本发明可以快速检测毛发中是否含有羟考酮、苯环己哌啶，只需要10分钟，相比高效液相色谱法数小时，效率大大提高，且可以现场执法，无需用到检测仪器。
48.2、本发明采用红色乳胶微球进行标记和优选的抗体抗原配对，保证了毛发中羟考酮、苯环己哌啶毒品检测的低浓度消线要求。在快速检测毛发毒品的市场中，刚开始普遍消线浓度较高。
49.3、采用了独有的样品裂解液，能快速释放毛发中的羟考酮、苯环己哌啶，不影响检测的特异性和灵敏度，并能在室温长期稳定保存。
附图说明
50.图1为本发明一实施例的乳胶微球免疫检测试纸条的结构示意图；
51.图2为使用本发明乳胶微球免疫检测试剂盒检测苯环己哌啶、羟考酮的检测精密度测试结果图。
52.其中，附图标记与部件名称之间的对应关系为：
53.1、样品垫；2、结合垫；3、检测膜；4、吸收垫；5、底板；6、质控线；7、检测线(t1)；8、检测线(t2)。
具体实施方式
54.为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的最佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
55.需要说明的是，当元件被称为“固定于”、“设于”另一个元件，它可以直接在另一个元件上或者也可以存在居中的元件。当一个元件被认为是“连接”另一个元件，它可以是直接连接到另一个元件或者可能同时存在居中元件。
56.除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
57.本发明一实施例提供了一种乳胶微球免疫检测试纸条，其包括样品垫1、结合垫2、检测膜3、吸收垫4和底板5，样品垫1、结合垫2、检测膜3和吸收垫4在底板5的一端至另一端依次连接；
58.结合垫2包被有乳胶微球标记的特异性单克隆抗体，乳胶微球标记的特异性单克隆抗体可以与羟考酮反应；
59.检测膜3上设有检测线t17、检测线t28以及质控蛋白构成的质控线，检测线包被有羟考酮合成抗原以及苯环己哌啶抗原。
60.优选地，所述乳胶微球为聚苯乙烯红色乳胶微球。
61.优选地，乳胶微球粒径为100nm～700nm。
62.优选地，本发明实施例的检测羟考酮的特异性单克隆抗体的羟考酮抗原为合成抗原；检测苯环己哌啶的特异性单克隆抗体的苯环己哌啶合成抗原为苯环己哌啶偶联蛋白复合物。
63.优选地，苯环己哌啶抗原为苯环己哌啶偶联蛋白复合物；羟考酮抗原为羟考酮偶联蛋白复合物。
64.优选地，偶联蛋白为牛血清蛋白或酪蛋白。
65.优选地，质控蛋白为羊抗鼠igg抗体或兔抗鼠igg抗体。进一步优选为羊抗鼠igg抗体。
66.优选地，结合垫选自玻璃纤维膜或聚酯膜；和/或，检测膜选自硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；和/或，底板为pvc底板或者其他硬质不吸水的材料底板。
67.优选地，检测膜上从样品垫至吸收垫一端，依次为依次为检测苯环己哌啶的单克隆抗体的检测线(t1)8、检测羟考酮的单克隆抗体的检测线(t2)7以及质控线6。可以理解的是，包被苯环己哌啶抗原的检测线、以及包被羟考酮抗原的检测线，在顺序上没有限制。
68.优选地，检测线和质控线的间隔、以及相邻的检测线的间隔为3.5mm～4.5mm。
69.本发明第二方面的实施例提供了一种如上述的乳胶微球免疫检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：
70.分别制备结合垫和检测膜，其中，
71.制备结合垫2的步骤包括：制备获得包含乳胶微球标记的特异性单克隆抗体的溶液，将制备得到的乳胶微球标记的特异性单克隆抗体喷点于结合垫2，将结合垫2置于鼓风干燥箱内，37℃～45℃干燥1h～7h；
72.制备检测膜3的步骤包括：制备获得包含羟考酮合成抗原的溶液、包含苯环己哌啶合成抗原的溶液以及包含质控蛋白的溶液，分别划线于检测膜3，将检测膜3置于鼓风干燥箱内，37℃～45℃烘干12h～48h；
73.组装样品垫1、结合垫2、检测膜3、吸收垫4以及底板5。
74.优选地，乳胶微球标记的特异性单克隆抗体的溶液浓度为0.1mg/ml～1mg/ml。
75.优选地，羟考酮合成抗原的浓度为0.3mg/ml～1mg/ml，喷点的用量为0.4μl/cm～1.0μl/cm。
76.优选地，苯环己哌啶合成抗原的浓度为0.3mg/ml～1mg/ml，喷点的用量为0.4μl/cm～1.0μl/cm。
77.可以理解的是，根据需要，在喷点前对羟考酮合成抗原和苯环己哌啶合成抗原进行稀释或不稀释。
78.优选地，在喷点前对羟考酮合成抗原和苯环己哌啶合成抗原使用磷酸盐缓冲液或海藻糖稀释液稀释，稀释后喷点浓度为0.3mg/ml～1mg/ml，喷点的用量为0.4μl/cm～1.0μl/cm。
79.优选地，上述的乳胶微球免疫检测试纸条的组装顺序如下：
80.检测膜3固定在底板5上，吸收垫4的一端与底板5连接，吸收垫4的另一端与检测膜3连接，结合垫2的一端与检测膜3远离吸收垫4的一端连接，结合垫2的另一端设置在底板5上，样品垫1的一端与结合垫2连接，样品垫1的另一端设置在底板5上。
81.优选地，制备获得包含乳胶微球标记的毒品特异性单克隆抗体的溶液的步骤包括：
82.将乳胶微球溶于mes缓冲液中，加入edc/nhs活化剂活化，洗涤、离心后，将乳胶微球用硼酸缓冲液复溶，制备获得混合液a；
83.取毒品特异性单克隆抗体，分散于偶联缓冲液中，制备获得混合液b；
84.在混合液a中加入混合液b进行反应，制备获得混合液c；
85.对混合液c进行离心，去除上清，再加入封闭液混合，制备获得混合液d；
86.将混合液d洗涤、离心，去除上清，用硼酸缓冲液及封闭剂将乳胶微球复溶，超声波振荡，使乳胶微球均匀分散在缓冲液中，2～8℃避光保存。
87.优选地，在混合液a的制备步骤中，乳胶微球的质量浓度为10％～40％。
88.优选地，在混合液a的制备步骤中，活化是于24℃～28℃活化0.3h～0.6h。
89.优选地，在混合液a的制备步骤中，离心是于12000rpm～15000rpm下冷冻离心8min～12min。
90.优选地，在混合液c的制备步骤中，乳胶微球与苯环己哌啶特异性单克隆抗体的质量比为1mg：0.5mg～1mg：0.01mg。
91.优选地，在混合液c的制备步骤中，乳胶微球与羟考酮特异性单克隆抗体的质量比为1mg：0.5mg～1mg：0.01mg。
92.优选地，在混合液c的制备步骤中，混合液a中加入混合液b进行反应是在25℃～37℃下超声波振荡0.5h～2h。
93.优选地，在混合液d的制备步骤中，离心是于8000rpm～10000rpm下冷冻离心5min～10min；和/或，超声波振荡是于25℃～37℃下振荡0.5h～2h。
94.优选地，对混合液d进行离心是于8000rpm～10000rpm下冷冻离心5min～10min。
95.优选地，封闭剂是牛血清白蛋白。
96.本发明第三方面的实施例提供了一种乳胶微球免疫检测试剂盒，包括：检测卡、样
品裂解液以及如上述所述的乳胶微球免疫检测试纸条；
97.检测卡具有检测腔，并设有与检测腔连通的加样槽和观察窗，乳胶微球免疫检测试纸条安装在检测腔内；样品垫位于检测卡的加样槽中，且检测线和质控线露于检测卡的观察窗。
98.样品裂解液分装至2ml冻存管内保存。
99.本发明第四方面的实施例提供了一种乳胶微球免疫检测方法，
100.取待测样品滴加至如上述任意一项的乳胶微球免疫检测试纸条的样品垫上，或滴加至如上述乳胶微球免疫检测试剂盒的试剂卡的加样槽内，荧光检测。
101.具体地，将切好的试剂条装入到检测卡中，检测的时候剪取嫌疑人少量根部毛发并剪碎，放入毛发裂解液中，超声5-10分钟，吸取毛发裂解液加入到检测卡的加样口中，等待5-10分钟后可用肉眼观察是否出线，最后得到毛发中是否含有羟考酮、苯环己哌啶。
102.本发明的有益效果：
103.1、利用本发明方法制作的毛发羟考酮、苯环己哌啶检测试剂盒2ng/ml能完全消线，比市面上普遍的快速毛发毒品检测产品的消线25ng/ml高。
104.2、利用本发明的方法检测了确定为阴性的样本30人份，加标羟考酮(oxy)、苯环己哌啶(pcp)为阳性的毛发样品各30份，检测符合率在100％。
105.本发明下述实施例中：乳胶微球，从magsphere公司购得；检测羟考酮的特异性单克隆抗体从广州万翎生物科技有限公司购得；羟考酮合成抗原从广州万翎生物科技有限公司购得；检测苯环己哌啶的特异性单克隆抗体从广州万翎生物科技有限公司购得；苯环己哌啶合成抗原从广州万翎生物科技有限公司购得；活化缓冲液，10mm～100mm mes ph5～7；偶联缓冲液，10mm～50mm pbs；磷酸缓冲液，0.005～0.02mol/l，ph7.2～7.8；海藻糖溶液，0.5％～4％，ph7.2～7.4；硼酸缓冲液，5mm～20mm，ph7～8.5。
106.实施例1：乳胶微球免疫检测试纸条
107.如图1所示，本实施例的乳胶微球免疫检测试纸条包括试纸条本体，试纸条本体包括底板5以及设置底板5上且从底板5的一端至另一端顺次连接的样品垫1、结合垫2、检测膜3和吸收垫4。其中，乳胶微球免疫检测试纸条的组装顺序如下：检测膜3固定在底板5上，吸收垫4的一端与底板5连接，吸收垫4的另一端与检测膜3连接，结合垫2的一端与检测膜3远离吸收垫4的一端连接，结合垫2的另一端设置在底板5上，样品垫1的一端与结合垫2连接，样品垫1的另一端设置在底板5上。
108.结合垫2选用玻璃纤维膜，检测膜3选用硝酸纤维素膜，底板5为pvc胶板。
109.结合垫2包被有乳胶微球标记的特异性单克隆抗体，乳胶微球标记的特异性单克隆抗体可以与毒品反应，毒品包含有苯环已哌啶以及羟考酮。其中，乳胶微球采用聚苯乙烯红色乳胶微球。
110.检测膜3上设有检测线7、8以及质控蛋白构成的质控线6，检测线(t1)7包被有苯环己哌啶合成抗原，检测线(t2)8包被有羟考酮合成抗原。苯环己哌啶合成抗原为苯环己哌啶合成抗原-牛血清白蛋白复合物；羟考酮合成抗原为羟考酮合成抗原-牛血清白蛋白复合物；质控蛋白为羊抗鼠igg抗体；检测线(t1)7、检测线(t2)8和质控线6在检测膜3上自样品垫至吸收垫方向依次平行设置，相邻两条线的间隔是4mm。
111.实施例2：乳胶微球免疫检测试剂盒的制备
112.本实施例的乳胶微球免疫检测试剂盒，包括壳体以及上述的乳胶微球免疫检测试纸条、样品裂解液和检测卡，乳胶微球免疫检测试纸条设置在检测卡内，检测卡开设有加样槽和观察窗，样品垫1位于检测卡的加样槽中，观察窗对应乳胶微球免疫检测试纸条的检测膜3上的检测线(t1)7、检测线(t2)8和质控线6。样品裂解液分装至2ml冻存管内保存。
113.实施例3：实施例1试纸条的制备
114.本实施例提供一种检测苯环己哌啶、羟考酮的试纸条的制备方法，包括如下步骤：
115.a、制备所述乳胶微球标记的毒品特异性单克隆抗体，稀释，喷点于结合垫，干燥，制作包被有乳胶微球标记的毒品特异性单克隆抗体的所述结合垫。具体如下：
116.a1、制备乳胶微球标记的毒品特异性单克隆抗体：
117.(a)将乳胶微球配制成20％的工作浓度；
118.(b)加入edc/nhs活化剂(含有edc/nhs的浓度是20mg/ml)2μl，混匀，室温活化0.5h；12000rpm冷冻离心10min，去上清后，将乳胶微球分散在100μl硼酸缓冲液中，超声分散均匀；
119.(c)然后加入毒品特异性抗体100μg，分散在100μl偶联缓冲液中，将乳胶微球加入毒品特异性抗体中，混匀，恒温25℃，超声波振荡混匀2h；
120.(d)10000rpm冷冻离心10min，去除游离的毒品特异性抗体；
121.(e)加入质量浓度为1％的牛血清白蛋白封闭液200μl，超声分散，恒温25℃，超声波振荡混匀2h；
122.(f)10000rpm冷冻离心10min，去除上清，加入200μl储存液。
123.a2、制备结合垫
124.(1)取通过a1步骤制备的乳胶微球标记的羟考酮单克隆抗体、苯环己哌啶单克隆抗体；
125.(2)将步骤(1)的乳胶微球标记的羟考酮单克隆抗体、苯环己哌啶单克隆抗体以1:1比例混合；
126.(3)将步骤(2)中获得的混合物喷涂在结合垫上，喷涂时可以使用但不限于biodot点膜仪将相应的溶液均匀喷涂在经过预处理的结合垫上。预处理是先在结合垫加入0.05％～2.50％的tween-80或tx-100溶液10ml～80ml烘干改性；
127.b、分别取苯环己哌啶抗原、羟考酮抗原以及质控蛋白，稀释，喷点于检测膜，干燥，制作设有检测线和质控线的检测膜。具体包括：
128.在检测膜靠近结合垫一端起，按顺序喷点苯环己哌啶-牛血清白蛋白复合物(喷点浓度为0.2mg/ml)、羟考酮-牛血清白蛋白复合物(喷点浓度为0.2mg/ml)、羊抗鼠多克隆抗体(喷点浓度为0.1mg/ml)，相应形成检测线和质控线；喷点量为0.4μl/cm。
129.c、组装样品垫、结合垫、检测膜、吸水垫以及的底板。具体如下：
130.将样品垫、步骤a制备的结合垫、步骤b制备的检测膜、吸水垫依次粘贴到pvc胶板上，制成大板，切裁制得单人份乳胶微球免疫检测试纸条。
131.最后将乳胶微球免疫检测试纸条装入塑料检测卡制得检测毒品的检测卡。
132.本实施例的毒品检测卡，与配套的样本稀释液、定量滴管和干燥剂放入铝箔袋内，使用封口机封口、常温放置保存。出厂前检测灵敏度、精密度、热稳定性、测试环境低温稳定性、测试时间稳定性、特异性。
133.实施例4：建立对苯环己哌啶、羟考酮检测结果的精密度检测，实施方法如下：
134.取实施例2制备的毒品检测试剂盒，如表1中所示稀释苯环己哌啶企业参考品、羟考酮企业参考品，浓度分别为0ng/mg、0.1ng/mg、1.0ng/mg，使用配套的红色微球免疫层析分析仪检测卡的观察窗的颜色深度，并用相应的软件计算峰面积，如图2所示为分析仪软件，每个浓度重复10次测试，并计算变异系数cv，结果如表1所示。
135.表1不同浓度的苯环己哌啶、羟考酮检测精密度测试结果
[0136][0137]
实施例5：用实施例2制备的乳胶微球免疫检测试剂盒，对比不同环境的测试温度对检测结果的影响，实验方法如下：
[0138]
用剪刀剪碎疑似阳性和阴性的毛发样本，加入5mg至800μl的配套样本稀释液中，混匀，静置裂解5min，在5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃下，加样80μl检测。使用配套的红色微球免疫层析分析仪检测卡的观察窗的颜色深度，并用相应的软件计算峰面积。
[0139]
表2苯环己哌啶不同环境测试温度对比结果
[0140][0141]
表3羟考酮不同环境测试温度对比结果
[0142][0143]
从测试结果可得出，苯环己哌啶测试阴性毛发时，5℃相对偏差大于15％，测试阳性毛发时，45℃峰面积大于300，肉眼观察没有完全消线，即为假阴性。羟考酮测试阴性毛发时，5℃相对偏差大于15％，测试阳性毛发时，5℃和45℃峰面积大于300，肉眼观察没有完全消线，即为假阴性。说明装置可以在10℃-40℃环境温度范围内用于检测。
[0144]
实施例6：用实施例2制备的乳胶微球免疫检测试剂盒，对比不同测试时间对检测结果的影响，实验方法如下:
[0145]
用剪刀剪碎疑似阳性和阴性的毛发样本，加入5mg至800μl的配套样本稀释液中，混匀，静置裂解5min，加样80μl，在加样后1min、3min、5min、10min、15min、20min、25min、30min、35min、40min上机检测。使用配套的红色微球免疫层析分析仪检测卡的观察窗的颜色深度，并用相应的软件计算峰面积。若阴性峰面积小于12000，判断为假阳性；若阳性峰面积大于300，判断为假阴性。
[0146]
表4苯环己哌啶不同测试时间对比结果
[0147][0148][0149]
表5羟考酮不同测试时间对比结果
[0150][0151]
从测试结果可得出，苯环己哌啶、羟考酮测试阴性毛发时，1min峰面积小于12000。装置可在3min-40min范围内进行测试，符合阴阳性。
[0152]
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0153]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。