一种基于表面增强拉曼光谱内标分析的三聚氰胺定量检测方法

1.本发明涉及表面增强拉曼光谱(sers)检测和定量分析技术领域，特别是涉及一种基于表面增强拉曼光谱内标分析的三聚氰胺定量检测方法。


背景技术：

2.三聚氰胺，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，含氮量高达66％。而食品工业中普遍采用凯氏定氮法，通过检测氮含量来推算蛋白质含量。故而一些不法分子将三聚氰胺混入掺水或劣质生鲜奶中,在检测中造成蛋白质含量达标的假象。
3.高效精确定量检测三聚氰胺分子，成为解决这一问题的关键。目前对于三聚氰胺检测比较常见的方法包括高效液相色谱法、液相色谱-质谱/质谱法、气相色谱-质谱联用法以及红外光谱法、电化学法、酶联免疫吸附法、比色法等。但上述几种方法具有过程冗杂、检测周期长、所需仪器价格昂贵、检测成本高等不足。
4.拉曼散射光谱因其具有高识别度的“分子指纹”特征峰，能够反映分子的化学结构信息，引起了大家的广泛关注。但是，常规拉曼散射的散射截面往往非常小(～10-30
cm2)，限制了拉曼光谱技术的应用。而表面增强拉曼(sers)是当待测分子吸附在具有亚纳米空间的粗糙金属表面或金属纳米结构表面后，拉曼散射强度被极大增强的现象。其归因于激光照射后造成的亚纳米空间内电场强度急剧增大，形成热点。但sers基底增强效果的不均一性以及实验条件导致的待测物峰强的较强波动成为实现三聚氰胺分子定量监测的一大阻碍。
5.因而，亟待提供一种可用于三聚氰胺定量检测的sers方法。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一种基于表面增强拉曼光谱内标分析的三聚氰胺定量检测方法，以解决现有检测方法的至少部分技术问题。
7.为实现上述目的，本发明实施例提供一种基于表面增强拉曼光谱内标分析的三聚氰胺定量检测方法，包括：
8.步骤1，激光诱导还原法制备自带内标分子的银纳米颗粒聚集体作为表面增强拉曼散射光谱(sers)基底；包括：
9.将硝酸银溶液和柠檬酸钠溶液均匀混合得到反应溶液，置于导电玻璃上，在所述反应溶液上方覆盖一片盖玻片；将激光汇聚在所述反应溶液与导电玻璃的界面处，照射预设时间后，在所述界面处通过激光诱导还原形成银纳米颗粒聚集体；用去离子水冲洗形成的银纳米颗粒聚集体，去除未反应溶液，得到带有柠檬酸根的银纳米颗粒聚集体作为sers基底，其中，所述柠檬酸根为所述内标分子；
10.步骤2，获取sers信号中三聚氰胺分子的特征峰与所述柠檬酸钠分子特征峰的比值作为所述三聚氰胺分子特征峰的相对强度，拟合出三聚氰胺溶液的浓度与所述相对强度(ir)之间的函数关系；包括：
11.在所述sers基底上检测水溶液中三聚氰胺分子的表面增强拉曼散射光谱，得到位于703cm-1
处三聚氰胺分子的特征峰和位于1380cm-1
处柠檬酸根离子的特征峰；
12.将所述柠檬酸根离子1380cm-1
处特征峰作为强度内标，得到所述三聚氰胺分子的特征峰的相对强度所述相对强度的相对标准偏差小于所述三聚氰胺分子特征峰的相对标准偏差；
13.检测不同浓度下三聚氰胺水溶液的sers信号，根据得到的所述相对强度，拟合出所述函数关系；
14.步骤3，将未知浓度的三聚氰胺溶液滴加到所述sers基底上，在不同位置多次采集sers信号，计算出所述相对强度平均值，根据所述函数关系反向推测出溶液中三聚氰胺的浓度。
15.在一个实施方式中，所述三聚氰胺分子的特征峰的相对强度的相对标准偏差小于10％。
16.在一个实施方式中，当所述三聚氰胺水溶液的浓度在10-6
m-10-8
m范围内，所述相对强度与所述三聚氰胺水溶液的浓度成线性关系。
17.在一个实施方式中，检测不同浓度下三聚氰胺水溶液的sers信号，根据得到的所述相对强度，拟合出所述函数关系，包括：求出得到的多个所述相对强度的值的平均值，根据所述平均值和所述线性函数关系确定所述溶液中三聚氰胺分子的浓度。
18.与现有技术相比，本发明至少具有下述优点：
19.本发明采用sers内标分析的方法实现对三聚氰胺分子的定量检测，与现有技术相比具有样品制备简单、检测快速、灵敏度和准确率高等优点，具体包括：
20.(1)通过简单的激光诱导还原制备银纳米聚集体作为sers基底，该基底天然携带内标分子(柠檬酸根)。
21.(2)通过内标分子的强度校准可有效消除sers基底不均一性或实验条件等因素导致的三聚氰胺峰强波动，并且ir的相对标准差可以控制在10％以内，为定量分析提供可靠保证。
22.(3)在10-6
m-10-8
m浓度范围内，ir与三聚氰胺浓度成良好的线性关系，其以三聚氰胺浓度为横坐标，ir为纵坐标拟合得到所述线性函数关系为：y＝1.99568
×
x+0.09674。
23.(4)以所述线性关系为定量曲线，通过sers强度内标分析，得到水溶液和牛奶溶液中三聚氰胺(7.5
×
10-7
m)的检测回收率分别可达103％和112％。
附图说明
24.图1是本发明实施例提供的基于表面增强拉曼光谱内表分析的三聚氰胺定量检测方法的流程示意图。
25.图2是本发明实施例提供的制备sers基底的原理示意图。
26.图3是根据本发明实施例提供的方法制备得到的银纳米颗粒聚集体的扫描电子显微镜照片。
27.图4是根据本发明实施例提供的方法在所述基底上检测得到的的水溶液中三聚氰胺分子(2.5
×
10-7
m)的拉曼特征峰以及检测得到的三聚氰胺粉末的拉曼特征峰的示意图。。
28.图5是根据本发明实施例提供的方法检测得到的浓度为2.5
×
10-7
m的三聚氰胺溶液的拉曼散射光谱的示意图以及基底不同位置测得的703cm-1
处三聚氰胺分子特征峰的绝对强度变化与ir的强度变化示意图。
29.图6是根据本发明实施例提供的方法检测得到的不同浓度拉曼散射光谱的示意图。
30.图7是根据本发明实施例提供的方法拟合得到的拉曼散射光谱中三聚氰胺分子浓度与两峰强度比值(ir)之间的函数关系的示意图。
31.图8是根据本发明实施例提供的方法检测未知浓度的三聚氰胺水溶液、牛奶溶液以及空白牛奶溶液的拉曼散射光谱的示意图。
32.图9是根据本发明实施例提供的方法反向推测水溶液及牛奶溶液中三聚氰胺浓度的示意图。
33.图10是根据本发明实施例提供的方法推测未知浓度的三聚氰胺水溶液及牛奶溶液过程中所得回收率的分析图表。
具体实施方式
34.在附图中，使用相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面结合附图对本发明的实施例进行详细说明。
35.在本发明的描述中，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明保护范围的限制。
36.在不冲突的情况下，本发明各实施例及各实施方式中的技术特征可以相互组合，并不局限于该技术特征所在的实施例或实施方式中。
37.表面增强拉曼(sers)是指当待测分子吸附在具有亚纳米空间的粗糙金属表面或金属纳米结构表面后，拉曼散射强度被极大增强的现象。sers因其具有高识别度的“分子指纹”特征峰，能够反映分子的化学结构信息，被广泛的应用于生物分子检测。它本质上是一种近场现象，只有那些位于高度增强电磁场内(通常为2nm)的分子(即所谓的“热点”)对整体sers信号做出了重要贡献。但热点的场增强对纳米结构之间的耦合很敏感，往往会因为金属纳米结构中热点的不均匀性造成信号的波动；同时，由于分子吸附行为的不确定性等问题，实现在低浓度下高精度定量分析检测分子十分困难，阻碍了sers量化的实际应用。
38.为解决这一问题，试图引入内标法，对sers信号进行校准，以实现分子的定量检测。内标法即通过引入与分析物分子具有相同增强作用的内标物质，在相同情况下同时检测分析物分子与内标物质的拉曼信号，从而对sers基底的不稳定性和不均匀性进行校准，以实现更为准确的定性、定量分析的方法,能够有效的解决sers量化的实际应用问题。但是，额外的内标物质的引入，会加大实验的难度，或者引起竞争吸附从而影响实验信号。所以本发明试图寻找一种自带内标物质的基底。
39.本发明实施例提供了一种基于表面增强拉曼光谱内标分析的三聚氰胺定量检测方法，利用激光诱导还原合成了自带内标分子柠檬酸根的银纳米颗粒聚集体作为sers基底，通过内标法实现对三聚氰胺分子的定量检测。如图1所示，该方法包括：
40.步骤1，激光诱导还原法制备自带内标分子的银纳米颗粒聚集体作为sers基底；包括：
41.将硝酸银溶液和柠檬酸钠溶液均匀混合得到反应溶液，置于导电玻璃上，在所述反应溶液上方覆盖一片盖玻片；将激光汇聚在所述反应溶液与导电玻璃的界面处，照射预设时间后，在所述界面处通过激光诱导还原形成银纳米颗粒聚集体；用去离子水冲洗形成的银纳米颗粒聚集体，去除未反应溶液；其中，因柠檬酸钠参与还原过程，故所述银纳米颗粒聚集体表面吸附柠檬酸根离子，从而得到自带内标分子柠檬酸根的银纳米颗粒聚集体，并以该银纳米颗粒聚集体作为sers基底。
42.步骤2，获取sers信号中三聚氰胺分子的特征峰与所述柠檬酸钠分子的特征峰的比值作为所述三聚氰胺分子的特征峰的相对强度，拟合出三聚氰胺溶液的浓度与所述相对强度(ir)之间的函数关系，包括：
43.在所述sers基底上检测水溶液中三聚氰胺分子的表面增强拉曼散射光谱，得到位于703cm-1
处三聚氰胺分子的特征峰和位于1380cm-1
处柠檬酸根离子的特征峰；
44.将所述柠檬酸根离子1380cm-1
处特征峰作为强度内标，得到所述三聚氰胺分子的特征峰的相对强度所述相对强度的相对标准偏差小于所述三聚氰胺分子的特征峰的相对标准偏差；
45.检测不同浓度下三聚氰胺水溶液的sers信号，根据得到的所述相对强度的值，拟合出所述函数关系。
46.在一个示例中，在所述基底上检测水溶液中三聚氰胺分子(2.5
×
10-7
m)的表面增强拉曼散射光谱，可同时观测到位于703cm-1
处三聚氰胺分子的特征峰和位于1380cm-1
处柠檬酸根离子的特征峰。此时发现，若只分析三聚氰胺分子位于703cm-1
处特征峰强度，实验的相对标准偏差(rsd)为20％；若将柠檬酸根离子1380cm-1
处的特征峰作为强度内标计算ir的rsd，其降至8.9％；包括：
47.将基底置于载物台上，并将三聚氰胺溶液(2.5
×
10-7
m)滴加到基底上，调节激光，采集三聚氰胺分子的表面增强拉曼散射光谱信号，可同时观测到位于703cm-1
处的三聚氰胺分子的特征峰和位于1380cm-1
处的柠檬酸根离子的特征峰，且经过时间稳定性检测发现柠檬酸根离子的特征峰可以一直稳定的存在。进一步检测基底上不同位置处三聚氰胺分子的拉曼光谱，我们发现，若只分析三聚氰胺分子位于703cm-1
处的特征峰，由于sers基底的不均一性或实验条件等因素的影响，其绝对峰强波动性较大，相对标准偏差(rsd)约为20％；此时若将柠檬酸根离子1380cm-1
处特征峰作为强度内标再分析三聚氰胺分子特征峰的相对强度，则可将rsd降至8.9％。
48.其中，通过内标分子的强度校准，即使用三聚氰胺分子特征峰的相对强度，可有效消除sers基底不均一性或实验条件等因素导致的三聚氰胺峰强波动，并且ir的相对标准差均可以控制在10％以内，为定量分析提供可靠保证。
49.在一个示例中，检测10-5
m-10-8
m浓度范围下共11个不同浓度的三聚氰胺水溶液的拉曼散射光谱，计算的rsd以及ir的rsd，可以发现不同浓度下三聚氰胺分子ir的rsd均小于10％，并且在10-6
m-10-8
m浓度范围内，ir与三聚氰胺浓度成良好的线性关系，其以三聚氰胺浓度为横坐标，ir为纵坐标拟合得到所述线性函数关系：y＝1.99568
×
x+0.09674；
包括：
50.将浓度分别为1.0
×
10-5
mol/l、7.5
×
10-6
mol/l、5.0
×
10-6
mol/l、2.5
×
10-6
mol/l、1.0
×
10-6
mol/l、7.5
×
10-7
mol/l、5.0
×
10-7
mol/l、2.5
×
10-7
mol/l、1.0
×
10-7
mol/l、5.0
×
10-8
mol/l、1.0
×
10-8
mol/l的11种三聚氰胺水溶液分别滴加在所述基底上，检测其拉曼光谱。对于每一种浓度，通过多次测量，读取三聚氰胺分子703cm-1
处特征峰的绝对峰强并计算其rsd，发现rsd均在20％以上。相应地，将柠檬酸根离子1380cm-1
处的特征峰作为强度内标处的特征峰作为强度内标发现ir的rsd均小于10％，并且在10-6
m-10-8
m浓度范围内，ir与三聚氰胺浓度成良好的线性关系。以三聚氰胺浓度为横坐标，ir为纵坐标拟合得到所述线性函数关系。
51.步骤3，将未知浓度的三聚氰胺溶液滴加到所述sers基底上，在不同位置多次采集sers信号，计算出所述相对强度的平均值，根据所述函数关系反向推测出溶液中三聚氰胺的浓度。
52.在一个示例中，将未知浓度的三聚氰胺水溶液或牛奶溶液滴加到所述基底上，在不同位置多次采集拉曼光谱信号，根据光谱计算出ir的平均值，再依据所述线性函数关系反向推测出溶液中三聚氰胺的浓度，并将之与其实际浓度进行比较，计算得到三聚氰胺水溶液和牛奶溶液中的检测回收率分别可达103％和112％。包括：
53.采集所述基底上不同位置的拉曼光谱信号，读取三聚氰胺分子特征峰703cm-1
处的绝对峰强与柠檬酸根离子特征峰1380cm-1
处的绝对峰强，计算不同位置处的并求出ir的平均值，根据该平均值和所述线性函数关系反向推测所述溶液中三聚氰胺分子的浓度，并计算其回收率。
54.其中，以步骤2中所述线性关系为定量曲线，通过sers强度内标分析，得到水溶液或牛奶溶液中三聚氰胺的检测回收率分别可达103％和112％。
55.为更加清楚本发明提供的基于表面增强拉曼光谱的三聚氰胺定量检测方法，下面通过一具体实施方式进行详细说明。应当理解，该具体实施方式中的具体参数均为优选的结果，但不是唯一的结果，在不违背本发明技术思想的情况下，本领域技术人员可以对下述示例中的各参数进行调整，得到其它实施方式，其均应当属于本发明的保护范围。
56.通过下述方面介绍该具体实施方式：1.样品的称量；2.仪器设备；3.sers基底(银纳米颗粒聚集体)的制备；4.三聚氰胺(melamine)的检测和分析。
57.1.样品的称量:
58.(1)用天平称量18.5mg的硝酸银和22.5mg的柠檬酸钠，分别用10ml的去离子水(电阻率达到18mω
·
cm)溶解。
59.(2)用天平称量12.61mg的三聚氰胺粉末溶解于10ml的去离子水中，得到浓度为1.0
×
10-2
mol/l的三聚氰胺水溶液，并取1ml加入到9ml去离子水中稀释，得到浓度为1.0
×
10-3
mol/l的三聚氰胺水溶液。重复此步骤，直至得到浓度为1.0
×
10-8
mol/l的三聚氰胺水溶液。
60.(3)取7.5ml浓度为1.0
×
10-5
mol/l的三取氰胺水溶液，加入2.5ml去离子水稀释，得到浓度为7.5
×
10-6
mol/l的三聚氰胺水溶液。根据上述方法，分别得到浓度为5.0
×
10-6
mol/l、2.5
×
10-6
mol/l、7.5
×
10-7
mol/l、5.0
×
10-7
mol/l、2.5
×
10-7
mol/l、5.0
×
10-8
mol/
的三聚氰胺水溶液。
61.(4)用天平称量12.61mg的三聚氰胺溶解于10ml的牛奶(仅为示例，也可以是水或者其它需要的溶液)中，得到浓度为1.0
×
10-2
mol/l的三聚氰胺牛奶溶液，并取1ml加入到9ml牛奶中稀释，得到浓度为1.0
×
10-3
mol/l的三聚氰胺牛奶溶液。重复此步骤，直至得到浓度为1.0
×
10-5
mol/l的三聚氰胺牛奶溶液。
62.(5)取1ml浓度为1.0
×
10-5
mol/l的三聚氰胺牛奶溶液，用去离子水稀释，分别得到浓度为1.0
×
10-7
mol/l和7.5
×
10-7
mol/l的三聚氰胺牛奶溶液。
63.2.仪器设备：
64.洁净的带有刻度的导电玻璃，洁净的盖玻片，半微量天平(例如梅特勒-托利多mettler toledo半微量天平)、雷尼绍显微拉曼光谱仪rh13325(r-2000)、波长为532nm的激光器。
65.3.sers基底的制备：
66.图2示出制备sers基底的系统的示意图，其中包括洁净的带有刻度的导电玻璃(ito玻璃)、反应物混合液、洁净的盖玻片、波长为532nm的激光器、制备得到的ito玻璃上的纳米颗粒、以及用于观察纳米颗粒的物镜。
67.该制备过程包括：
68.(1)将洁净的导电玻璃(ito玻璃)置于拉曼光谱仪显微镜下的载物台上，通过调整焦距找到导电玻璃刻度清晰的像。
69.(2)将0.01mol/l的硝酸银和0.009mol/l柠檬酸钠，按1:1的体积比混合均匀得到反应溶液。取200μl反应溶液滴加在导电玻璃上，保证所有有刻度的地方均覆盖上混合溶液，并在反应溶液上方盖上一片洁净的盖玻片。
70.(3)调整焦距，使光汇聚在反应溶液与导电玻璃的交界面处。在该交界面处确定一位置，用波长为532nm、功率为1mw的激光照射90s，得到银纳米颗粒聚集体。图3示出银纳米颗粒聚集体的扫描电子显微镜照片。
71.(4)取下样品，用去离子水柔和的冲洗该基底，洗去未反应溶液，待其干燥后，即得到所述基底。
72.其中，以上步骤(2)-(4)需避光进行。
73.4.三聚氰胺的检测和分析：
74.(1)通过激光诱导还原制备自带内标分子(柠檬酸根)的银纳米颗粒聚集体并将之作为sers基底：将硝酸银溶液和柠檬酸钠溶液混合均匀得到反应溶液，置于导电玻璃上，在所述反应溶液上方覆盖一片盖玻片；将激光汇聚在所述反应溶液与导电玻璃的界面处，照射预设时间，使得在所述界面处通过激光诱导还原制备出银纳米颗粒聚集体；
75.(2)用去离子水冲洗所述基底，去除未反应溶液，并在室温下干燥；其中，因还原过程中用到了柠檬酸钠，故所述银纳米颗粒聚集体表面吸附有丰富的柠檬酸根离子
76.(3)将基底置于载物台上，取200μl的三聚氰胺水溶液滴加到基底上，在溶液上方覆盖上一片洁净的盖玻片。调节焦距找到基底清晰的像后，在基底上选取测量点，并选用波长为532nm的激光，激光功率为0.16mw，积分时间10s，采集分子拉曼散射光谱信号。通过该拉曼光谱，可明显地观测到位于703cm-1
处的三聚氰胺分子的特征峰和位于1380cm-1
处的柠檬酸根离子的特征峰，两处特征峰的位置不相重叠。图4示出在所述基底上检测得到的水溶
液中三聚氰胺分子(2.5
×
10-7
m)的拉曼特征峰以及三聚氰胺粉末的拉曼特征峰。
77.(4)选用波长为532nm的激光，激光功率为0.16mw，每隔1分钟采集一次(3)中所述基底的拉曼散射光谱信号，每次积分时间为1s。通过分析采集得到的信号可以发现，同一条件下，柠檬酸根离子1380cm-1
处特征峰的绝对峰强具有较强的时间稳定性。
78.(5)以2.5
×
10-7
mol/l为例，将浓度为2.5
×
10-7
mol/l的三聚氰胺水溶液滴加到所述基底上，检测基底上不同位置处三聚氰胺分子的拉曼散射光谱信号，发现，若只分析三聚氰胺分子位于703cm-1
处的特征峰，由于sers基底的不均一性或实验条件等因素的影响，其绝对峰强波动性较大，实验的相对标准偏差(rsd)为20％；此时若将柠檬酸根离子1380cm-1
处的特征峰作为强度内标(i
703 cm-1
/i
1380 cm-1
，ir)，再分析三聚氰胺分子特征峰的相对强度，则可将rsd降至8.9％；图5示出浓度为2.5
×
10-7
m的三聚氰胺水溶液拉曼散射光谱的示意图，以及基底不同位置测得的703cm-1
处三聚氰胺分子特征峰的绝对强度变化与相对强度ir的变化示意图。
79.(6)重复步骤(5)，分别检测浓度为1.0
×
10-5
mol/l、7.5
×
10-6
mol/l、5.0
×
10-6
mol/l、2.5
×
10-6
mol/l、1.0
×
10-6
mol/l、7.5
×
10-7
mol/l、5.0
×
10-7
mol/l、2.5
×
10-7
mol/l、1.0
×
10-7
mol/l、5.0
×
10-8
mol/l、1.0
×
10-8
mol/l的11种三聚氰胺水溶液的拉曼散射光谱，计算三聚氰胺分子703cm-1
处特征峰绝对峰强的rsd以及ir的rsd。可以发现，引用ir后不同浓度下三聚氰胺分子的rsd均降至10％以内，并且在10-6
m-10-8
m浓度范围内，ir与三聚氰胺浓度成良好的线性关系，以三聚氰胺浓度为横坐标，ir为纵坐标可拟合得到所述线性函数关系；图6示出不同浓度三聚氰胺分子拉曼散射光谱的示意图，图7示出由三聚氰胺分子浓度与ir拟合得到的线性函数关系示意图。
80.(7)将未知浓度的三聚氰胺水溶液与牛奶溶液分别滴加到所述基底上，在显微镜下找到基底，选用波长为532nm的激光，激光功率为0.16mw，积分时间为10s，多次采集所述基底上不同位置三聚氰胺分子的拉曼散射光谱信号，并读取三聚氰胺分子703cm-1
处特征峰的绝对峰强与柠檬酸根离子1380cm-1
处特征峰的绝对峰强，计算出ir，求取平均值。依据该值在所述线性函数关系中反向推测出溶液中三聚氰胺的浓度，并将之与其实际浓度进行比较，计算得到三聚氰胺水溶液与牛奶溶液中的检测回收率分别可达103％和112％。图8示出检测未知浓度的三聚氰胺水溶液、牛奶溶液以及空白牛奶溶液得到的的拉曼散射光谱的示意图。图9示出反向推测未知三聚氰胺水溶液及牛奶溶液中三聚氰胺浓度的示意图。图10示出推测未知浓度三聚氰胺水溶液及牛奶溶液过程中所得回收率的分析图表。
81.通过采用本发明实施例提供的基于表面增强拉曼光谱内标分析的三聚氰胺定量检测方法检测基底中三聚氰胺分子703cm-1
处特征峰的绝对峰强与柠檬酸根离子1380cm-1
处特征峰的绝对峰强，，利用吸附在银纳米颗粒聚集体上柠檬酸根离子作为内标，计算出相对强度ir，并拟合出三聚氰胺浓度与ir的线性函数关系，从而消除sers基底不均一性以及实验条件导致的待测物峰强波动我们发现在不同浓度(10-5
m-10-8
m)，ir的相对标准差(rsd)均小于10％，并且在10-6
m-10-8
m浓度范围内，ir与三聚氰胺浓度呈良好的线性关系。进而我们分别检测水溶液以及牛奶样品中的三聚氰胺含量(7.5
×
10-7
m)，检测回收率分别可达103％，112％。该内标分析法为液体中三聚氰胺的定量检测提供了可行的方案。
82.最后需要指出的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制。本领域的普通技术人员应当理解：可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对
其中部分技术特征进行等同替换；这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。