激光捕获显微切割可视化化学物质的制作方法

本发明涉及在用于分子诊断和数字病理学的显微切割期间改进组织可视化和数字图像捕获。

背景技术：

1、在病理学中，健康和患病细胞的细胞形态的高保真图像对于诊断目的和特定细胞亚群的分子分析是重要的。待成像、收集的和分析的细胞可从组织活检样品、哺乳动物或细菌细胞培养物或大量植物材料中获得，对于这些细胞，可以使用如激光捕获显微切割(“lcm”)的技术从样品中分离出选择细胞亚群以便进行进一步的分子分析。

2、lcm采用激光束或辐射源来加热热聚合物帽(该热聚合物帽被紧贴安装在载玻片上的组织的切片)、或者切割组织，或者采用探针来吸取组织的一部分。

3、用于组织分子分析的组织切片载玻片的可视化(包含激光捕获显微切割(lcm)或扫描maldi)或探针/工具捕获自从这些组织取样方法最初发明以来一直是问题。载玻片和显微切割或细胞分析工具(如lcm帽)之间的界面产生空气折射率不匹配，该空气折射率不匹配使图像失真，从而导致变暗和分辨率及颜色的损失，阻止技术人员或病理学家完全可视化组织切片。由于组织和分子获取工具之间产生的气穴，组织的可视化受到阻碍。

4、过去，人们曾试图使用普通的病理流体(如油浸或封固剂)来可视化载玻片，然而，这些液体损坏并且胶合组织，从而阻止下游的分子分析。caprette,d.r.(2012)指出“油浸观察的缺点是油必须保持接触并且油是粘性的。湿安装件必须非常牢固以便使用油。油浸透镜只能与油一起使用，油不能与干透镜(如您的400倍透镜)一起使用。必须使高放大倍数的透镜非常靠近样本才能聚焦，而焦平面非常浅，所以聚焦可能很困难。油使得利用干透镜看到的图像失真，所以一旦您将油放置在载玻片上，其在再次使用较高的干透镜之前必须被彻底清除。非油性透镜上的油将使观察失真，并且可能地损坏涂层”。其他人已经尝试添加水，然而组织的再水合作用阻止了激光提取组织。进一步，添加其他不相容的溶剂损坏显微切割探针。

5、因此，长期以来一直需要一种可以施加于显微切割探针和组织样品之间的界面以允许在不损害细胞捕获过程或下游分析的情况下改善视觉检查的解决方案。

技术实现思路

1、本技术涉及一种可视化溶液，该可视化溶液具有实现折射率匹配和uv、ir和可见光波长的渗透性的化学物质，该可视化溶液对于高保真数字图像捕获、视觉检查和高分辨率分子捕获、以及用于诊断分子剖析的分析提高了组织的清晰度。

2、在一个实施例中，可视化溶液是挥发性的，不会干扰下游分子分析。可视化溶液清除、脱水和保存组织诊断分子，而不干扰显微切割、数字成像和/或细胞捕获。

3、在一个实施例中，可视化溶液可以作为预包装物品出售，以便用于世界范围内现有的分子诊断实验室和病理部门。

4、在一个实施例中，本发明涉及通过可视化溶液提供的优化的图像捕获。

5、本公开涉及一种高通量lcm系统，该高通量lcm系统在没有对防止接近组织的盖玻片的现有要求的情况下快速数字化组织载玻片以便进行分子分析。这个数字化的图像组可以由技术人员或所开发的机器学习算法分析以标识数字扫描的组织载玻片的关键组织学感兴趣区域(region of interest，roi)。在下游生物分析之后，软件将数据组合成显示在组织本身的数字图像上的报告。该报告包含用户预先选择的或者自动化系统已经选择的roi内的生物数据。总的来说，具有所组合的可视化溶液的这种新工作流程将提高显微切割效率和用于组织的基因组剖析和蛋白质组剖析的所有类型的分子分析。

6、.在一个实施例中，一种液体包含括a)有机组分；b)稳定化组分；和c)保存组分，其中所述有机组分、所述稳定化组分和所述保存组分是不同的组分，其中所述有机组分包含具有1.5或更低的折射率的挥发性有机溶液；其中所述液体被配置为提供1/1.5倍的透镜的分辨能力的可视化溶液。

7、在一个实施例中，所述液体包含所述有机组分，所述有机组分在约22℃的温度下具有约5kpa至约25kpa的蒸气压，其中所述折射率的下限为约1.3。

8、在一个实施例中，所述有机组分被配置为透射约90％的波长在约400nm至约800nm的范围内的入射光。

9、在一个实施例中，所述挥发性有机溶液至少包含短链醇、乙腈或它们的组合。

10、在一个实施例中，所述短链醇包含甲醇、乙醇和/或丙醇或它们的异构体。

11、在一个实施例中，所述稳定化组分包含吸湿性盐，其中所述稳定化组分被配置为从所述有机组分吸收水。

12、在一个实施例中，所述液体不溶解聚甲基丙烯酸甲酯聚合物和/或乙烯-乙酸乙烯酯聚合物。

13、在一个实施例中，所述保存组分包含变性剂化学组分。

14、在一个实施例中，所述变性剂化学组分包含离液剂。

15、在一个实施例中，一种试剂盒包含有包含在容器内的a)有机组分；b)稳定化组分。

16、在一个实施例中，所述容器包含对经由所述有机组分的降解呈惰性的材料，其中所述有机组分和所述稳定化组分是不同的组分，其中所述有机组分包括具有1.5或更低的折射率的挥发性有机溶液；其中所述试剂盒被配置为提供1/1.5倍的透镜的分辨能力的可视化溶液。

17、在一个实施例中，所述试剂盒是挤压施加器的形式。

18、在一个实施例中，所述试剂盒还包含有包括离液剂的保存组分。

19、在一个实施例中，所述有机组分在约22℃的温度下具有约5kpa至约25kpa的蒸气压，其中所述折射率的下限为约1.3。

20、在一个实施例中，所述有机组分被配置为透射约90％的波长在约400nm至约800nm的范围内的入射光。

21、在一个实施例中，所述挥发性有机溶液至少包含短链醇、乙腈或它们的组合。

22、在一个实施例中，所述短链醇包含甲醇、乙醇和/或丙醇或它们的异构体。

23、在一个实施例中，所述稳定化组分包含吸湿性盐，其中所述稳定化组分被配置为从所述有机组分吸收水。

24、在一个实施例中，一种系统包含：a)可视化溶液，所述可视化溶液包括：a)有机组分；b)稳定化组分；和可选的c)保存组分，其中所述有机组分、所述稳定化组分和所述保存组分是不同的组分，其中所述有机组分包括具有1.5或更低的折射率的挥发性有机溶液；和b)可视化仪器。

25、在一个实施例中，一种系统包含：a)可视化溶液，所述可视化溶液包括：a)有机组分；b)稳定化组分；和c)保存组分，其中所述有机组分、所述稳定化组分和所述保存组分是不同的组分，其中所述有机组分包含具有1.5或更低的折射率的挥发性有机溶液；和b)可视化仪器。

26、在一个实施例中，所述系统还包含用于显微切割放置在没有盖玻片的载玻片上的样品的第一装置。

27、在一个实施例中，所述系统还包含用于从所述样品的感兴趣区域生成多组学数据的第二装置。

28、在一个实施例中，所述系统还包含用于分析所述样品的第三装置。

29、在一个实施例中，包含所述液体的所述系统具有所述可视化溶液的有机组分，所述有机组分在约22℃的温度下具有约5kpa至约25kpa的蒸气压，其中所述折射率的下限为约1.3。

30、在一个实施例中，所述可视化溶液被配置为透射约90％的波长在约400nm至约800nm的范围内的入射光。

31、在一个实施例中，所述挥发性有机溶液至少包含短链醇、乙腈或它们的组合。

32、在一个实施例中，所述第一装置是激光捕获显微切割。

33、在一个实施例中，所述可视化仪器是显微镜、激光捕获显微切割、探针/工具捕获、光谱中的至少一种。

34、在一个实施例中，所述系统被配置为高通量数字化系统。

35、在一个实施例中，所述系统被配置为配备有能够扫描和捕获样品的图像并且将所述图像转换成数字化形式的相机系统。

36、在一个实施例中，所述系统包含人工智能配置的软件。

37、在一个实施例中，一种方法包含a)将本发明的所述液体施加到样品上；和b)使用可视化仪器可视化所述样品。

38、在一个实施例中，所述方法还包含捕获所述样品的图像并且使用所述图像选择所述样品中的感兴趣区域。

39、在一个实施例中，所述方法包含有包括数据库的软件，并且被配置为显示具有数据的所述感兴趣区域。

40、在一个实施例中，所述方法包含使用用于高通量样品数字化系统的相机系统扫描所述样品。

41、在一个实施例中，所述可视化仪器是显微镜、激光捕获显微切割设备(激光捕获显微切割器)、探针/工具捕获装置或光谱法(分光计或光谱装置或系统)中的至少一种。