支承装置的制作方法

1.本公开涉及一种用于生物样品的分析装置，具体是支承装置。


背景技术：

2.由于不同细胞内的不同分析物水平(例如基因和/或蛋白质表达)，被试组织内的细胞在细胞形态和/或功能方面具有差异。细胞在组织内的特定位置 (例如，细胞相对于相邻细胞的位置或细胞相对于组织微环境的位置)可能影响例如细胞的形态、分化、命运、活力、增殖、行为以及信号传导以及与组织中其它细胞的串扰。
3.之前已经使用如下技术研究空间异质性，这些技术仅提供完整组织或部分组织中少量分析物的数据，或提供单个细胞的大量分析物数据，但未能提供有关单个细胞在亲本生物样品(例如，组织样品)中的位置的信息。
4.此外，用于空间分析物数据的成像系统的分辨率和灵敏度本质上是可变的。除了成像设备的布置、各种类型的成像设备和图像采集软件之间的差异之外，这在很大程度上是由于成像系统部件的制造商的可变性。图像质量还受到用户执行的图像采集的改变的影响。当尝试对未知荧光强度的样品进行成像或由不同经验的用户对样品进行成像时，这个问题变得更加明显。
5.此外，在实验室环境中，使用各种处理方案(protocol)来制备用于分析的样品。这些方案可以在试管中、在载物片上、或更普遍地在由基质支承的样品上进行。某些方案在稳定、受控的温度下执行，以确保样品和方案试剂的保真度。其它方案涉及温度循环和其它步骤，其中以受控方式调节样品的温度。为了在方案期间加热样品及其支承基底，可以使用热循环仪、加热板或其它加热装置。作为一个示例，热循环仪可以作为聚合酶链反应方案的一部分用于核酸扩增以及转录和逆转录分析序列。还可以在热循环仪和其它加热装置中对样品进行受控加热，以例如有助于限制性酶消化和快速诊断的温度敏感反应。
6.此外，可以将生物样品放置在固体支承件上以进行分析以识别或表征样品内的分析物，例如dna、rna或其它遗传物质。印刷的引导物可帮助改善样品在固体支承件上的放置。
7.当前用于支承生物样品的方法和装置(例如，在空间分析和/或加热期间) 通常缺乏便携性，不提供进入特定样品区域或孔的通路，和/或不提供用于防止样品区域或井孔之间的交叉污染的气密密封。


技术实现要素：

8.以下公开的实施例包括用于包括样品区域的基底的支承装置以及培养设置在基底的样品区域上的样品的方法。在一些实施例中，本公开的支承装置和方法的区别优点是其构造为为用户提供易用性的一件式装置。例如，一体式设计有助于设置并减少用户在组装装置和基底时花费的时间。在一些实施例中，用户可以容易地将基底插入到所描述的装置中而无需紧固多个部件。在一些实施例中，用户不使用任何工具来协助将基底插入装置
中或协助从装置移除基底。例如，用户可以不需要使用任何类型的紧固件来组装支承装置或将基底固定至支承装置，从而提供更高效的支承生物样品的方式。在其它示例中，本文公开的装置可替代地使用一个或多个紧固件来组装支承装置和/或将基底固定至支承装置。
9.在一些实施例中，本公开的支承装置和方法的另一个区别优点是其设计，该设计通过基底保持件中的多个孔以及衬垫中的多个开口的对准来提供进入基底中的特定样品区域的通路。在一些实施例中，本公开的支承装置和方法的附加优点是当支承装置处于关闭位置时经由衬垫和/或肋或多个肋施加至基底的均匀压力。此外，当基底保持件处于关闭位置时，在衬垫与基底之间形成气密密封和/或气体密封。这种气密密封和/或气体密封可以防止流体在衬垫的多个开口之间传输。气密密封和/或气体密封还可以进一步防止经由例如溶液或流体从第一样品区域泄漏到第二样品区域所导致的生物样品的交叉污染。在又一些实施例中，本公开中描述的支承装置和方法的又一个优点是使基底上的剪切力，例如基底上靠近一个或多个铰链的区段上的剪切力最小化。剪切力的最小化可以防止对基底的损坏(例如，断开或开裂)。
10.本文提供的装置可以为基底表面提供一致且均匀的加热。甚至加热对于确保在基底支承的样品上进行的制备反应根据既定的方案发生并获得预期的结果也可能至关重要。
11.进一步地，如果在没有上盖的情况下加热基底，则将基底(例如，载玻片) 加热至高于室温的温度可能导致在封围基底井孔的上表面上形成冷凝物。冷凝物可能改变基底井孔中反应混合物的组成，抑制制备反应，和/或产生不可预测的结果。本公开中描述的装置可用于通过由衬垫产生的气密密封和/或气体密封来减少或防止在基底井孔中形成冷凝物。
12.某些类型的热循环仪和加热装置是为特定类型的基底(例如多井孔基底) 专门构建的。将其它类型的基底(例如标准显微镜载物片)装载到此类装置中可能导致基底加热不均匀。本公开中描述的装置可用于在并非为此类基底设计的加热装置内支承基底，从而确保对基底进行充分且均匀的热传递。具体地，这些装置可用于适应设计为接受多井孔基底的热循环仪，使得其它类型的基底可以作为样品制备方案的一部分在热循环仪内有效加热。
13.在一些实施例中，本公开的装置允许基底的表面直接接触加热装置(例如，热循环仪)的表面，从而允许遍及基底的均匀加热。即，在一些实施例中，不需要将附加的基底或壳体元件定位在热源和要加热的基底之间。此外，由于本公开的装置允许基底的表面直接接触加热装置(例如，热循环仪)的表面，因此与使用不允许基底和加热装置(例如，热循环仪)之间的表面接触的装置时相比，基底的温度可以更容易地由用户控制并且可以在更短的时间内加热到期望的温度。因此，基底上的样品(例如，生物样品)可以被均匀且受控地加热。
14.在一方面，本公开涉及一种支承装置，包括：基底保持件，包括：覆盖件，该覆盖件包括相对的第一侧壁，该覆盖件构造成接纳衬垫；基部，该基部包括相对的第一侧壁，基部构造成接纳样品基底；以及第一锁定凸片和第二锁定凸片，该第一锁定凸片和第二锁定凸片包括联接于覆盖件和基部中的一个的第一侧壁的可运动凸片和联接于覆盖件和基部中的另一个的第一侧壁的不可运动凸片，第一锁定凸片的长度大于第二锁定凸片的长度，其中，第一锁定凸片沿着衬垫的长度延伸，并且其中，可运动凸片构造成与不可运动凸片接合，以将覆盖件可释放地固定至基部。
15.在一些实施例中，第一锁定凸片的高度约等于衬垫的高度。在一些实施例中，第一锁定凸片的长度约等于衬垫的长度。在一些实施例中，该装置还包括至少一个铰链，并且该至少一个铰链从覆盖件的第二侧壁中的一个延伸至基部的第二侧壁中的一个。在一些实施例中，至少一个铰链是可断开的铰链。在一些实施例中，覆盖件和基部通过至少一个铰链可枢转地连接。
16.在一些实施例中，样品基底搁置在基底保持件的基部的顶部上。在一些实施例中，覆盖件包括从覆盖件的表面延伸的多个肋，并且衬垫通过多个肋在覆盖件的表面上定位对准。在一些实施例中，衬垫定位成使得当样品基底由基底保持件固定并且基底保持件处于关闭位置时，在衬垫和样品基底之间形成气密密封。在一些实施例中，覆盖件包括至少两个孔。
17.在一些实施例中，衬垫包括至少两个开口，其中，该至少两个开口定位成使得当样品基底被基底保持件固定并且该基底保持件处于关闭位置时，上述至少两个孔与至少两个开口对准。在一些实施例中，衬垫构造成当覆盖件处于关闭位置时防止至少两个开口之间的流体传输。在一些实施例中，样品基底是载玻片。在一些实施例中，基部包括围绕基部的周界延伸的唇部，唇部构造成将样品基底保持在基部内。在一些实施例中，覆盖件包括从覆盖件的表面延伸的多个肋，并且当基底保持件处于关闭位置时，样品基底与多个肋中的至少一个接合。在一些实施例中，基部包括当样品基底放置在基部中时暴露样品基底的至少一部分的开口。
18.在一些实施例中，覆盖件的第一侧壁中的每一个与覆盖件的第二侧壁大致正交。在一些实施例中，当基底保持件处于关闭位置时，覆盖件构造成折叠到基部上。在一些实施例中，第一锁定凸片的长度是衬垫长度的至少90％，例如衬垫长度的至少75％、80％、90％、100％、120％或至少150％，衬垫长度的约 75％至约150％。在一些实施例中，第一锁凸定片的长度相对于衬垫的长度为约1:0.9至约1:1.1、约1:0.8至约1:1.2、约1:0.5至约1:1.5。
19.在另一方面，本公开涉及一种支承装置，包括：基底保持件，包括：覆盖件，该覆盖件包括相对的第一侧壁和相对的第二侧壁，该覆盖件构造成接纳衬垫；基部，该基部包括相对的第一侧壁和相对的第二侧壁，基部构造成接纳样品基底，基部和覆盖件的第一侧壁中的每一个都比基部和覆盖件的第二侧壁中的每一个长；以及锁定凸片，该锁定凸片包括可运动凸片和不可运动凸片，可运动凸片和不可运动凸片中的一个联接于覆盖件的第一侧壁中的一个，并且可运动凸片和不可运动凸片中的另一个联接于基部的第一侧壁中的一个，锁定凸片的长度约等于衬垫的长度，其中，锁定凸片沿着衬垫的长度延伸。
20.在一些实施例中，样品基底搁置在基底保持件的基部的顶部上。在一些实施例中，覆盖件包括从覆盖件的表面延伸的多个肋，并且衬垫通过多个肋在覆盖件的表面上定位对准。在一些实施例中，衬垫定位成使得当样品基底由基底保持件固定并且基底保持件处于关闭位置时，在衬垫和样品基底之间形成气密密封。在一些实施例中，覆盖件包括至少两个孔。在一些实施例中，衬垫包括至少两个开口，其中，该至少两个开口定位成使得当样品基底被基底保持件固定并且该基底保持件处于关闭位置时，上述至少两个孔与至少两个开口对准。在一些实施例中，衬垫构造成当基底保持件处于关闭位置时防止至少两个开口之间的流体传输。
21.在一些实施例中，样品基底包括载玻片。在一些实施例中，基部包括围绕基部的周
界延伸的唇部，唇部构造成将样品基底保持在基部内。在一些实施例中，覆盖件包括从覆盖件的表面延伸的多个肋，并且当基底保持件处于关闭位置时，样品基底与多个肋中的至少一个接合。在一些实施例中，基部包括当样品基底放置在基部中时暴露样品基底的至少一部分的开口。在一些实施例中，覆盖件的第一侧壁与覆盖件的第二侧壁大致正交。在一些实施例中，支承装置还包括至少一个可断开的铰链，该可断开的铰链从覆盖件的第二侧壁中的一个延伸至基部的第二侧壁中的一个，使得当基底保持件处于关闭位置时，覆盖件构造成折叠到基部上以将样品基底和衬垫固定在覆盖件和基部之间。在一些实施例中，覆盖件和基部通过从覆盖件的第二侧壁中的一个延伸至基部的第二侧壁中的一个的至少一个铰链而可枢转地连接，使得当基底保持件处于关闭位置时，覆盖件构造成折叠到基部上以将样品基底和衬垫固定在覆盖件和基部之间。在一些实施例中，覆盖件和基部通过至少一个可断开的铰链可枢转地连接。
22.在另一方面，本公开内容涉及一种培养设置在基底的样品区域上的样品的方法，该方法包括：将基底安装在支承装置的基底保持件的基部上，基底包括样品；使基底保持件的覆盖件朝向基底保持件的基部运动，使得基部和覆盖件中的一个上的第一可运动凸片和第二可运动凸片与基部和覆盖件中的另一个上的第一不可运动凸片和第二不可运动凸片接合，第一可运动凸片的长度大于第二可运动凸片的长度，并且沿着由覆盖件接纳的衬垫的长度延伸；将基底和支承装置定位在加热设备上；以及启动加热设备以将热量传递给样品。
23.在一些实施例中，基底包括载玻片。在一些实施例中，当基底保持件联接于支承装置时，至少60％的样品区域被支承装置覆盖。在一些实施例中，第一可运动凸片的高度约等于衬垫的高度。在一些实施例中，第一可运动凸片的长度约等于衬垫的长度。
24.互联网上可获得的和本说明书中提及的所有公开物、专利、专利申请以及信息以引用的方式全部并入本文中，该引用的程度就如同将特定且单独地指明每个单独的公开物、专利、专利申请或信息项目而以引用的方式纳入一样。如果以引用方式纳入的出版物、专利、专利申请和信息项目与说明书中包含的公开内容相矛盾，则说明书旨在取代和/或优先于任何此类矛盾材料。
25.在以范围描述值的情况下，应当理解，该描述包括对此类范围内所有可能的子范围以及落入此类范围内的特定数值的公开，无论是否明确陈述了特定数值或特定子范围。
26.术语“每个”在用于指代项目集合时，旨在标识集合中的单个项目，但不一定指集合中的每个项目，除非另有明确说明，或者除非使用上下文明确另有说明。
27.本文描述了本公开的特征的各种实施例。然而，应当理解的是，这些实施例仅作为示例提供，并且在不脱离本公开的范围的情况下，本领域技术人员可以想到多种变型、改变和替换。还应当理解的是，本文描述的特定实施例的各种替代方案也在本公开的范围内。
附图说明
28.以下附图示出了本公开的特征和优点的某些实施例。这些实施例不旨在以任何方式限制所附权利要求书的范围。在附图中，相似的附图标记指示相似的元件。
29.图1是处于关闭位置的示例性支承装置的立体图。
30.图2是处于打开位置的图1的示例性支承装置的立体图。
31.图3是图1的示例性支承装置的分解图。
32.图4是图1的示例性支承装置以及基底的立体图。
33.图5是处于关闭位置的示例性支承装置的立体图。
具体实施方式
34.i.介绍
35.本公开描述了用于生物样品的空间分析的装置和方法。该部分描述了在本公开内容的后续部分中提及的某些通用术语、分析物、样品类型和制备步骤。
36.1.空间分析
37.组织和细胞可以从任何来源获得。例如，组织和细胞可以从单细胞或多细胞生物体(例如，哺乳动物)获得。从哺乳动物、例如人类获得的组织和细胞通常具有不同的分析物水平(例如基因和/或蛋白质表达)，这会导致细胞形态和/或功能的差异。细胞或细胞子集(例如，相邻细胞和/或非相邻细胞)在组织内的位置可以影响例如细胞的命运、行为、形态以及信号传导以及与组织中其它细胞的串扰。有关哺乳动物组织中不同细胞内分析物水平(基因和/或蛋白质表达)差异的信息还可以帮助医生选择或实施有效的治疗方法，并且可以允许研究人员基于检测到的组织中不同细胞内分析物水平的差异识别和阐明细胞形态和/或单细胞或多细胞生物体(例如，哺乳动物)中的细胞功能。哺乳动物组织中不同细胞内分析物水平的差异还可提供关于组织(例如，健康和患病组织)如何起作用和/或发展的信息。哺乳动物组织中不同细胞内分析物水平的差异还可以提供组织中疾病发病机理的不同机制和组织内治疗性处理的作用机制的信息。哺乳动物组织中不同细胞内分析物水平的差异还可提供关于药物抗性机制及其在哺乳动物组织中的发展的信息。多细胞生物(例如，哺乳动物) 组织中不同细胞内分析物存在或不存在的差异可以提供关于耐药机制及其在多细胞生物组织中的发展的信息。
38.本文提供的支承装置可以与空间分析方法一起使用，该方法以高空间分辨率提供样品内多种多种分析物的大量分析物水平和/或表达数据，例如，同时保持天然空间背景。空间分析方法包括，例如，使用捕获探针，其包括空间条形码(例如，提供关于捕获探针在基底上的位置的信息的核酸序列，该位置与细胞或组织样品(例如，哺乳动物细胞或哺乳动物组织样品)内的位置相关)和能够结合由细胞或组织产生和/或存在于细胞或组织中的分析物(例如，蛋白质和/或核酸)的捕获域。
39.分析物与捕获探针的结合可以使用多种不同的方法来检测，例如核酸测序、荧光团检测、核酸扩增、核酸连接检测和/或核酸切割产物检测。在一些示例中，检测用于将特定空间条形码与由细胞或组织(例如，哺乳动物细胞或组织)中的特定位置处产生和/或存在的特定分析物关联并相关。
40.捕获探针可以例如附连于表面，例如固体阵列、珠子(bead)或盖玻片。在一些示例中，捕获探针不附连于表面。在一些示例中，捕获探针可以被封装在、嵌入在可渗透组合物(例如，本文所述的任何基底)的表面内或层叠在其表面上。例如，捕获探针可以封装或设置在可渗透珠(例如，凝胶珠)内。在一些示例中，捕获探针可以被封装在、嵌入在基底(例如，本文所述的任何示例性基底，比如水凝胶或多孔膜)的表面内或层叠在其表面上。当捕获探针附连于基底，例如载物片的表面时，附连可以是直接的或间接的(例如，经由链接件)。
41.在一些示例中，细胞或包括细胞的组织样品与附连于基底(例如基底的表面)的捕获探针接触，并且细胞或组织样品被透化以允许分析物从细胞中释放出来并与附连于基底的捕获探针混杂。在一些示例中，从细胞释放的分析物被动迁移至基底以与捕获探针混杂(例如，经由重力)。在一些示例中，可以使用多种方法，例如电泳、化学梯度、压力梯度、流体流动或磁场来将从细胞释放的分析物主动引导至附连于基底的捕获探针。
42.在pct/us2019/065100中描述了支承装置的非限制性方面，其全部内容以引用的方式纳入本文并可在本文中以任何组合使用。本文描述了支承装置的其它非限制性方面。
43.(a)一般术语
44.(i)生物样品
45.本公开中描述的装置和方法可用于支承构造成接纳一种或多种生物样品的基底。如本文所使用的，“生物样品”是可从被试获得用于使用多种技术中的任一种进行分析的样品，这些技术包括但不限于活检、手术和激光捕获显微术 (lcm)，并且通常包括来自被试的细胞和/或其它生物材料，例如悬浮的生物材料或作为来自组织样品的组织切片。除了下面描述的被试，生物样品可以从非哺乳动物生物体(例如，植物、昆虫、蛛形纲动物、线虫(例如，秀丽隐杆线虫)、真菌、两栖动物或鱼(例如，斑马鱼))获得。生物样品可以从以下来源获得：原核生物，如细菌，例如大肠杆菌、葡萄球菌或肺炎支原体；古生菌；病毒，比如丙型肝炎病毒或人类免疫缺陷病毒；或类病毒。生物样品可以从真核生物获得，例如源自患者的类器官(pdo)或源自患者的异种移植物 (pdx)。生物样品可以包括类器官，这是在体外产生的器官的微型化和简化版本，可在三个维度上示出逼真的显微解剖结构。类器官可以从组织的一种或多种细胞、胚胎干细胞和/或诱导多能干细胞产生，由于它们的自我更新和分化能力，它们可以在三维培养中自我组织。在一些实施例中，类器官是脑类器官、肠类器官、胃类器官、舌类器官、甲状腺类器官、胸腺类器官、睾丸类器官、肝类器官、胰腺类器官、上皮类器官、肺类器官、肾脏类器官、原肠胚、心脏类器官或视网膜类器官。可以从中获得生物样品的被试可以是健康或无症状的个体、患有或疑似患有疾病(例如，癌症)或易患疾病的个体和/或需要治疗或疑似需要治疗的个体。
46.生物样品可以来自本文提及的被试或生物体的同质培养物或群体，或者来自例如群落或生态系统中的几种不同生物体的集合。
47.生物样品可以包括一种或多种患病细胞。患病细胞可以具有改变的代谢特性、基因表达、蛋白质表达和/或形态特征。疾病的示例包括炎症性疾病、代谢性疾病、神经系统疾病和癌症。癌细胞可以取自实体瘤、恶性血液病、细胞系，或作为循环肿瘤细胞获得。
48.生物样品还可以包括胎儿细胞。例如，可以执行诸如羊膜穿刺术之类的程序以从母体循环中获得胎儿细胞样品。胎儿细胞的序列可以用于识别多种遗传疾病中的任何一种，包括例如非整倍体，比如唐氏综合征、爱德华兹综合征和帕陶综合征。进一步地，胎儿细胞的细胞表面特征可以用于识别多种病症或疾病中的任何一种。
49.生物样品还可以包括免疫细胞。对包括基因组、蛋白质组和细胞表面特征的这些细胞的免疫组库的序列分析可以提供丰富的信息，以有助于了解免疫系统的状态和功能。例如，在自体干细胞移植后确定多发性骨髓瘤(mm)患者的微小残留病(mrd)状态(例如阴性或阳性)被认为是mm患者中的mrd 的预测因子(参见，例如，美国专利申请公开第2018/0156784号，其全部内容以引用的方式纳入本文)。
50.生物样品中免疫细胞的示例包括但不限于b细胞、t细胞(例如细胞毒性 t细胞、自然杀伤t细胞、调节性t细胞和t辅助细胞)、自然杀伤细胞、细胞因子诱导的杀伤(cik)细胞、诸如粒细胞(嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞/超节段中性粒细胞)之类的髓细胞、单核细胞/巨噬细胞、肥大细胞、血小板/巨核细胞和树突细胞。
51.生物样品可以包括任何数量的大分子，例如细胞大分子和细胞器(例如，线粒体和细胞核)。生物样品可以是核酸样品和/或蛋白质样品。生物样品可以是碳水化合物样品或脂质样品。生物样品可以作为组织样品获得，比如组织切片、活检、核心活检、针吸物或细针吸物。样品可以是流体样品，比如血液样品、尿液样品或唾液样品。样品可以是皮肤样品、结肠样品、面颊拭子、组织学样品、组织病理学样品、血浆或血清样品、肿瘤样品、活细胞、培养细胞、临床样品例如全血制品或血液来源的制品、血细胞或培养的组织或细胞，包括细胞悬液。
52.无细胞生物样品可以包括细胞外多核苷酸。细胞外多核苷酸可以从身体样品中分离，例如血液、血浆、血清、尿液、唾液、黏膜排泄物、痰、粪便和眼泪。生物样品可以包括感兴趣的分析物，或多于一种感兴趣的分析物。
53.(ii)被试
54.如本文所使用的，术语“被试”是诸如哺乳动物(例如，人类或非人类猿) 或鸟类(例如，鸟类)之类的动物，或诸如植物之类的其它生物体。被试的示例包括但不限于哺乳动物，比如啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、豚鼠、有蹄类动物、马、绵羊、猪、山羊、牛、猫、狗、灵长类动物(即人类或非人类灵长类动物)；植物，比如拟南芥、玉米、高粱、燕麦、小麦、水稻、油菜或大豆；藻类，比如莱茵衣藻；线虫，比如秀丽隐杆线虫；昆虫，比如黑腹果蝇、蚊子、果蝇或蜜蜂；蛛形纲动物，比如蜘蛛；鱼，比如斑马鱼；爬行动物；两栖动物，比如青蛙或非洲爪蟾；盘基网柄菌；真菌，比如卡氏肺孢子菌、红鳍东方鲀、酵母、酿酒酵母或粟酒裂殖酵母；或恶性疟原虫。
55.(iii)基底附连
56.在一些实施例中，生物样品可以附连于基底。以下详细描述适用于该目的的基底的示例。生物样品的附连可以是不可逆的或可逆的，这取决于样品的性质和分析方法中的后续步骤。
57.在某些实施例中，通过将合适的聚合物涂层施加至基底并使样品与聚合物涂层接触，样品可以可逆地附连于基底。然后可以使用至少部分溶解聚合物涂层的有机溶剂将样品从基底分离。水凝胶是适用于此目的的聚合物的示例。
58.更一般地，在一些实施例中，基底可以用一种或多种物质涂覆或功能化以有助于样品与基底的附连。可以用于涂覆或功能化基底的合适物质包括但不限于凝集素、聚赖氨酸、抗体和多糖。
59.(iv)基底
60.对于使用基底的分析方法(例如，基于空间阵列的分析方法)，基底起到将捕获探针直接或间接附连至阵列特征的支承件的作用。此外，在一些实施例中，基底(例如，相同的基底或不同的基底)可以用于为生物样品，特别是例如薄组织切片提供支承。因此，如本文所使用的，“基底”是不溶于水性液体并且允许将生物样品、分析物、特征和/或捕获探针定位在基底上的支承件。
61.此外，本文所用的“基底”，当前面没有修饰语“化学”时，是指具有至少一个表面的构件，该表面通常起到为生物样品、分析物和/或可用于各种分析方法的任何其它化学和/或物理部分、试剂和结构提供物理支承的作用。基底可以由多种固体材料、凝胶基底料、胶体材料、半固体材料(例如，至少部分交联的材料)、完全或部分固化的材料以及经历相变或转变以提供物理支承的材料。可以用于本文所述的方法和装置中的基底的示例包括但不限于载物片(例如由各种玻璃形成的载物片、由各种聚合物形成的载物片)、水凝胶、层和/或薄膜、膜(例如、多孔膜)、晶片、板或它们的组合。在一些实施例中，如下文将进一步详细讨论的，基底能够可选地包括功能元件，比如凹槽、突出结构、微流体元件(例如，通道、储存器、电极、阀、密封件)和各种标记。
62.1)基底属性
63.基底通常可以具有可以由本文公开的装置容纳的任何合适的形式或格式。例如，基底可以是平坦的、弯曲的，例如朝向生物样品(例如，组织样品)和基底之间发生相互作用的区段凸出地弯曲或凹入地弯曲。在一些实施例中，基底是平坦的，例如平面、芯片(chip)或载物片。基底可以在基底内包含一个或多个图案化表面(例如，通道、井孔、突起、脊部、草痕状等)。
64.基底可以是任何期望的形状。例如，基底典型地可以是薄的、平坦的形状 (例如，正方形或矩形)。在一些实施例中，基底结构具有圆角(例如，为了增加安全性或坚固性)。在一些实施例中，基底结构具有一个或多个截角(例如，用于与载物片夹具或十字工作台一起使用)。在一些实施例中，当基底结构是平坦的时，基底结构可以是任何合适类型的具有平坦表面的支承件(例如，芯片或载物片，比如显微镜载物片)。
65.基底能够可选地包括各种结构，比如但不限于突起、脊部和通道。可以对基板进行微图案化以限制侧向扩散(例如，防止空间条形码重叠)。可以对用此类结构修改的基底进行修改，以允许分析物、特征(例如，沉积条形码的特定位置、珠子)或单独部位处的探针的关联。例如，其中用各种结构修改基底的部位可以是与其它部位连续的(例如，当装置处于关闭位置时，这些部位可以位于基底的被衬垫开口中的一个封围的区段内)或不连续的(例如，当支承装置处于关闭位置时，第一部位可以位于基底的被第一衬垫开口封围的第一区段内，而第二部位可以位于基底的被第二衬垫封围的第二区段内)。
66.在一些实施例中，可以修改基底的表面，使得形成仅可以具有或容纳单个特征的离散部位。在一些实施例中，可以修改基底的表面，使得特征位于随机部位处(例如，当支承装置处于关闭位置时，基底的由衬垫开口封围的区段内的随机部位)。
67.在一些实施例中，使用诸如(但不限于)冲压、微蚀刻或模制技术之类的技术来修改基底的表面以包含一个或多个井孔。在基底包括一个或多个井孔的一些实施例中，基底可以是凹面载物片或空腔载物片。例如，可以通过基底表面上的一个或多个浅的凹陷部形成井孔。在一些实施例中，当基底包括一个或多个井孔时，可以通过将盒(例如，包含一个或多个腔室的盒)附连至基底结构的表面来形成井孔。
68.在一些实施例中，基底的结构(例如，井孔或特征)可以各自承载一个或多个不同的捕获探针。附连于每个结构的不同捕获探针可以根据结构在基底表面中或表面上的位置来识别。示例性基底包括阵列，其中单独的结构位于基底上，包括例如在基底上具有容纳特征的井孔或位置的那些。
69.在基底被修改为包含一种或多种结构，包括但不限于井孔、突起、脊、特征或标记的一些实施例中，该结构可以包括物理地改变的部位。例如，用各种结构改性的基底可以包括物理特性，包括但不限于物理构造、磁力或压缩力、化学功能化部位、化学改变部位和/或静电改变部位。在基底被修改为包含各种结构，包括但不限于井孔、突起、脊、特征或标记的一些实施例中，该结构以图案型式施加。或者，结构可以随机分布。
70.基底(例如，或阵列上的珠子或特征)可以包括数万至数十万或数百万个单独的寡核苷酸分子(例如，至少约10,000、50,000、100,000、500,000、1,000,000、 10,000,000、100,000,000、1,000,000,000或10,000,000,000个寡核苷酸分子)。
71.在一些实施例中，基底包括基底表面上的一个或多个标记，例如以提供用于将空间信息与感兴趣的分析物的表征相关联的指导。例如，基底可以用线网格标记(例如，以允许容易地估计在放大下看到的物体的尺寸和/或提供用于计数物体的参考区段)。在一些实施例中，可以在基底上包括基准标记。可以使用包括但不限于印刷、喷砂和沉积在表面上的技术来制作此类标记。
72.多种不同的基底可用于上述目的。通常，基底可以是任何合适的支承材料，其可以被所公开的装置容纳。示例性基底包括但不限于玻璃、改性和/或功能化玻璃、水凝胶、薄膜、膜、塑料(包括例如丙烯酸树脂、聚苯乙烯、苯乙烯和其他材料的共聚物、聚丙烯、聚乙烯、聚丁烯、聚氨酯、特氟龙
tm
、环烯烃、聚酰亚胺等)、尼龙、陶瓷、树脂、日本瑞翁(zeonor)、包括硅和改性硅的二氧化硅或二氧化硅基底料、碳、金属、无机玻璃、光纤束和聚合物，如聚苯乙烯、环烯烃共聚物(coc)、环烯烃聚合物(cop)、聚丙烯、聚碳酸亚乙酯或其组合。
73.在以上讨论的基底材料的示例中，聚苯乙烯是适合结合带负电荷的大分子的疏水材料，因为它通常含有很少的亲水基团。对于固定在载玻片上的核酸，通过增加玻璃表面的疏水性，可以增加核酸的固定化。这种增强可以允许相对更加紧密塞填的构成(例如，提供改进的特异性和分辨率)。
74.2)导电基底
75.在一些实施例中，基底可以是导电基底。如本文所述产生的导电基底(例如，电泳相容阵列)可用于分析物的空间检测。
76.在一些实施例中，导电基底可以包括玻璃(例如，载玻片)，其已涂覆有物质或以其它方式修改以赋予玻璃导电特性。在一些实施例中，载玻片可以涂覆有导电涂层。在一些实施例中，导电涂层包括氧化锡(to)或氧化铟锡(ito)。在一些实施例中，导电涂层包括透明导电氧化物(tco)。在一些实施例中，导电涂层包括掺铝氧化锌(azo)。在一些实施例中，导电涂层包括掺氟氧化锡(fto)。
77.在一些实施例中，可以在导电基底(例如，本文所述的任何导电基底)上产生用寡核苷酸(例如，捕获探针)点样或印刷的阵列。例如，本文所述的阵列可以与活性分析物捕获方法(例如，包括但不限于电泳捕获方法)兼容。在一些实施例中，导电基底是多孔介质。可以用于采用活性分析物捕获的方法中的多孔介质的非限制性示例包括硝化纤维素或尼龙膜。在一些实施例中，可以用于本文所述的采用活性分析物捕获的方法中的多孔介质包括纸。在一些实施例中，寡核苷酸可以印刷在纸基底上。在一些实施例中，印刷的寡核苷酸可以与基底相互作用(例如，与纸的纤维相互作用)。在一些实施例中，印刷的寡核苷酸可以共价地结合基底(例如，结合到纸的纤维)。在一些实施例中，分子前体溶液中的寡核苷酸可印
刷在导电基底(例如，纸)上。在一些实施例中，分子前体溶液可以聚合，从而在导电基底(例如，纸)上产生凝胶垫。在一些实施例中，分子前体溶液可以通过光聚合(例如，光固化)。在一些实施例中，可以将含有寡核苷酸(例如，条形码化的寡核苷酸，比如捕获探针)的凝胶珠印刷在导电基底(例如，纸)上。在一些实施例中，印刷的寡核苷酸可以共价附连到凝胶基质中。
78.3)涂层
79.在一些实施例中，基底的表面可以涂覆有细胞许可涂层，以允许活细胞的粘附。“细胞许可涂层”是允许或帮助细胞在基底上维持细胞活力(例如，保持存活)的涂层。例如，细胞许可涂层可以增强细胞附连、细胞生长和/或细胞分化，例如，细胞许可涂层可以向活细胞提供营养。细胞许可涂层可以包括生物材料和/或合成材料。细胞许可涂层的非限制性示例包括以一种或多种细胞外基质(ecm)成分(例如，蛋白多糖和纤维蛋白，比如胶原蛋白、弹性蛋白、纤连蛋白和层粘连蛋白)、聚赖氨酸、聚(l)-鸟氨酸和/或生物相容性硅树脂(例如，)为特征的涂层。例如，包括一种或多种细胞外基质成分的细胞许可涂层可以包括i型胶原蛋白、ii型胶原蛋白、iv型胶原蛋白、弹性蛋白、纤维蛋白、层粘连蛋白和/或玻璃纤维蛋白。在一些实施例中，细胞许可涂层包括从engelbreth-holm-swarm(ehs)小鼠肉瘤中提取的溶解基底膜制剂 (如)。在一些实施例中，细胞许可涂层包括包括胶原蛋白。细胞许可涂层可用于在空间条码阵列上培养粘附细胞，或在与空间条码阵列接触时保持组织样品或切片的细胞活力。
80.在一些实施例中，基底涂覆有表面处理剂，比如聚(l)-赖氨酸。附加地或替代地，基底可以通过硅烷化处理，例如，用环氧硅烷、氨基硅烷和/或用聚丙烯酰胺处理。
81.在一些实施例中，对基底进行处理，以尽量减少或降低特征内部或之间的非特异性分析物混杂。例如，处理可以包括用对非特异性混杂形成物理屏障的水凝胶、薄膜和/或膜涂覆基底。可以使用任何合适的水凝胶。例如，可以使用根据美国专利第6,391,937号、第9,512,422号和第9,889,422号以及美国专利申请公布第u.s.2017/0253918号和第u.s.2018/0052081号中提出的方法制备的水凝胶矩阵。上述每篇文献的全部内容均以引用的形式纳入本文。
82.处理可以包括添加具有反应性或能够被激活的官能团，使其在施加刺激后变得具有反应性(例如，光反应性官能团)。处理可以包括用具有一种或多种物理特性(例如，机械、电、磁和/或热)的聚合物进行处理，以尽量减少非特异性结合(例如，在某些位置激活基底以允许在这些位置进行分析物混杂)。
[0083]“可移除涂层”是指在应用释放剂后可从基底的表面移除的涂层。在一些实施例中，可移除涂层包括本文所述的水凝胶，例如，包括多肽基底料的水凝胶。具有多肽基底料的水凝胶的非限制性示例包括以蜘蛛丝和人类肌肉l型钙通道的跨膜段相结合为特征的合成肽基底料(例如，)、一种含有重复的精氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-丙氨酸序列(radaradarada)的两亲性16 残基肽(例如，)、eak16(aeaeakakaeaeakak)、 kld12(kldlkldlkldl)、以及pgmatrix
tm
。
[0084]
在一些实施例中，可移除涂层中的水凝胶是刺激反应性水凝胶。刺激反应性水凝胶可以在应用一个或多个外部触发器(例如，释放剂)时发生凝胶到溶液和/或凝胶到固体
的转变。参见willner的acc.chem.res.(化学研究述评) 50:657-658,2017，该文献全文以引用的方式纳入本文。刺激反应性水凝胶的非限制性示例包括热反应性水凝胶、ph反应性水凝胶、光反应性水凝胶、氧化还原反应性水凝胶、分析物反应性水凝胶或其组合。在一些实施例中，刺激反应性水凝胶可以是多刺激反应性水凝胶。
[0085]“释放剂”或“外部触发器”是指当释放剂应用于可移除涂层时，允许从基底移除可移除涂层的一种制剂。外部触发器或释放剂可以包括物理触发器，如热、磁、超声波、电化学和/或光刺激，以及化学触发器，比如ph值、氧化还原反应、超分子复合物和/或生物催化驱动反应。例如，参见echeverria等人的 gels(2018),4454:doi:10.3390/gels4020054，该文献全文以引用的方式纳入本文。“释放剂”或“外部触发器”的类型可以取决于可移除涂层的类型。例如，具有氧化还原反应水凝胶的可移除涂层可以在应用包括诸如二硫苏糖醇(dtt)之类的还原剂的释放剂时被移除。作为另一个示例，ph反应性水凝胶可以在施加改变ph值的释放剂时被移除。在一些实施例中，生物样品可以被限制在特定的区域或区段。例如，生物样品可以固定于载玻片以及位于生物样品上的腔室、衬垫或笼架，以充当生物样品存放在其中的容纳区域或框架。
[0086]
序列id编号：7ggtgactctagataacct
[0087]
2.附加的支承装置实施例
[0088]
在一些实施例中，支承装置可以是用于加热基底的系统(例如，如 pct/us2019/065100中所述的系统3102，其全文以引用的方式纳入本文)的一部分，其还可以包括板。该板可以构造成由加热装置(例如，热循环器)接纳，并在加热装置和支承装置之间提供热传递。支承装置(例如pct/us2019/065100 中所述的基底保持件3150)可以保持一个或多个基底(例如一个或多个载玻片)，并且能够可移除地联接于板，以有助于热量从板传递至一个或多个基底。该支承装置可以包括底部构件和顶部构件。在一些实施例中，基底装置还可以包括载物片。在一些实施例中，支承装置可以包括定位在支承装置内部的衬垫。在一些实施例中，支承装置可以包括用于联接底部构件和顶部构件的接合机构 (例如，螺钉)。
[0089]
在一些实施例中，支承装置可以是单件部件(例如，如pct/us2019/065100 中所述的基底保持件4400)，其接纳衬垫和基底。在一些实施例中，支承装置可以包括一个或多个紧固件(比如pct/us2019/065100中所述的侧部安装的压力闭锁件4410)，用于基底的卡扣接合。在一些实施例中，支承装置还可以包括一个或多个凸片(例如，如pct/us2019/065100中所述的第一凸片4412a和第二凸片4412b)，这些凸片构造成接合基底。支承装置可以包括限定多个孔的底表面，这些孔构造成与衬垫的多个孔对准。
[0090]
在一些实施例中，支承装置可以包括顶部部件和底部部件，它们经由从底部部件的侧壁延伸的一个或多个铰链(例如，如pct/us2019/065100中所述的铰链7360)连接。支承装置还可以包括从顶部部件的侧壁突出的一个或多个接合特征(例如，如pct/us2019/06510中所述的第一槽口7358a和第二槽口 7358b)，这些特征构造成与从底部部件的侧壁突出的一个或多个凸片接合，从而实现支承装置的关闭。
[0091]
ii.支承装置
[0092]
各实施例可提供以下优点中的一个或多个。
[0093]
本文提供的装置可以用于确保在样品制备和/或分析方案期间，基底和任何支承在基底表面的样品和/或试剂的温度得到均匀和一致的控制。在此类方案期间，不均匀的加
热会导致样品制备失败。进一步地，即使在样品加热相对均匀的情况下，接触样品的冷凝物也可能损害作为方案的一部分或以其它方式影响所发生的化学反应的某些反应。在各种实施例中，所述装置提供了对(例如，在载物片盒或基底保持件中的)基底的多个表面的加热，并且可以包括有助于从加热元件到基底的热传递以及可以减少或防止在基底的某些区域(例如，在样品井孔中或基底表面的区域上)形成冷凝物的特征。此外，本文提供的装置可以缓解来自基底上的不同位置的样品和/或试剂的交叉污染。例如，该装置的衬垫可以提供离散的生物样品区段和从一个井孔到下一个井孔的蒸气屏障。进一步地，衬垫可以阻碍试剂溢出或从一个井孔流向另一个井孔。在一些实施例中，本文提供的装置包括锁定件，当支承装置处于关闭位置时，该锁定件有助于将衬垫固定在位。
[0094]
一般来说，参照图1-4，示例性支持装置的实施例可以包括基底和基底保持件。基底保持件可以包括衬垫、覆盖件和基部。在一些实施例中，覆盖件和基部是一体连接的(例如，基底保持件是单部件设计)。在一些实施例中，基底保持件是使用注射模制技术制造的。用于制造本公开的支承装置的非限制性材料包括聚丙烯均聚物。在一些实施例中，基底保持件是一次性的。在一些实施例中，基底保持件是可重复使用的。
[0095]
在一些实施例中，基底保持件接纳基底，比如载物片，例如载玻片。在一些实施例中，基底保持件包括附连机构，用于将基底联接和/或固定至基底保持件。覆盖件可以构造成接纳衬垫，或者可以与衬垫共同模制。覆盖件可以包括从覆盖件的表面延伸出来的多个肋。此外，基部可以构造成接纳基底。在一些示例中，支承装置还可以包括至少一对锁定凸片，其中每个锁定凸片包括联接于覆盖件的第一侧壁的可运动凸片以及联接于基部的第一侧壁的不可运动凸片。在其它示例中，每个锁定凸片包括联接于基部的第一侧壁的可运动凸片，以及联接于覆盖件的第一侧壁的不可运动凸片。可运动凸片可以构造成与不可运动凸片接合，以将覆盖件可释放地固定至基部。在一些实施例中，这对锁定凸片的第一锁定凸片的长度大于这对锁定凸片的第二锁定凸片的长度。
[0096]
在一些示例中，覆盖件和基部通过至少一个铰链可枢转地连接在一起。在一些实施例中，铰链可以是活动铰链。在一些实施例中，覆盖件和基部通过两个或多个铰链可枢转地连接在一起。在一些实施例中，至少一个铰链从覆盖件的第二侧壁延伸至基部的第二侧壁。例如，当基底保持件处于关闭位置时，覆盖件可以构造成折叠到基部上，以在覆盖件与基部之间固定衬垫和基底。在一些实施例中，可枢转的连接可以在任何阶段被断开，从而使覆盖件和基部之间不再有可枢转的连接。
[0097]
此外，支承装置可以包括构造成接纳样品的基底(例如，载玻片)。在一些实施例中，样品可以是生物样品。在一些实施例中，样品可以是本公开中其它地方限定的任何生物样品。该基底包括第一表面和第二表面。在一些示例中，基底的第一表面构造成接纳样品。在一些实施例中，基底包括样品区域。在一些示例中，样品区域接纳一个或多个样品。
[0098]
图1示出了处于关闭位置的支承装置100。支承装置100包括基底保持件 101和基底110。具体地，图1示出了具有基部134和覆盖件136的基底保持件101。基部134和覆盖件136具有第一对侧壁103和第二对侧壁105。第一侧壁103中的每一个可以比第二侧壁105中的每一个长。因此，基部134和覆盖件136具有基本上矩形的形状。在一些实施例中，基部134和覆盖件136具有圆形、方形、三角形或任何其它合适的形状。在一些实施例中，覆盖件136 的第一侧壁103与覆盖件136的第二侧壁105大致正交。例如，覆盖件136的第一侧壁103和第
二侧壁105可以形成85至95度之间的角度。在一些实施例中，基部134的第一侧壁103与基部134的第二侧壁105大致正交。例如，基部134的第一侧壁103和第二侧壁105可以形成85至95度之间的角度。覆盖件136包括顶表面102，通过顶表面限定多个孔104。在一些实施例中，多个孔104可以限定成使得当在处于关闭位置的衬垫定位在覆盖件136和基部134 之间时，多个孔与衬垫的多个开口对准。在一些实施例中，多个孔104可以限定成使得，当支承装置处于关闭位置时，多个孔与基底的样品区域(例如，载物片)对准。在一些实施例中，多个孔104可以为用户提供通向基底(例如，基底上的样品区域)的通路，以例如当支承装置处于关闭位置时查看样品区域上的样品和/或将溶液直接递送到样品区域上的样品或基底的表面上。
[0099]
基底保持件101可以包括至少一对锁定凸片107，锁定凸片构造成用覆盖件136可释放地固定、关闭、锁定、紧固和/或接合基部134。每个锁定凸片107 可以包括联接于覆盖件136的第一侧壁103的可运动凸片106和联接于基部 134的第一侧壁103的不可运动凸片108。在一些实施例中，可运动凸片106 构造成与不可运动凸片108接合，以将覆盖件136可释放地固定至基部134。在替代示例中，可运动凸片106可联接于覆盖件136的第二侧壁105，不可运动凸片108可联接于基部134的第二侧壁105。在一些实施例中，一个或多个锁定凸片107可联接于第一侧壁103中的一个或两个，和/或一个或多个锁定凸片107可联接于第二侧壁105中的一个或两个。在一些实施例中，可运动凸片 106和覆盖件136是一体连结的。例如，可运动凸片106和覆盖件136在模制、例如注射模制过程中可以形成为单个部件。在一些实施例中，不可运动凸片108 和基部134是一体连结的。例如，不可运动凸片108和基部134在模制、例如在注射模制过程中可以形成为单个部件。在一些示例中，基底保持件101可以包括多个锁定凸片107(例如，至少2、3、4或5对锁定凸片107)。在一些实施例中，基底保持件101包括一个锁定凸片。在一些实施例中，可以使用允许基部134与覆盖件136可释放地接合的任何类型的紧固件，比如例如，磁力紧固件、卡扣、钩环紧固件、按压式闭锁件、螺钉、按压式连接件(例如，杠杆、夹子或夹持件)，或其任何组合。在一些实施例中，基底保持件101还可以包括一个或多个弹簧加载的紧固件。
[0100]
基底保持件101可以包括锁定凸片158，该锁定凸片构造成用覆盖件136 可释放地固定、关闭、锁定、紧固和/或接合基部134。锁定凸片158可以包括联接于覆盖件136的第一侧壁103的可运动凸片162和联接于基部134的第一侧壁103的不可运动凸片160。在一些实施例中，可运动凸片162构造成与不可运动凸片160接合，以将覆盖件136可释放地固定至基部134。在替代示例中，可运动凸片162可联接于覆盖件136的第二侧壁105，不可运动凸片160 可联接于基部134的第二侧壁105。在一些实施例中，一个或多个锁定凸片158 可联接于第一侧壁103中的一个或两个，和/或一个或多个锁定凸片158可联接于第二侧壁105中的一个或两个。在一些实施例中，可运动凸片162和覆盖件 136是一体连结的。在一些实施例中，不可运动凸片160和基部134是一体连结的。在一些示例中，基底保持件101可以包括多个锁定凸片158(例如，至少2、3、4或5个锁定凸片158)。在一些实施例中，基底保持件101包括一个锁定凸片158和一个锁定凸片107。在一些实施例中，基底保持件101包括一个锁定凸片158和一对锁定凸片107。在一些实施例中，基底保持件101包括一个锁定凸片158和三个锁定凸片107。在一些实施例中，基底保持件101 包括一个锁定凸片158和四个锁定凸片107。
[0101]
如图1所示，基底110的表面通过基底保持件101的多个孔104暴露出来。多个孔104由覆盖件136的顶表面102限定。当支承装置100处于关闭位置时，多个孔104与衬垫的多个开口对准。
[0102]
图2是处于打开位置的图1的基底保持件101的立体图。基底保持件201 包括锁定凸片258，该锁定凸片包括具有长度lm的可运动凸片262和具有长度 ln的不可运动凸片260。基底保持件201包括一对锁定凸片207，每个锁定凸片包括具有长度l’m
的可运动凸片206和具有长度l’n
的不可运动凸片208。锁定凸片258的长度可以大于上述一对锁定凸片207的长度。例如，可运动凸片262 的长度lm可以大于可运动凸片206的长度l’m
。在一些实施例中，可运动凸片 262的长度lm可以比可运动凸片206的长度l’m
长约40％。在一些实施例中，可运动凸片262的长度lm可以比可运动凸片206的长度l’m
至少长约10％至约80％(例如，在约10％至20％、20％至30％、30％至40％、40％至50％、50％至60％、60％至70％、或70％至80％之间)。不可运动凸片260的长度ln可以大于不可运动凸片208的长度l’n
。在一些实施例中，不可运动凸片260的长度 ln可以比不可运动凸片208的长度l’n
长约40％。在一些实施例中，不可运动凸片260的长度ln可以比不可运动凸片208的长度l’n
至少长约10％至约80％(例如，在约10％至20％、20％至30％、30％至40％、40％至50％、50％至60％、 60％至70％、或70％至80％之间)。
[0103]
在一些实施例中，可运动凸片262的长度lm约等于衬垫224的长度lg或衬垫224的长度lg。在一些实施例中，可运动凸片262的长度lm可以比衬垫 224的长度lg长约5％。在一些实施例中，可运动凸片262的长度lm可以比衬垫224的长度lg至少长约5％至约20％(例如，约5％至10％、10％至15％、15％至20％之间)。在一些实施例中，可运动凸片262的长度lm与衬垫224的长度 lg对准。在一些实施例中，可运动凸片262的长度lm是衬垫224的长度lg的至少90％，例如衬垫224的长度lg的至少75％、80％、90％、100％、120％或至少150％，衬垫224的长度lg的约75％至约150％。在一些实施例中，可运动凸片262的长度lm相对于衬垫224的长度lg为约1:0.9至约1:1.1、约1:0.8至约1:1.2、约1:0.5至约1:1.5。当基底保持件201处于关闭位置时，可运动凸片262 的长度lm可以帮助固定衬垫224，使得沿着衬垫224的长度lg将力施加到衬垫壁209上。在一些实施例中，可运动凸片262围绕衬垫224居中(例如，沿着衬垫224的长度lm居中)。与锁定凸片207的长度相比，锁定凸片258的相对较大的长度可以使施加到衬垫壁209上的力更容易分布在衬垫224的整个长度上。此外，锁定凸片258的相对较大的长度可以使用户更容易操纵锁定凸片258 (例如，用于锁定或释放锁定凸片258)。
[0104]
在图2中，覆盖件236和基部234通过一对铰链216可枢转地连接，铰链从覆盖件236的第二侧壁205延伸至基部234的第二侧壁205。在一些实施例中，不存在铰链。在一些实施例中，这对铰链可以是一对活动铰链。在一些实施例中，覆盖件和基部通过至少一个铰链可枢转地连接。在一些实施例中，一个或多个铰链可以从覆盖件的第二侧壁延伸至基部的第二侧壁。在一些实施例中，覆盖件和基部可以通过一个铰链可枢转地连接，该铰链的长度跨越它所延伸出来的一侧的长度的大约50％或更多。在一些实施例中，覆盖件和基部通过若干铰链可枢转地连接在一起。在一些实施例中，如果存在铰链，则铰链是可断开的，使得一旦断开一个或多个铰链，覆盖件和基部就可分离。
[0105]
图2示出了处于打开位置的基底保持件201，该基底保持件的覆盖件236 处于远离基部234的延伸、展开位置。在一些实施例中，如图2所示，当覆盖件236相对于基部234呈约
180
°
时，基底保持件201处于打开位置。在一些实施例中，当覆盖件236相对于基部234呈约10
°
至约170
°
的角度时，基底保持件201处于打开位置。
[0106]
覆盖件236具有底表面232，多个肋218可以从底表面垂直延伸。在一些实施例中，覆盖件236构造成接纳衬垫224。在一些实施例中，衬垫224可以承受至少约10％的压缩变形(compression set)。在一些实施例中，衬垫224 可以承受约15％或更多的压缩变形。在一些实施例中，衬垫224可以承受约 1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、40％、60％、 70％或更多的压缩变形。如本文所使用的，压缩变形表示为暴露在恒定压缩力下后原始试样厚度的百分比。在一些实施例中，衬垫224与诸如例如覆盖件236 之类的基底保持件的一部分共同模制。在一些实施例中，衬垫224可以承受导致衬垫高度hg变化约0.5毫米(mm)的压缩力。在一些实施例中，衬垫224 可以承受导致衬垫高度hg变化约0.1mm、0.2mm、0.3mm、0.4mm、0.5mm、 0.6mm、0.7mm、0.8mm、0.9mm、1mm或更多的压缩力。在一些实施例中，衬垫224是由热塑性聚合物构成的，比如热塑性弹性体在一些实施例中，衬垫 224可移除地粘附至覆盖件236的底表面232。
[0107]
衬垫224可以包括多个开口238。在一些实施例中，多个开口238可以与由覆盖件236的表面限定的多个孔104对准。例如，在一些实施例中，多个开口238定位成使得当基底110(如图1所示)搁置在基底保持件201的顶部上，并且基底保持件201处于关闭位置时，多个孔104与多个开口238对准。在一些实施例中，当基底保持件201处于关闭位置时，衬垫224在基底210上施加压力。多个肋218可以构造成支承基底210和衬垫224。在一些实施例中，衬垫224通过多个肋在覆盖件236的表面上定位对准。在一些实施例中，衬垫224 定位成使得当基底224搁置在基底保持件201的顶部上并且基底保持件201处于关闭位置时，在衬垫224和基底210之间形成气密密封。在一些实施例中，衬垫224和基底210之间形成气密密封。在一些实施例中，衬垫224构造成当覆盖件236处于关闭位置时防止多个开口238之间的流体传输。
[0108]
可运动凸片262包括从基本上垂直的壁270延伸出来的顶部部分268，该壁270从覆盖件236进一步延伸出来。当基底保持件201处于关闭位置时，垂直壁270与不可运动凸片260的主体(例如，其匹配部分)接合。顶部部分268 远离可运动凸片262的主体向外延伸，以形成用户的抓握手柄。在一些实施例中，抓握手柄可有助于用户拉动或推动可运动凸片262(例如，在接合和/或脱离不可运动凸片260时)。顶部部分268远离可运动凸片262的主体相对于平行于覆盖件236的底表面232的水平面以角度α向外延伸。在一些实施例中，角度α可以是约15度。在一些实施例中，角度α可以是至少约5度至约90度或更多(例如，约5度至10度、10度至15度、15度至20度、20度至25度、 25度至30度、30度至35度、35度至40度、40度至45度、45度至50度、 50度至55度、55度至60度、60度至65度、65度至70度、70度至75度、 75度至80度、80度至85度、85度至90度之间)。
[0109]
第一高度hm包括可运动凸片262的顶部部分268和垂直壁270。第二高度hv包括可运动凸片262的垂直壁270。在一些实施例中，可运动凸片262的第一高度hm约等于衬垫224的高度hg。在一些实施例中，可运动凸片262的第一高度hm可以比衬垫224的高度hg高约5％。在一些实施例中，可运动凸片 262的第一高度hm可以比衬垫224的高度hg至少高约5％至约20％(例如，约 5％至10％、10％至15％、15％至20％之间)。当基底保持件201处于关闭位置时，可运动凸片262的第一高度hm可以帮助固定衬垫224，使得力施加到邻近锁定凸片258的
衬垫壁209上。
[0110]
在一些实施例中，可运动凸片262的第二高度hv可以约等于衬垫224的高度hg。在一些实施例中，可运动凸片262的第二高度hv可以比衬垫224的高度hg高约5％。在一些实施例中，可运动凸片262的第二高度hv可以比衬垫224的高度hg至少高约5％至约20％(例如，约5％至10％、10％至15％、15％至20％之间)。当基底保持件201处于关闭位置时，可运动凸片262的第二高度hv可以帮助固定衬垫224，使得力施加到邻近锁定凸片258的衬垫壁209上。
[0111]
在图2所示的示例中，可运动凸片206各自包括对应的开口281，并且可运动凸片262包括开口282。开口281和开口282是垂直延伸的开口，在基底保持件201的关闭位置中，不可运动凸片208、260与可运动凸片206接合。不可运动凸片208、260从基部234的侧壁(例如，图1中所示的第一侧壁103) 水平向外突出。由于不可运动凸片208、260水平向外突出，当基底保持件201 从打开位置(图2)运动至关闭位置(图1)时，不可运动凸片208、260与可运动凸片206、262的各部分接触。
[0112]
例如，当覆盖件236和基部234被朝向彼此带动以将基底保持件201从打开位置(图2)运动至关闭位置(图1)时，不可运动凸片208与可运动凸片 206的斜面部分271接触，并且不可运动凸片260与可运动凸片262的斜面部分272接触。这种接触使可运动凸片206、262向外偏转，使不可运动凸片208、 260超出可运动凸片206、262的斜面部分271、272运动到开口281、282中。在一些实施例中，为了有助于可运动凸片262的偏转，用户可以操作可运动凸片262的抓握手柄。一旦不可运动凸片208、260超出斜面部分271、272运动到开口281、282中，可运动凸片206、262就朝向它们的中间位置返回，使得可运动凸片206、262的限定开口281、282的表面构造成与不可运动凸片206、 262的水平突出部分接触。这在不可运动凸片208、260和可运动凸片206、262 之间产生防止基部234和覆盖件236运动远离彼此的锁定接合。当不可运动凸片208、260定位在开口281、282内时，基底保持件201处于关闭位置。在基底保持件的关闭位置中，衬垫224接触基底(例如，抵靠基底压缩)，并在基底的各样品区域之间提供流体密封。在图2所示的示例中，基底保持件201包括从底表面232垂直延伸或向外突出的多个肋。衬垫224不与多个肋218接触 (即不邻接)。在一些实施例中，衬垫不与覆盖件共同模制。衬垫以另一种适当的方式安装至覆盖件。在这样的实施例中，一个或多个肋可以靠近或邻接一个或多个衬垫壁，以帮助将衬垫保持在适当的位置。在一些实施例中，当衬垫不与覆盖件共同模制时，一个或多个肋可以靠近或邻接衬垫壁中的1个、2个、 3个或4个。在一些实施例中，多个肋218勾勒出底表面232的区段(例如，尺寸设计成足以且构造成接纳衬垫224的区段)。多个肋218可以平行于第二侧壁205设置。在一些实施例中，衬垫与覆盖件共同模制。
[0113]
多个肋218可以具有宽度w。在一些实施例中，如图2所示，多个肋218 可以具有相等的宽度w。在一些实施例中，多个肋218的宽度可以变化。肋218 中的一个在基底保持件201的第一端211a附近从底表面232基本上垂直延伸。其余的肋218中在基底保持件201的第二端211b附近从底表面232垂直延伸。在一些实施例中，基底保持件201可包括多个肋(例如，2、3、4、5、6、7、 8、9、10个或更多个肋)。在一些实施例中，基底保持件201可以包括一个或多个肋，这些肋垂直于上述多个肋218延伸。
[0114]
多个肋218可以具有高度h。在一些实施例中，如图2所示，多个肋218 可以具有相等的高度h。在一些实施例中，可以提供高度h，使得当支承装置处于关闭位置(图1)时，多个
肋218的顶部边缘与基底110(图1中所示) 接触。在衬垫224抵靠基底110压缩的实施例中，多个肋218和基底110之间的接触可以限定衬垫224的最大压缩量。具体地，当多个肋218的顶部边缘与基底110接触时，可以防止衬垫224的进一步压缩。在一些实施例中，当支承装置处于关闭位置(图1)时，多个肋218通过与基底110的表面接触来固定基底110。在一些实施例中，当基底保持件101处于关闭位置(图1)时，基底110的第一表面228与多个肋218中的至少一个接合。在一些实施例中，基底110的第一表面228包括样品区域。在一些实施例中，样品区域是基底的构造成接纳一个或多个样品的区段。在一些实施例中，基底110包括一个或多个样品区域。
[0115]
图3是处于打开位置的示例性支承装置300的分解图。覆盖件336构造成接纳衬垫324。覆盖件336限定接纳衬垫324的四个支脚344的四个孔洞342。每个支脚344从衬垫324的底表面366突出。在一些实施例中，每个支脚344 从衬垫324的角(例如，当两个衬垫壁309相遇并形成直角时)或在衬垫324 的角附近突出。支脚344可以由柔韧或柔性的材料(例如，聚合材料，比如硅树脂)组成。在一些实施例中，支脚344具有圆形基部，该基部的直径比孔洞 342的直径大。支脚344构造成在被引入孔洞342中时形状部分或完全变形，使得一旦插入，支脚344就被固定住，并且由于支脚344的圆形基部和孔洞342 的直径不同而不容易移除。在一些实施例中，衬垫324永久附连于覆盖件336。在一些实施例中，衬垫224能够可逆地附连于覆盖件336。
[0116]
衬垫324包括从衬垫壁309中的一个延伸的l形突起326。在一些实施例中，l形突起326从衬垫324的角延伸。在一些实施例中，l形突起326构造成由覆盖件336限定的凹槽340接纳。在一些实施例中，凹槽340是l形凹槽。在一些实施例中，凹槽340的形状与l形突起326的形状互补。
[0117]
覆盖件336包括多个t形肋346和十字形肋348，这些肋从覆盖件336的底表面332垂直延伸或向外突出。在一些实施例中，覆盖件336包括八个t形肋346。在一些实施例中，覆盖件336包括至少约一个至约八个t形肋346(例如，1、2、3、4、5、6、7或8个t形肋346)。t形肋346可以从底表面332 的与衬垫324的长度lg对准的一部分垂直延伸或向外突出。t形肋346可以从底表面332的与衬垫324的宽度wg对准的一部分垂直延伸或向外突出。在一些实施例中，覆盖件336包括至少约一个至约三个十字形肋348(例如，1、2 或3个十字形肋348)。十字形肋348可以从四个孔洞304相交处的底表面332 的一部分垂直延伸或向外突出。
[0118]
图4是包括基底保持件401和基底410的支承装置400的立体图。基底保持件401示出为具有从基部434分离的覆盖件436。一对铰链416可以是可断开的铰链。在一些实施例中，一对铰链416可选择性地、手动地分开，以允许用户将覆盖件436从基部434分离。在一些实施例中，这对铰链419可以包括可断开部分。在一些实施例中，可断开部分可以包括可断开网带。在一些实施例中，这对铰链416是不可逆地可断开的。例如，一旦断开，覆盖件436和基部434就不能经由这对铰链416附连。在一些实施例中，这对铰链419可以是可逆地可断开的。例如，在一些实施例中，这对铰链416可包括第一部分450 和第二部分452，它们可构造成可逆地彼此接合。在一些实施例中，铰链416 的第一部分450从覆盖件436一体地延伸，并且铰链416的第二部分452从基部434一体地延伸。在一些实施例中，第一部分450和第二部分452可以经由紧固件(例如，卡扣配合、力配合或公母连接)直接彼此接合。在一些实施例中，装置上不存在铰链416。
[0119]
在一些实施例中，在基底410的第一表面428上限定的一个或多个样品区域464可以落在由衬垫424的多个开口438中的每一个限定的封围区段内。在一些实施例中，基底410可在其表面的一部分上包括样品(例如，生物材料样品)，这些样品与多个开口438中的一个或多个对准。在一些实施例中，样品 (例如，生物材料样品)能够以与多个开口438的对应孔相同的方式识别。
[0120]
在一些实施例中，基部434构造成接纳基底410。当基底保持件401处于关闭位置时，覆盖件436构造成放置在基部434的顶部，以固定覆盖件436与基部434之间的衬垫424和基底410。在一些实施例中，在将基底410放置在基部434中之前，用户将覆盖件436从基部434分离。一旦分离，用户可以按照箭头414的方向将基底410插入到基部434中。用户可以例如沿箭头412的方向把将覆盖件436放置在保持基底410的基部434的顶部上，并经由锁定凸片407和458将覆盖件436卡扣到基部434上，以固定基底410。
[0121]
在一些示例中，基底410的第二表面可以搁置在基底保持件401的基部 434的一部分上。例如，基部434可以包括构造成将基底410保持在基部434 内的唇部422。例如，基底410可以搁置在唇部422上并保持在位。在一些实施例中，唇部422围绕基部434的周界延伸。在一些实施例中，基底可以固定至基底保持件的基部。在一示例中，基底410可以沿箭头414的方向放置在基部434中。基底410的第二表面可以放置成当支承装置400处于关闭位置时，它与唇部222接触，并且基底410的第一表面428与多个肋418和衬垫424接触。在一些实施例中，基底410可以在不使用工具的情况下装载到基部434中。基部434可以包括开口420，该开口的尺寸设计成足以暴露基底410的一个或多个部分。在一些实施例中，开口420的尺寸设计成使基底410的第二表面的大部分被暴露而不被覆盖。在一些实施例中，开口420可以使基底410的第二表面能够与加热装置(例如，如pct/us2019/065100中所述的板3110，其全部内容以引用的方式纳入本文)的表面接触。在一些实施例中，基底410的第一表面428包括样品区域464。在一些实施例中，基部434包括开口420，当基底410放置在基部434中时，该开口暴露基底410的第二表面的至少一部分。
[0122]
在一些实施例中，可运动凸片406和458可以具有c形结构。在一些实施例中，可运动凸片406和458由柔性材料构成，柔性材料使其能够远离基底保持件的主体挠曲，以便分别与不可运动凸片408和462接合。在一些实施例中，不可运动凸片408和462不能够挠曲。在一些实施例中，不可运动凸片408 和462是刚性的，并且在与可运动凸片406、458接合时不挠曲。
[0123]
在一些实施例中，第一侧壁403可以测得约3英寸。在一些实施例中，第二侧壁405可以测得约1英寸。在一些实施例中，基底410可以测得约75毫米(mm)乘25mm。在一些实施例中，基底410可以测得约75毫米(mm) 乘50mm。在一些实施例中，基底410可以测得约48毫米(mm)乘28mm。在一些实施例中，基底410可以测得约46毫米(mm)乘27mm。在一些实施例中，基底410是载玻片。
[0124]
支承装置在结构和功能上可在几个方面与上文讨论的支承装置100、200、 300、400基本上相似，但作为多个孔104、304和多个开口138、238、338、 438的替代，可以包括由覆盖件限定的孔的替代数量、大小和形状，以及衬垫开口的替代数量、大小和形状。在一些实施例中，支承装置可具有两个孔。在一些实施例中，支承装置可具有两个衬垫开口。孔和衬垫开口的数量、大小和形状之间的这种差异可以允许用户使用基底保持件来支承在基底
的表面上限定有各种数量、大小和形状的样品区域的基底。
[0125]
图5示出了具有两个示例性孔的处于关闭位置的示例性支承装置500。支承装置500包括第一孔554a和第二孔554b。支承装置500包括两个衬垫开口，这两个衬垫开口与第一孔554a和第二孔554b对准，并在基底保持件501处于关闭位置时使基底510的各部分能够暴露。在一些实施例中，支承装置500可以包括限定1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或更多孔的覆盖件536。在一些实施例中，支承装置500包括1、2、3、4、5、6、 7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或更多个衬垫开口。在一些实施例中，支承装置500可以包括覆盖件536，该覆盖件限定数量在1至4、4至8、8至16、或16至20之间的孔。在一些实施例中，支承装置500包括数量在1至4、 4至8、8至16、或16至20之间的衬垫开口。
[0126]
在另一方面，本公开包括培养设置在本文所公开的任何基底的样品区域上的样品的方法。在一些实施例中，该方法包括将基底安装在本文所公开的任何支承装置上。该方法还包括将基底和支承装置定位在加热装置(例如，实验室热板)上。该方法还包括启动加热装置，以将热量传递给样品(例如，经由基底的第二表面，该第二表面经由基底保持件的开口暴露)。在一些实施例中，当基底保持件联接于支承装置时，至少60％的样品区域被支承装置覆盖。在一些实施例中，基底的至少50％、40％、30％、20％、10％或更少的样品区域被支承装置覆盖。
[0127]
虽然图1-4所示的实施例示出了基部(例如，基部134、234、334、434) 上的不可运动凸片(例如，不可运动凸片108、160、208、260、408、462)和覆盖件(例如，覆盖件136、236、436)上的可运动凸片(例如，可运动凸片 106、162、206、262、406、460)，但是在另外的实施方案中，不可运动凸片在覆盖件上，可运动凸片在基部上。
[0128]
其它实施例
[0129]
应理解虽然本实用新型已结合其详述进行描述，但以上描述意在说明而不是限制本实用新型的范围，该范围由所附权利要求书的范围限定。
[0130]
所公开的是可以用于所公开的方法、可以与所公开的方法结合、可以用于准备所公开的方法或为所公开的方法的产品的系统、设备(例如，装置)和方法。本文公开了这些和其它的系统、设备和方法，并且应当理解的是，这些系统、设备和方法的组合、子集、交互、分组等都被公开。即，虽然可能没有明确公开对这些系统、设备和方法的每一个单独和集体的组合和排列的具体参考，但这些每一个都在本文中被具体考虑和描述。例如，如果公开和讨论了具体的系统、设备或具体的方法，并且讨论了许多系统、设备或方法，那么除非特别指出相反的情况，否则这些系统、设备和方法的每一种组合和排列方式都是具体考虑的。同样，这些内容的任何子集或组合也被具体考虑并公开。
[0131]
其它方面、优势和修改在所附权利要求书的范围内。