改良的诊断测试的制作方法

本发明涉及诊断测试。更特定地来说但不限于此，本发明涉及登革热快速诊断测试。本发明还涉及用于鉴定先前登革热感染的快速诊断测试。

背景技术：

1、登革热为仅次于疟疾的重要感染性热带疾病，其中全世界大约一半人口居住在具有流行传播风险的区域。估计每年约有3亿9千万个登革热病例及大约9千6百万人具有出现临床症状的疾病。每年，估计有500,000人，包括孩童，具有严重型的登革热，需要住院，其在爆发前间对健康照护系统造成极大压力。大约2.5％罹患严重型登革热者会死亡(世界卫生组织。登革热和出血性登革热，数据单张n°117，2015年5月更新。可从url：http：//www.who.int/mediacentre/factsheets/fs117/en/取得)

2、登革热由四种抗原上有区别但紧密相关的黄热病毒属(lavivirus genus)的登革热病毒血清型所造成(gubler et al.，1988，in：epidemiology of arthropod-borneviral disease.monath tpm，editor，boca raton(fl)：crc press：223-60；kautner etal.，1 997，j.of pediatrics，131：516-524；rigau-perez etal.，1998，lancet，352：971-977；vaughn et al.，1997，j.infect.dis.，176：322-30)。登革热病毒为正向单股rna病毒。

3、登革热通常是由被病毒感染的埃及斑蚊(aedes aegypti)在吸食血液期间通过注入登革热病毒来传播的。在4-10天的潜伏期后，疾病突然开始并接着三个时期：发热(febrile)(2至7天)，危急(critical)(24-48小时-在此期间可能发生严重的并发症)及复原(recovery)(48-72小时)。在危急期期间，可能发生危及生命的并发症，例如出血、休克和急性器官损伤。适当处理这些不可预测的结果可能降低病例的死亡率。7至10天登革热会完全复原，但延续的虚弱乏力是正常的。常常会观察到白血球和血小板数下降。

4、严重型的登革热，包括出血性登革热(dhf)，为登革热病毒感染的潜在致死性并发症。dhf的特征是高烧和登革热综合征，但具有极度昏睡和困倦。增加的血管渗透性和异常的体内平衡可能导致血液容积下降、低血压，且在重症案例中，低血容量休克和内出血。二种因子似乎在dhf发生中扮演重要角色-带有高程度病毒血症的快速病毒复制(疾病的严重度为与病毒血症的程度有关；vaughn et al.，2000，j.inf.dis.，181：2-9)及带有高程度释放发炎介子的重大发炎反应(rothman and ennis，1999，virology，257：1-6；alanl.rothman.2011，nature reviews immunology，11：532-543)。在无治疗下dhf的死亡率可能达到10％，但在接受治疗的案例为＜1％。登革热感染流行于超过100个热带国家且在60个这些国家中已有登载dhf(gubler，2002，trends in microbiology，10：100-103)。

5、登革热休克综合征(dss)为一种常见的dhf的进程且通常为致命性的。dss为由于广泛的血管炎造成血浆渗漏至血管外间隙所致。dss其特征为快速和极低的脉搏量、低血压、手足厥冷和躁动。

6、在亚洲，主要在孩童中观察到dhf和dss，大约90％具有dhf者年龄为低于15岁(malavige et al.，2004，postgrad med.j.，80：588-601；meulen et al.，2000，trop.med.int.health，5：325-9)。相反之，在加勒比(caribbean)和中美洲爆发的主要是感染成年人(malavige et al.，2004，postgrad med.j.，80：588-601)。在许多登革热盛行的国家中，登革热的发生率在年长者群组中为增加的(sabchareon et al，2012，lancet，380，1559-1567；messina et al.，2014，trends microbiol.，22，138-146)。

7、四种登革热病毒的血清型具有大约60-80％序列同源性。经一种登革血清型感染提供了持久的同源免疫力，但异源免疫力则有限(sabin，1952，am.j.trop.med.hyg.，1：30-50)。因此，已感染过登革热血清型的个体可能之后会被不同的血清型感染。由不同登革热病毒血清型所造成的第二次感染理论上被视为发生严重登革热/dhf的风险因子，因为大多数显现严重登革热/dhf的病患先前已暴露于至少其中一种的其他四种登革热病毒血清型。

8、目前，对于登革热并无特定的治疗。登革热的治疗是对症治疗，卧床休息，经由解热剂和镇痛剂控制发烧和疼痛，以及足够饮水。治疗dhf需要补足液体流失，更替凝血因子和输注肝素。

9、因为登革热预防措施，例如蚊虫防治和个人防护免于叮咬的效用有限，难以执行且昂贵，因此安全及有效的登革热疫苗是最佳的防护模式。

10、赛诺菲巴斯德(sanofi pasteur)先前已开发出一登革热疫苗，市售名称为此登革热疫苗的疫苗效力(ve)已在(其中包括)2至16岁的受试者(capeding mr，et a1.，2014，lancet；384(9951)：1358-65和villar l，et al.，2015，nengl j med.，372(2)：113-23)以及较年长的受试者中(年龄18-45)经由使用以中和抗体反应为基础的桥接方法验证(gilbert pb，et al.，2019，am j trop med hyg，101(1)：164-179)。

11、然而，从该登革热疫苗得到的结果的周密分析显示，在疫苗接种时已经为登革热血清阳性的受试者，亦即先前已被登革热病毒感染过的受试者，无论哪一种血清型，在防护对抗登革热上特别有效。然而，对于最初登革热血清阴性的受试者，亦即先前未感染过登革热病毒的受试者，在首次疫苗接种后，中和抗体的程度低于登革热阳性受试者中所产生的中和抗体反应。

12、sridhar等人详细研究了登革热血清状况的影响(new engl.j.med.，2018，vol.379：327-340)，该研究考虑先前登革热血清状况(亦即，疫苗接种之前)对的安全性和效力的影响。sridhar发现在血清阳性受试者中疫苗的效能是优越的，例如在年龄9至16岁的疫苗接受者中，相较于血清阴性受试者的39％，在血清阳性受试者中统计上显著的ve为76％。再者，发现保护对抗严重登革热和因登革热住院，在疫苗接种前登革热血清阳性的受试者中为至少5年，但在登革热血清阴性的疫苗接种者中所述结果有较高风险的证据。

13、在本领域中已有测定登革热感染的测试。然而，这些测试是为检测急性登革热所量身订做的，例如，在临床设定中，当一病患出现疑似登革热的情况时。再者，这些血清测试缺乏适当的敏感性和/或特异性而导致伪阳性或伪阴性结果。

14、因此需要开发一种能以高特异性和敏感性鉴定登革热血清阳性的潜在登革热疫苗接种受试者的登革热测试，尤其是在过去某个时间已具有先前登革热感染的登革热血清阳性受试者(亦即，并非罹患急性登革热感染)。一旦鉴定出，可接着施予所述受试者一登革热疫苗，例如

15、本发明寻求解决上述需求。

技术实现思路

1、本发明提供包括第一登革热抗原和第二登革热抗原的用于检测抗-登革热病毒抗体的免疫诊断测试装置，其中该第一登革热抗原包括与seq id no.1具有至少90％序列同一性的多肽，而该第二登革热抗原包括具有seq id no.2序列的多肽，或一具有就seq idno.2而言具有至少1个及不超过4个氨基酸取代的序列的多肽。

2、本发明亦提供文中所述的免疫诊断测试装置，供用于诊断或用作为辅助诊断人类受试者中的登革热感染。

3、本发明亦提供用于测定人类受试者中登革热感染的方法，该方法包括：

4、a.提供第一登革热抗原和第二登革热抗原，其中该第一和第二登革热抗原如文中所定义且其中该登革热抗原与可检测部分缀合；

5、b.将登革热抗原与获自该受试者的生物样本接触，该生物样本可能含有至少一个能与至少一所述抗原结合的结合配偶体(binding partner)；及

6、c.若该样本含有至少一个结合配偶体，则检测至少一个登革热抗原可检测部分缀合物和至少一个结合配偶体之间所形成的复合物的存在，其存在为表示该受试者中的登革热病毒感染。

7、本发明亦提供用于鉴定登革热血清阳性的人类受试者的方法，其包括以下步骤：(i)从该受试者得到生物样本及(ii)使用一文中所定义的免疫诊断测试装置分析该样本。

8、本发明亦提供用于检测人类受试者中抗登革热igg抗体的体外方法，其包括以下步骤：(i)从该受试者得到生物样本及(ii)使用一文中所定义的免疫诊断测试装置分析该样本。

9、本发明亦提供对人类受试者接种疫苗对抗登革热的方法，其包括以下步骤：(i)从该受试者得到生物样本；(ii)使用一文中所定义的免疫诊断测试装置分析该样本以便于测定该受试者是否为登革热血清阳性及(iii)若根据步骤(ii)的分析该人类受试者为登革热血清阳性，则施予该人类受试者一登革热疫苗。

10、当然应理解，有关本发明一方面所述的特征可并入本发明其他方面。例如，本发明的方法可并入任何有关本发明测试装置所述的特征，反之亦然。