用于质谱法的基于蒸发的样品制备工作流程的制作方法

本发明涉及一种使用质谱法检测和/或定量样品中的分析物的方法。本发明的方法包括：使用固相萃取(spe)从样品中提取分析物以获得包含分析物的spe提取物；浓缩分析物，其中所述浓缩包括从spe提取物中部分蒸发溶剂；并且使用质谱法检测和/或定量样品中的分析物。

背景技术：

1、用于lc-ms应用的自动样品制备系统以及hplc系统具有与死体积相关的样品体积和分析物损失，从而导致较低的灵敏度。例如，在将从借由固相萃取(spe)的分析物富集获得的洗脱样品从主反应容器转移到辅反应容器期间，可能会发生大量样品损失。由于样品或hplc小瓶以及使用溢出以确保高精度和重现性的满环进样的死体积，在lc进样过程期间，可能会发生进一步的样品损失。

2、spe期间分析物的洗脱通常需要有机溶剂(例如80％meoh)。然而，在lc-ms进样之前，需要尽量减少样品中有机溶剂的含量，以保持可接受的色谱性能，尤其是对于μlc系统。因此，此类洗脱经常被稀释，例如用水1∶1稀释，以降低有机溶剂浓度(例如≤30-40％meoh)。这种稀释导致分析物检测灵敏度的进一步损失。

3、因此，非常需要改进质谱法的样品制备工作流程，使得最大限度地减少分析物损失并且可以实现更高的分析物检测灵敏度，尤其是在使用spe技术(例如基于磁性颗粒的spe技术)的样品制备过程的背景下。

技术实现思路

1、本文提供了一种使用质谱法检测和/或定量样品中目的分析物的方法，所述方法包括：

2、a)使用固相萃取(spe)从样品中提取分析物以获得包含分析物的spe提取物；

3、b)通过从a)中获得的spe提取物中部分蒸发溶剂来浓缩分析物；并且

4、c)使用质谱法检测和/或定量样品中的分析物。

5、特别地，本发明也涉及以下项：

6、1.一种使用质谱法来检测和/或定量样品中的分析物的方法，所述方法包括：

7、a)使用固相萃取(spe)从样品中提取分析物以获得包含分析物的spe提取物；

8、b)浓缩分析物，所述浓缩包括从a)中获得的spe提取物中蒸发溶剂；并且

9、c)使用质谱法检测和/或定量样品中的分析物，

10、优选地，一种使用质谱法检测和/或定量样品中的分析物的方法，所述方法包括：

11、a)使用固相萃取(spe)从样品中提取分析物以获得包含分析物的spe提取物，其中spe提取物包含50vol％至100vol％的有机溶剂，其中分析物是类固醇，优选地选自由睾酮和雌二醇组成的组；

12、b)浓缩分析物，所述浓缩包括从a)中获得的spe提取物中部分蒸发溶剂；其中经受部分蒸发的spe提取物的体积减少了50％至95％、优选地减少了60％至90％，更优选地减少了70％至80％；

13、b1)用稀释溶剂来稀释从步骤b)获得的浓缩分析物以获得稀释的分析物，其中稀释的分析物在步骤c)之前包含小于50vol％的有机溶剂或另外的有机溶剂；并且

14、c)使用质谱法来检测和/或定量样品中的分析物，其中质谱法是与液相色谱法(lc-ms)联用的质谱法。

15、2.根据项目1所述的方法，其中溶剂从spe提取物中的所述蒸发是溶剂从spe提取物中的部分蒸发。

16、3.根据项目1或2所述的方法，其中经受浓缩的spe提取物的体积减少了50％至95％、在一个实施例中减少了60％至90％、在一个实施例中减少了70％至80％、在一个实施例中减少了73％到87％。

17、4.根据项目3所述的方法，其中该方法进一步包括使用稀释溶液将蒸发后的体积调整至对应于a)中经受spe的样品体积的5％至40％、在一个实施例中为10％至30％、在一个实施例中为13％至27％的最终体积。

18、5.根据项目4所述的方法，其中稀释溶液是有机溶剂浓度低于10vol％、特别是5vol％、特别是0vol％的水溶液。

19、6.根据项目4所述的方法，其中稀释溶液是水。

20、7.根据项目1至6中任一项所述的方法，其中在a)中经受spe的样品体积为250μl或更少、在一个实施例中为200μl或更少、在一个实施例中为150μl或更少、在一个实施例中为150μl。

21、8.根据项目1至7中任一项所述的方法，其中经受spe的样品的体积是150μl，并且其中spe提取物的体积通过浓缩减少至10μl至60μl、在一个实施例中为20μl至50μl、在一个实施例中为40μl的最终体积。

22、9.根据项目1至8中任一项所述的方法，其中spe提取物包含50vol％至100vol％的有机溶剂。

23、10.根据项目9所述的方法，其中有机溶剂选自由乙腈和甲醇组成的组。

24、11.根据项目1至10中任一项所述的方法，其中分析物是类固醇。

25、12.根据项目1至11中任一项所述的方法，其中分析物是类固醇激素，在一个实施例中，类固醇激素选自由雄激素、雌激素、糖皮质激素、盐皮质激素和孕激素组成的组。

26、13.根据项目1至12中任一项所述的方法，其中分析物是雄激素或雌激素。

27、14.根据项目13所述的方法，其中雄激素是睾酮。

28、15.根据项目13所述的方法，其中雌激素是雌二醇。

29、16.根据项目1至15中任一项所述的方法，其中样品是流体，特别是生物流体。

30、17.根据项目1至16中任一项所述的方法，其中样品是所获得的体液，在一个实施例中是人体液。

31、18.根据项目1至17中任一项所述的方法，其中样品是血清或血浆。

32、19.根据项目1至18中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括用于从分析物结合蛋白释放分析物的预处理步骤。

33、20.根据项目1至19中任一项所述的方法，其中spe是分批式spe。

34、21.根据项目1至20中任一项所述的方法，其中spe所用的固相由磁性颗粒，特别是磁性微珠形成。

35、22.根据项目1至21中任一项所述的方法，其中spe的固相由颗粒(例如磁性颗粒)形成，该颗粒被配置为从样品中捕获分析物并且在用洗脱溶剂处理时释放所述分析物。

36、23.根据项目1至22中任一项所述的方法，其中spe的固相由涂覆有特异性结合分析物的抗体的颗粒(例如磁性颗粒)形成。

37、24.根据项目1至23中任一项所述的方法，其中spe的固相由能够结合或吸附样品中的分析物并且在用洗脱溶液处理时能够释放分析物的多孔聚合物基质形成。

38、25.根据项目1至24中任一项所述的方法，其中固相萃取(spe)包括：

39、a)将分析物捕获到固相；

40、b)任选地对固相的一个或多个洗涤步骤；并且

41、c)从固相中洗脱分析物以获得包含分析物的spe提取物。

42、26.根据项目25所述的方法，其中洗脱分析物包括将洗脱溶剂添加至固相并且在添加的洗脱溶剂的存在下培养固相。

43、27.根据项目25或26所述的方法，其中添加的洗脱溶剂的体积对应于经受spe的样品体积的50％至150％、在一个实施例中对应于经受spe的样品体积的90％至120％、在一个实施例中经受spe的样品体积的100％。

44、28.根据项目25至27中任一项所述的方法，其中洗脱溶剂包含acn，特别是处于40vol％至100vol％、特别是处于45vol％至90vol％、特别是处于60vol％至80vol％的浓度。

45、29.根据项目25至27中任一项所述的方法，其中洗脱溶剂包含meoh，特别是处于70vol％至100vol％、特别是处于80vol％至90vol％、特别是处于80vol％的浓度。

46、30.根据项目1至29中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括在步骤a)之前向样品添加用于定量的内标(istd)。

47、31.根据项目30所述的方法，其中istd是用一种或多种重同位素人工标记的分析物。

48、32.根据项目1至31中任一项所述的方法，其中质谱法是与液相色谱法联用的质谱法(例如，其中分析是lc-ms分析或更具体地是lc-ms/ms分析)。

49、33.根据项目32所述的方法，其中液相色谱法(lc)是hplc或快速lc。

50、34.根据项目32或33所述的方法，其中lc是微型lc。

51、35.根据项目32至34中任一项所述的方法，其中lc是超高效液相色谱法(uhplc)。

52、36.根据项目1至35中任一项所述的方法，其中质谱法是使用电喷雾电离(esi)的质谱仪执行的。

53、37.根据项目1至36中任一项所述的方法，其中质谱法是用质谱仪执行的，该质谱仪是串联质谱仪，特别是三级四极质谱仪。

54、38.根据项目1至37中任一项所述的方法，其中方法是自动化的。