基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的检测试剂、试剂盒及检测方法与流程

本申请涉及尿素酶检测，尤其涉及基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的检测试剂、试剂盒及检测方法。

背景技术：

1、尿素酶(urease)是人和动物胃肠道及泌尿道细菌感染中常见的酶，也是人和动物中某些致病菌的致病因子之一，又是某些氮源性腐败物转化所必须具备的酶之一，还是人类首次获得晶体并发现含有ni离子的金属酶。口腔内可能含有唾液链球菌、内式放线菌、幽门螺旋杆菌等细菌产生，尿素酶会引发牙齿问题等与口腔有关的疾病，常见症状有胃炎、尿路结合等，所以口腔尿素酶被作为诊断性生物标志物，快用于评估全身疾病和早期口腔。

2、目前，尿素酶常用的检测方法有细菌培养、快速尿素酶试验及组织学检测等，以及现在的定性检测胶体金比色法。

3、常见的尿素酶检测方法有如下缺陷：

4、(1)细菌培养：从唾液分离培养出hp，敏感性较低，可能会影响检出率。

5、(2)快速尿素酶试验：需要采集活检组织，对组织有一定的损伤。

6、(3)组织学检测：组织学检测需要在病人上用活检钳取部分病变组织做检查，时间较久，有损伤。

7、(4)胶体金比色法采用胶体金的技术，形成金标记的抗原抗体复合物，该方法快速简便，容易操作，但是无法准确的判断含量。

技术实现思路

1、本申请实施例的目的在于提出一种基于干式荧光免疫层析法定量检测唾液或尿液样本中尿素酶的试剂盒，提高了检测灵敏度且检测时间短。

2、为了解决上述技术问题，本申请实施例提供一种基于干式荧光免疫层析法定量检测唾液或尿液样本中尿素酶的试剂盒，采用了如下所述的技术方案：

3、一种基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括第一组份、第二组份和第三组份，其中，所述第一组份包括荧光标记的尿素酶抗体和荧光标记的羊抗鸡igy抗体，所述第二组份包括尿素酶抗体，所述第三组份包括鸡igy抗体。

4、进一步的，所述第三组份的鸡igy抗体的浓度为1mg/ml，所述鸡igy抗体由包被液稀释。

5、进一步的，所述包被液包括蔗糖和0.01m ph7.4 pbs缓冲液。

6、进一步的，所述第一组份采用如下步骤制得：

7、将预先制备的荧光微球标记urease抗体和荧光微球标记羊抗鸡igy抗体以1:1比例充分混匀，获得所述第一组份。

8、进一步的，所述检测试剂还包括第四组份，其中，所述第四组份为样本稀释液。

9、为了解决上述技术问题，本申请实施例还提供一种使用上述的检测试剂组成的基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的试剂盒，采用了如下所述的技术方案：

10、一种使用上述的检测试剂组成的基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的试剂盒，所述试剂盒包括试纸条，所述试纸条包括固定有荧光微球标记的尿素酶抗体和荧光微球标记的羊抗鸡igy抗体的结合垫和包被膜，所述包被膜的检测区固定有尿素酶抗体构成的检测线和鸡igy抗体构成的质控线。

11、进一步的，所述试纸条还包括底板、样品垫和吸水纸，其中，所述吸水垫和所述结合垫分别叠压在所述包被膜的两端，在所述包被膜的表面形成检测区。

12、进一步的，所述样品垫为经过样品垫处理液浸泡后干燥的玻璃纤维素膜。

13、进一步的，所述样品垫处理液包括bsa、tween-20和ph值为8.0 0.2m 的硼酸-硼砂缓冲液。

14、为了解决上述技术问题，本申请实施例还提供一种应用上述的试剂盒的基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的检测方法，采用了如下所述的技术方案：

15、一种应用上述的试剂盒的基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的检测方法，包括如下步骤：

16、将待测样本加入样本稀释液中混合，获得混合样本，其中，待测样本为尿液样本或唾液样本；

17、将所述混合样本加入到检测卡的样品垫上；

18、将所述检测卡放入检测仪中，获得检测仪输出的检测结果。

19、与现有技术相比，本申请实施例主要有以下有益效果：

20、本申请通过荧光微球标记抗体，提高检测灵敏度，降低非特异性结合，解决了urease检测灵敏度差的问题，并且操作流程简单、检测时间短、检测成本较低。另外，该试剂盒制备方法简单，可以实现批量生产，有利于大规模推广应用，

技术特征：

1.一种基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括第一组份、第二组份和第三组份，其中，所述第一组份包括荧光标记的尿素酶抗体和荧光标记的羊抗鸡igy抗体，所述第二组份包括尿素酶抗体，所述第三组份包括鸡igy抗体。

2.根据权利要求1所述的基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的检测试剂，其特征在于，所述第三组份的鸡igy抗体的浓度为1mg/ml，所述鸡igy抗体由包被液稀释。

3.根据权利要求2所述的基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的检测试剂，其特征在于，所述包被液包括蔗糖和0.01m ph7.4 pbs缓冲液。

4.根据权利要求1所述的基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的检测试剂，其特征在于，所述第一组份采用如下步骤制得：

5.根据权利要求1所述的基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂还包括第四组份，其中，所述第四组份为样本稀释液。

6.一种使用权利要求1所述的检测试剂组成的基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试纸条，所述试纸条包括固定有荧光微球标记的尿素酶抗体和荧光微球标记的羊抗鸡igy抗体的结合垫和包被膜，所述包被膜的检测区固定有尿素酶抗体构成的检测线和鸡igy抗体构成的质控线。

7.根据权利要求6所述的基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的试剂盒，其特征在于，所述试纸条还包括底板、样品垫和吸水纸，其中，所述吸水垫和所述结合垫分别叠压在所述包被膜的两端，在所述包被膜的表面形成检测区。

8.根据权利要求7所述的基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的试剂盒，其特征在于，所述样品垫为经过样品垫处理液浸泡后干燥的玻璃纤维素膜。

9.根据权利要求8所述的基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的试剂盒，其特征在于，所述样品垫处理液包括bsa、tween-20和ph值为8.0 0.2m的硼酸-硼砂缓冲液。

10.一种应用权利要求6所述的试剂盒基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

技术总结
本申请实施例属于尿素酶检测技术领域，涉及一种基于干式荧光免疫层析法定量检测尿素酶的检测试剂、试剂盒及检测方法，所述检测试剂包括第一组份、第二组份和第三组份，其中，所述第一组份包括荧光标记的尿素酶抗体和荧光标记的羊抗鸡IgY抗体，所述第二组份包括尿素酶抗体，所述第三组份包括鸡IgY抗体。本申请提高了检测灵敏度且检测时间短。

技术研发人员：蒋析文,齐文闯,刘双,潘秀华,杨珍珍,李俊玉
受保护的技术使用者：广州达安基因股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14