地榆皂苷I在枸骨叶样品质量检测中的应用以及相应的质量检测方法与流程

本发明属于药物分析，具体涉及地榆皂苷i在枸骨叶样品质量检测中的应用，以及利用地榆皂苷i对枸骨叶样品进行质量检测的方法。

背景技术：

1、枸骨叶为一味传统中药，又名猫儿刺、枸骨刺、老虎刺、八角刺、鸟不宿、苦丁茶等，始载于《本草拾遗》，药用历史悠久[1,2]。《中国药典》(2020年版)一部收载枸骨叶为冬青科植物枸骨ilex cornuta lindl.ex paxt.的干燥叶，其功能与主治为清热养阴、益肾、平肝，用于肺痨咯血，骨蒸潮热，头晕目眩[3]。在江浙一带，其嫩叶作为苦丁茶，《全国中草药汇编》记载具有治头痛、解热效能的功效[4]。现代研究表明，枸骨叶主要含三萜类、皂苷类、黄酮等类成分，具有免疫抑制、抗炎、杀菌、抗生育、心血管系统保护等活性[5～9]。

2、关于枸骨叶药材的质量控制，《中国药典》(2020年版)未收载含量测定项目[3]。香港中药材标准中以熊果酸和羽扇豆醇作为含量测定指标[10]，郭亚健、李颜等学者分别建立了枸骨叶中熊果酸和羽扇豆醇的含量测定方法[11,12]，洪艳平、蔡伟、施之琪和陈颖等学者分别建立枸骨叶中总黄酮和金丝桃苷、山柰素和绿原酸等多酚类化合物的含量测定方法[13～16]，王存琴、姚志容和周国莉等学者建立了枸骨叶中长梗冬青苷、冬青苷ii和总皂苷的含量测定方法[17～19]。关于枸骨叶制剂的质量控制，仅有聂丽云等学者建立了枸骨叶提取物中异鼠李素-3-o-β-d-葡萄糖苷和芒柄花素的含量测定方法[20]。以上方法仅是对药材进行控制，或者仅是对提取物进行控制，缺少同一指标从药材到制剂这一全过程的控制。

3、关于枸骨叶质量控制的专利申请目前较少。特别是枸骨叶药材及饮片含量测定方面未见专利申请，枸骨叶制剂含量测定方面目前仅有1篇专利，即孙冬梅等申请的“枸骨叶配方颗粒及其制备方法和检测方法”[21]。该专利采用红外指纹图谱检测枸骨叶饮片和配方颗粒的质量，同时在原料药材控制中采用水解法测定指纹图谱来控制枸骨叶质量。但采用水解法测定的是水解产物，无法反映原料药材中原有成分，而采用红外光谱法又无法反映具体某一成分的含量情况。

4、作为枸骨叶制剂的一种，枸骨叶配方颗粒是在中医理论指导下，采用符合现行版《中国药典》标准的枸骨叶饮片，经水加热提取、分离、浓缩、干燥、制粒而成的颗粒。按照中医临床处方调配后，供患者冲服使用。枸骨叶配方颗粒具有与传统水煎剂基本相同的疗效和药理作用，同时还具有体积小、易于携带和保存等优点。由于采用了水提取，而熊果酸、羽扇豆醇等极性较小的三萜类成分的水溶性较差，因此不适用于枸骨叶配方颗粒的质量控制；金丝桃苷、山柰素和有机酸等成分虽然有一定水溶性，但在多种植物中均有分布，专属性较差。

5、地榆皂苷i(ziyuglycoside i,1-o-[(3β)-3-(α-l-arabinopyranosyloxy)-19-hydroxy-28-oxours-12-en-28-yl]-β-d-glucopyranose)，为乌苏烷型五环三萜类皂苷，分子式：c41h66o13，cas号：35286-58-9，其结构式如下：

6、

7、在多个文献中均报道枸骨叶中含有地榆皂苷i[1,2,5～9]，但其含量测定方法未曾披露，亦未曾采用地榆皂苷i作为其质量控制手段。

8、参考文献：

9、[1]中药大辞典(第二版)编委会.中药大辞典(第二版)[m].上海:上海科技出版社,2005:784.

10、[2]中华本草编委会.中华本草(第五册)[m].上海:上海科学技术出版社,1999:147-148.

11、[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(2020年版)一部[s].北京:中国医药科技出版社,2010:261.

12、[4]全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编(第二版,上册)[m].北京:人民卫生出版社,1996:602-603.

13、[5]杨卫华,赵玉丛.中药枸骨叶化学成分和药理作用的研究进展[j].医药世界,2007,9(3):103.

14、[6]彭国全,杨冬梅.枸骨的药用功效与保健作用[j].江西农业学报,2011,23(6):79-82.

15、[7]左文健,梅文莉,曾艳波等.枸骨的化学成分和药理活性研究进展[j].安徽农业科学,2011,39(27):16560-16562.

16、[8]王存琴,何丹.枸骨的化学成分及药理活性研究进展[j].包头医学院学报,2016,32(8):160-162.

17、[9]yi f,zhao x-l,peng y,et al.genus ilex l.phytochemistry,ethnopharmacology,and pharmacology[j].chinese herbal medicines,2016,8(3):209-230.

18、[10]香港中药材标准第七期256-268.https://www.cmro.gov.hk/files/hkcmms/vol7/main.html.

19、[11]郭亚健,崔玉萍,周静等.不同采集期枸骨叶中熊果酸含量测定[j].中国中药杂志,1995,20(10):591-592.

20、[12]李颜,吴弢,王峥涛等.rp-hplc测定枸骨叶中羽扇豆醇的含量[j].中国中药杂志,2008,33(2):149-152.

21、[13]洪艳平,上官新晨,刘楠等.枸骨叶总黄酮提取与测定[j].江西农业大学学报,2008,30(3):529-533.

22、[14]蔡伟.hplc法测定枸骨叶中金丝桃苷的含量[j].北方药学,2016,13(1):1.

23、[15]施之琪,王洛临,谢媛等.高效液相色谱法同时测定枸骨叶中槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量[j].中国医院药学杂志,2014,34(21):1831-1833.

24、[16]陈颖,王存琴,汪雷等.hplc法同时测定枸骨叶中10种多酚类成分的含量[j].中药新药与临床药理,2019,30(6):715-718.

25、[17]王存琴,汪雷,陈颖等.高效液相色谱法同时测定不同采收期枸骨叶中4种三萜类成分含量[j].中药新药与临床药理,2020,31(9):1092-1096.

26、[18]姚志容,李军,赵明波等.hplc-elsd测定枸骨叶中的冬青苷ii的含量[j].中国中药杂志,2010,35(17):2312-2314.

27、[19]周国莉,舒柯,聂骊晓等.不同产地中药材枸骨叶中总皂苷的含量测定[j].湖南中医药大学学报,2010,30(7):33-35.

28、[20]聂丽云,曹旭.hplc同时测定枸骨叶提取物中异鼠李素-3-o-β-d-葡萄糖苷和芒柄花素的含量[j].药学研究,2017,36(3):142-144.

29、[21]孙冬梅,王洛临,施之琪等.枸骨叶配方颗粒及其制备方法和检测方法[p].cn103800399b,2016.08.17.

技术实现思路

1、发明要解决的问题

2、针对本领域中作为枸骨叶样品(例如生药、饮片、标准汤剂及制剂)质量评价指标的物质相对较少，以及目前针对枸骨叶样品质量检测方法相应匮乏等问题，为了丰富枸骨叶的质量控制手段，本发明提出将地榆皂苷i应用于枸骨叶样品的质量检测，并建立了枸骨叶样品中地榆皂苷i的含量测定方法，为枸骨叶样品的内在质量的控制提供新的分析手段，实现了枸骨叶药材、饮片、标准汤剂和配方颗粒的全过程控制。

3、用于解决问题的方案

4、[1].一种枸骨叶样品的质量检测方法，其包括如下步骤：对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、液相色谱检测和数据分析，其中，所述数据分析包括计算所述枸骨叶样品中地榆皂苷i的含量。

5、[2].根据[1]所述的质量检测方法，其特征在于，所述枸骨叶样品选自枸骨叶的药材、饮片、提取物、标准汤剂和配方颗粒的一种或多种。

6、[3].根据[1]或[2]所述的质量检测方法，其特征在于，所述液相色谱检测采用的条件包括：色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相a为乙腈或甲醇，优选的流动相a为乙腈；流动相b为甲酸水溶液、醋酸水溶液、磷酸水溶液或水，优选的流动相b为浓度以甲酸的体积百分比计为0.2％的甲酸水溶液。

7、[4].根据[3]所述的质量检测方法，其特征在于，所述液相色谱检测采用的条件还包括：利用所述流动相a与流动相b进行等度洗脱或梯度洗脱，优选为等度洗脱，更优选的流动相a与流动相b的体积比为15:85至50:50；流速为0.20-0.40ml/min；柱温为20-45℃；采用紫外检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器或电雾式检测器。

8、[5].根据[1]至[4]中任一项所述的质量检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备包括如下步骤：取枸骨叶样品粉末，精密称定，置容器中，精密加入提取溶剂，密塞，称定重量，提取后，放冷，再称定重量，用所述提取溶剂补足减失的重量，摇匀，过滤，取二分之一体积的续滤液，蒸干，残渣加所述提取溶剂复溶，转移至定量容器中，加所述提取溶剂定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

9、[6].根据[5]所述的质量检测方法，其特征在于，所述枸骨叶样品粉末与所述提取溶剂的质量体积比为1g:(15～800ml)。

10、[7].根据[5]或[6]所述的质量检测方法，其特征在于，所述提取溶剂为醇类或醇类水溶液；优选地，所述提取溶剂为甲醇或甲醇水溶液；更优选地，所述甲醇水溶液的浓度以甲醇的体积百分比计大于等于30％。

11、[8].根据[5]至[7]中任一项所述的质量检测方法，其特征在于，所述提取采用超声、加热回流或振摇的方式进行，所述提取的时间为5-60min。

12、[9].根据[1]至[7]中任一项所述的质量检测方法，其特征在于，所述对照品溶液的制备包括如下步骤：取地榆皂苷i对照品，精密称定，加入溶剂，混匀至溶清，即得；其中，所述溶剂为醇类或醇类水溶液；优选地，所述溶剂为甲醇或甲醇水溶液；更优选地，所述甲醇水溶液的浓度以甲醇的体积百分比计大于等于30％。

13、[10].地榆皂苷i在枸骨叶样品质量检测中的用途，优选地，所述枸骨叶样品选自枸骨叶药材、饮片、提取物、标准汤剂、配方颗粒以及含有枸骨叶的经典名方物质基准和成品颗粒中的一种或多种。

14、发明的效果

15、通过上述技术方案的实施，本发明通过液相色谱法，并对色谱条件进行合理控制，建立枸骨叶样品中地榆皂苷i的含量测定方法，可以为枸骨叶样品的质量检测提供新的分析手段。

16、同时，本发明的方法以地榆皂苷i为指标成分，不仅适用于枸骨叶药材、饮片、标准汤剂和配方颗粒的质量检测，还适合于含有枸骨叶的其它产品的检测。

17、此外，本发明的方法操作简单，重现性、稳定性好，回收率可靠，检测成本低，检测效率高，以期为规范枸骨叶药材及制剂市场和合理开发提供依据。