一种液体活检样本的处理方法及其应用与流程

本发明涉及液体活检样本的处理方法，具体而言涉及不同分子量的疾病检测用液体活检样本的处理方法。

背景技术：

1、随着体外诊断技术(intro diagnostic)技术应用的普及，用于体外诊断的生物样本的预处理工艺也越来越受到关注。以往，在液体活检样本中存在大量的盐类及基因碎片，对仪器检测产生严重的干扰。因此，降低生物样本中的干扰，提高检测精度，在当前生物检测领域备受瞩目。而且，当前使用的疾病筛查手段中使用的样本处理，往往精度比较低，漏检率较高，这也让很多患者失去早期治疗的机会，从而降低了患者的生存率。例如血液代表了一种方便的临床分析诊断样本。血清代谢物和肽有可能作为从正常状态到疾病状态进展的可靠指标。然而，血清中盐、脂质和高浓度蛋白质的存在会对仪器分析产生不利影响，因为所有这些部分都会干扰仪器对生物诊断标志物的检测。

2、本发明在实验过程中，已评估、优化和标准化许多处理步骤，通过对少量血清等液体活检样本进行特定的前处理，便会得到消除干扰物质，富集和纯化多肽、代谢产物等目标物质的目的，更加适用于高通量和临床环境，从而更适用于精确的疾病筛查。

3、现有技术文献

4、非专利文献

5、machine learning of serum metabolic patterns encodes early-stage lungadenocarcinoma，lin huang et.，nature communications(2020)11：3556

技术实现思路

1、发明要解决的技术问题

2、在液体活检样本中存在大量的盐类及基因碎片，对仪器检测产生严重的干扰。本方法通过使用填料为色谱吸附剂的过滤装置，对样本中的干扰物质进行过滤，对待检测物质进行富集再分离，后续通过检测仪器对洗脱液进行检测，可以筛查出包括肿瘤、冠心病、高血压等慢性疾病。

3、解决问题的手段

4、为了解决上述问题，本发明提供一种光谱法、质谱法测定液体活检样本中蛋白、多肽以及代谢产物的前处理方法，建立一种准确性良好的、样品消耗量低的、高通量检测的一种的非侵袭性诊断疾病的方法，大大降低了样本中干扰物质的浓度，提高了诊断的准确率。

5、具体而言，本发明包含以下实施方式。

6、1、一种样本处理方法，其包括下述步骤：

7、步骤一：将样本与酸化试剂混合，进行酸化；

8、步骤二：使过滤装置的过滤头润湿；

9、步骤三：使步骤二的过滤装置的过滤头吸附步骤一的酸化样本；

10、步骤四：使用冲洗液冲洗步骤三的过滤装置的过滤头；

11、步骤五：使用步骤四的过滤装置的过滤头吸取洗脱液；

12、步骤六：收集洗脱液。

13、2、根据1所述的样本处理方法，其特征在于，所述过滤装置选自固相萃取柱无筛板固相萃取柱、层析柱、微量层析柱、针头过滤器。

14、3、根据2所述的样本处理方法，其特征在于，所述过滤装置中的填料选自c18十八烷基硅胶、c8辛烷基硅烷键合硅胶、c4硅胶键合丁基、c6h5苯基硅烷键合硅胶、cn硅胶键合氰基、nh2硅胶键合氨基以及oh硅胶键合二醇基中的一种。

15、4、根据1～3中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的样本选自血清、尿液、组织液中的任意一种。

16、5、根据1～4中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的酸化试剂选自卤代有机酸溶液。

17、6、根据5所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的酸化试剂为体积浓度0.05％～2％的卤代有机酸的水溶液。

18、7、根据6所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的酸化试剂为体积浓度0.1％的卤代有机酸的水溶液。

19、8、根据1～7中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的酸化试剂选自三氟乙酸、三氟丙酸中的一种以上的酸的溶液。

20、9、根据1～8任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的酸化试剂为三氟乙酸的水溶液。

21、10、根据1～9中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用乙腈水溶液润湿1、2或3次。

22、11、根据10所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中，再使用三氟乙酸水溶液别润湿1、2或3次。

23、12、根据10或11所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用体积浓度30-70％乙腈水溶液。

24、13、根据10～12中任一项～所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用体积浓度40-60％乙腈水溶液。

25、14、根据10～13中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用体积浓度50％乙腈水溶液。

26、15、根据11所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用体积浓度0.05％～0.2％的三氟乙酸溶液。

27、16、根据11或15所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用体积浓度0.08％～0.15％的三氟乙酸溶液。

28、17、根据10、15或16中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用体积浓度0.1％三氟乙酸溶液。

29、18、根据1～17中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤四中的冲洗液包含水、三氟乙酸以及体积浓度为3％～8％的选自乙腈、丙酮、乙醇、异丙醇、甲酸和甲醇中的一种以上的溶剂，其中，三氟乙酸的体积浓度为0.05％～2％。

30、19、根据18所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤四中的冲洗液包含水、三氟乙酸和乙腈。

31、20、根据19所述的样本处理方法，其特征在于，三氟乙酸：乙腈以体积比计为1∶100～1∶20。

32、21、根据19或20所述的样本处理方法，其特征在于，三氟乙酸：乙腈以体积比计为1∶50。

33、22、根据19～21中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，相对于冲洗液的总量，三氟乙酸的体积浓度为0.1％。

34、23、根据19～21中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，相对于冲洗液的总量，乙腈的体积浓度为5％。

35、24、根据1～23中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤五中的洗脱液包含水、三氟乙酸和体积浓度为10％～95％的选自乙腈、丙酮、乙醇、异丙醇、甲酸和甲醇中的一种以上的溶剂。

36、25、根据1～24中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤五中的洗脱液包含水、三氟乙酸和乙腈。

37、26、根据25所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤五的洗脱液中，三氟乙酸：乙腈以体积比计为1∶2000～1∶500。

38、27、根据25或26所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤五的洗脱液中，三氟乙酸：乙腈以体积比计为1∶1000～1∶900。

39、28、根据25～27中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤五中，相对于洗脱液的总量，三氟乙酸的体积浓度为0.05％～0.2％。

40、29、根据25～28中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤五中，相对于洗脱液的总量，三氟乙酸的体积浓度为0.1％。

41、30、根据25～29中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤五中，相对于洗脱液的总量，乙腈的体积浓度为95％。