一种人参属中药差异成分的检测方法及其应用

本发明关于中药分析，尤其涉及一种人参属中药差异成分的检测方法及其应用。

背景技术：

1、人参属中药具有广阔的市场前景和较高的市场价值，是常用的中药材。不同的人参属中药含有不同的成分，使其具有不同的功效，同一种人参属中药的不同部位的成分也同样有差别。因此，对差异成分的准确检查有利于深入分析的进行。

2、近年来，蛋白质组学、代谢组学和中医药分析等领域的迅速发展使得人们对复杂样品的化学成分了解更深入。由于峰容量和选择性有限等限制，仅仅使用传统的一维色谱法(1d-lc)无法揭示复杂样品的全部化学成分。二维液相色谱法能够提供大的分离能力(峰容量)和选择性，与质谱法结合后可以在任何给定时间内将更简单的化合物混合物引入离子源，通过减少基质效应改进定量分析。在线全二维液相色谱是复杂样品分析的理想模式，但由于分析速度不足，故在实际应用中仍受到一定的限制。

技术实现思路

1、针对以上技术问题，本发明提供人参属中药差异成分的检测方法，该检测方法用在线全二维液相色谱与四极杆飞行时间质谱联用检测人参属中药中的差异成分，能够最大程度的获得差异成分的信息，能够用于分析、了解人参属中药的成分差异。

2、为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

3、一种人参属中药差异成分的检测方法，用在线全二维液相色谱与四极杆飞行时间质谱联用检测人参属中药中的差异成分。

4、本发明采用在线全二维液相色谱，其在线模式下的自动性能可避免样品污染、变质和人为错误，全面分离可以获得最大程度的信息。本发明将在线全二维液相色谱与四极杆飞行时间质谱结合，联用表征的新颖非靶标代谢组学分析技术方法，在人参属中药成分差异的检测中，能够对大规模、多批次的人参属中药进行成分差异分析，有助于深入了解人参属中药成分差异。

5、优选地，所述在线全二维液相色谱中第一维的色谱条件为：

6、色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；

7、流动相a为含0.1％v/v甲酸的水，流动相b为含0.1％v/v甲酸的乙腈，线性梯度洗脱的程序如下：

8、

9、流速：0.08～0.12ml/min；

10、所述在线全二维液相色谱中第二维的色谱条件为：

11、色谱柱：氰基柱或反相色谱柱；

12、流动相a为水，流动相b为乙腈；

13、rplc从动洗脱梯度条件为：

14、

15、

16、本发明所采用的流动相、色谱柱以及线性洗脱程序能够获得较高的分离度和分离出的离子总数，有利于差异成分的有效检出。

17、优选地，第一维的色谱条件中，所述色谱柱为xcharge c18，第二维的色谱条件中，所述色谱柱为hss cyano，或第一维的色谱条件中，所述色谱柱为mixed-mode c18/cation，第二维的色谱条件中，所述色谱柱为xbridge beh c8，或第一维的色谱条件中，所述色谱柱为mixed-mode c18/cation，第二维的色谱条件中，所述色谱柱为kinetex xb-c18。在本发明的色谱条件下，采用上述色谱柱组合可达到更好的分离度和离子总数。

18、优选地，所述柱温为40～45℃。

19、进一步优选地，当第一维的色谱条件中所述色谱柱为xcharge c18，第二维的色谱条件中所述色谱柱为hss cyano时，柱温为40℃；第一维的色谱条件中所述色谱柱为mixed-mode c18/cation，第二维的色谱条件中所述色谱柱为xbridge beh c8时，柱温为45℃；第一维的色谱条件中所述色谱柱为mixed-mode c18/cation，第二维的色谱条件中所述色谱柱为kinetex xb-c18时，柱温为40℃。

20、优选地，所述流速为2ml/min。

21、优选地，所述质谱采用6550qtof四极杆飞行时间质谱仪。

22、优选地，所述质谱的离子源为电喷雾离子源，在负离子模式下采集数据；所述离子源的参数包括：碰撞电压：350v；喷嘴电压：2000v；毛细管电压：4000v。

23、优选地，所述质谱的离子源为电喷雾离子源，在负离子模式下采集数据；所述离子源的参数还包括：干燥气温度为200℃；鞘气温度：350℃；干燥气体流量：12l/min；鞘气压力：40psi；质谱扫描范围m/z 250～1500；ms采集速率分别是3spectra/s和333.3ms/spectrum。

24、以及，本发明还提供上述人参属中药差异成分的检测方法在人参属中药化学成分差异鉴别中的应用。以上检测方法能够实现大规模、多批次人参属药材中差异成分的高效采集，从而能够用于对人参属中药化学成分差异鉴别。

25、本发明的有益效果在于：本发明在四极杆飞行时间质谱上构建ms模式采集的方法，结合在线全二维超高效液相色谱分离，联用表征的新颖非靶标代谢组学分析技术，能够应用于大规模多批次人参属中药成分差异分析。

技术特征：

1.一种人参属中药差异成分的检测方法，其特征在于，用在线全二维液相色谱与四极杆飞行时间质谱联用检测人参属中药中的差异成分。

2.根据权利要求1所述的人参属中药差异成分的检测方法，其特征在于，所述在线全二维液相色谱中第一维的色谱条件为：

3.根据权利要求2所述的人参属中药差异成分的检测方法，其特征在于，第一维的色谱条件中，所述色谱柱为xcharge c18，第二维的色谱条件中，所述色谱柱为hss cyano；或

4.根据权利要求3所述的人参属中药差异成分的检测方法，其特征在于，柱温为40～45℃。

5.根据权利要求4所述的人参属中药差异成分的检测方法，其特征在于，第一维的色谱条件中所述色谱柱为xcharge c18，第二维的色谱条件中所述色谱柱为hss cyano时，柱温为40℃；

6.根据权利要求3所述的人参属中药差异成分的检测方法，其特征在于，所述流速为2ml/min。

7.根据权利要求1～6任一项所述的人参属中药差异成分的检测方法，其特征在于，所述四极杆飞行时间质谱采用6550qtof四极杆飞行时间质谱仪。

8.根据权利要求7所述的人参属中药差异成分的检测方法，其特征在于，所述质谱的离子源为电喷雾离子源，在负离子模式下采集数据；所述离子源的参数包括：碰撞电压：350v；喷嘴电压：2000v；毛细管电压：4000v。

9.根据权利要求8所述的人参属中药差异成分的检测方法，其特征在于，所述离子源的参数还包括：干燥气温度为200℃；鞘气温度：350℃；干燥气体流量：12l/min；鞘气压力：40psi；；质谱扫描范围m/z 250～1500；ms采集速率分别是3spectra/s和333.3ms/spectrum。

10.权利要求1～9任一项所述的人参属中药差异成分的检测方法在人参属中药化学成分差异鉴别中的应用。

技术总结
本发明关于中药分析技术领域，尤其涉及一种人参属中药差异成分的检测方法及其应用。本发明采用在线全二维液相色谱与四极杆飞行时间质谱联用技术进行代谢物表征，并结合非靶标代谢组学技术，在人参属中药成分差异的检测中，能够对大规模、多批次的人参属中药进行成分差异分析，有助于深入了解人参属中药成分差异。

技术研发人员：杨文志,李雪,胡莹,王思淼,姜美婷,徐晓艳,刘美玉,王洪达
受保护的技术使用者：天津中医药大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14