分离测定(2Z)-2-(3-硝基苯基亚甲基)乙酰乙酸甲酯及其相关杂质的方法与流程

本发明属于化学原料分析，具体涉及一种分离测定(2z)-2-(3-硝基苯基亚甲基)乙酰乙酸甲酯及其相关杂质的方法。

背景技术：

1、(2z)-2-(3-硝基苯基亚甲基)乙酰乙酸甲酯,英文名：(z)methyl 2-3-(nitroben-zylidene)-3-oxobutanoate)，分子式：c12h11no5，分子量：249.22，cas号：119128-13-1，其结构式如下所示：

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3、其是以3-硝基苯甲醛、乙酰乙酸甲酯为原料，在异丙醇中经冰乙酸和六氢吡啶催化发生knoevenagel缩合反应制得，为合成地平类化合物(如盐酸贝尼地平、马尼地平等)的关键中间体。检测控制其相关杂质，对合成地平类化合物有重要的意义。其中，其杂质的类型及结构如下表1所示。

4、表1(2z)-2-(3-硝基苯基亚甲基)乙酰乙酸甲酯杂质结构

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7、目前，没有检索到分离测定(2z)-2-(3-硝基苯基亚甲基)乙酰乙酸甲酯及其相关杂质的方法。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明目的在于提供一种分离、测定(2z)-2-(3-硝基苯基亚甲基)乙酰乙酸甲酯及其相关杂质的方法，该方法可以在最高35min内将所有杂质分离出来，并对相关杂质进行含量测定，该方法分离度高，专属性强。

2、所述相关杂质包括杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质g、杂质h、杂质i中的一种或多种；所述杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质g、杂质h、杂质i的结构式如下所示：

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6、所述分离(2z)-2-(3-硝基苯基亚甲基)乙酰乙酸甲酯及其相关杂质的方法包括：使用以辛基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以三氟醋酸水溶液为流动相a，甲醇为流动相b，乙腈为流动相c进行梯度洗脱；所述梯度洗脱的程序为：

7、0min时，所述流动相a、流动相b、流动相c的体积比为65-75:15-20:10-15，

8、2min时，所述流动相a、流动相b、流动相c的体积比为65-75:15-20:10-15，

9、22min时，所述流动相a、流动相b、流动相c的体积比为15-25:45-50:30-35，

10、25min时，所述流动相a、流动相b、流动相c的体积比为15-25:45-50:30-35，

11、26min时，所述流动相a、流动相b、流动相c的体积比为65-75:15-20:10-15，

12、35min时，所述流动相a、流动相b、流动相c的体积比为65-75:15-20:10-15。

13、优选地，所述梯度洗脱的程序为：

14、0min时，所述流动相a、流动相b、流动相c的体积比为70:18:12，

15、2min时，所述流动相a、流动相b、流动相c的体积比为70:18:12，

16、22min时，所述流动相a、流动相b、流动相c的体积比为20:48:32，

17、25min时，所述流动相a、流动相b、流动相c的体积比为20:48:32，

18、26min时，所述流动相a、流动相b、流动相c的体积比为70:18:12，

19、35min时，所述流动相a、流动相b、流动相c的体积比为70:18:12。

20、优选地，所述色谱柱选自辛烷基键合硅胶，agilent sb-c8 4.6mm×250mm，5μm。

21、进一步，所述色谱柱的柱温设置为15-30℃，优选为20℃。

22、进一步，进样流速为0.8-1.2ml/min，优选为1ml/min。

23、进一步，所述三氟醋酸水溶液的体积百分数为0.05-0.2％，优选为0.1％。

24、进一步，进样体积为5μl。

25、进一步，进样样品使用乙腈作为溶剂进行溶解。

26、本发明目的进一步提供一种测定(2z)-2-(3-硝基苯基亚甲基)乙酰乙酸甲酯及其相关杂质的方法，所述方法包括：(1)按照前任一所述的分离(2z)-2-(3-硝基苯基亚甲基)乙酰乙酸甲酯及其相关杂质的方法将(2z)-2-(3-硝基苯基亚甲基)乙酰乙酸甲酯及其相关杂质进行分离；(2)然后进行入检测器进行检测。

27、进一步，所述检测器的波长设置为264nm±2nm。

28、进一步，根据所述检测器检测的峰面积使用加校正因子主成分自身对照法计算所述杂质a和/或杂质b的含量；和/或根据所述检测器检测的峰面积使用不加校正因子主成分自身对照法计算所述杂质g和/或杂质h和/或杂质i的含量；和/或根据所述检测器检测的峰面积使用外标法计算所述杂质c和/或杂质d和/或杂质e和/或杂质f的含量。

29、本发明有益效果在于

30、本发明提供的分离、测定(2z)-2-(3-硝基苯基亚甲基)乙酰乙酸甲酯及其相关杂质的方法可以在35分钟内，能同时对9个已知杂质(包括合成原料、顺反异构体、位置异构体、副产物)及未知杂质进行检测，各杂质间分离度均能满足要求，且本方法灵敏度高，对部分杂质可以按遗传毒性杂质限度进行检测，不受其他杂质和供试品干扰。

技术特征：

1.分离(2z)-2-(3-硝基苯基亚甲基)乙酰乙酸甲酯及其相关杂质的方法，其特征在于，所述相关杂质包括杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质g、杂质h、杂质i中的一种或多种；所述杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f、杂质g、杂质h、杂质i的结构式如下所示：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序为：

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序为：

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温设置为15-30℃。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进样流速为0.8-1.2ml/min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述三氟醋酸水溶液的体积百分数为0.05-0.2％。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进样样品使用乙腈作为溶剂进行溶解。

8.测定(2z)-2-(3-硝基苯基亚甲基)乙酰乙酸甲酯及其相关杂质的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)按照权利要求1-7任一所述的方法将(2z)-2-(3-硝基苯基亚甲基)乙酰乙酸甲酯及其相关杂质进行分离；(2)然后进行入检测器进行检测。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述检测器的波长设置为264nm±2nm。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，根据所述检测器检测的峰面积使用加校正因子主成分自身对照法计算所述杂质a和/或杂质b的含量；和/或根据所述检测器检测的峰面积使用不加校正因子主成分自身对照法计算所述杂质g和/或杂质h和/或杂质i的含量；和/或根据所述检测器检测的峰面积使用外标法计算所述杂质c和/或杂质d和/或杂质e和/或杂质f的含量。

技术总结
本发明属于化学原料分析技术领域，具体涉及一种分离、测定(2Z)‑2‑(3‑硝基苯基亚甲基)乙酰乙酸甲酯及其相关杂质的方法。该方法是使用以辛基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以三氟醋酸水溶液为流动相A，甲醇为流动相B，乙腈为流动相C进行梯度洗脱分离，然后进入检测器进行检测。方法可以最高在35分钟内，能同时对9个已知杂质(包括合成原料、顺反异构体、位置异构体、副产物)及未知杂质进行检测，各杂质间分离度均能满足要求，且本方法灵敏度高，对部分杂质可以按遗传毒性杂质限度进行检测，不受其他杂质和供试品干扰。

技术研发人员：陈雯,向虹帆,穆建飞,周书荣,唐舒棠,刘阔
受保护的技术使用者：重庆华邦制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13