一种与缺氧微环境相关的人结直肠癌转移的预测性生物标志物TBC1D8及其应用的制作方法

本发明涉及一种tbc1域家族成员，涉及人结直肠癌预后的预测性生物标志物tbc1d8，属于生物医学。

背景技术：

1、结直肠癌(crc)是胃肠系统的一种肿瘤，在恶性肿瘤中发病率排名第三，在癌症中致死率排名第二。其发病机制似乎涉及多种因素和步骤，包括遗传、饮食和生活习惯。统计显示，该肿瘤经常复发和转移，特别是扩散到肝脏、肺、骨、卵巢、腹膜，这类病人的五年生存率约为10％。crc的治疗方法包括化疗、手术、放疗和分子靶向治疗。crc的分子靶向治疗已经成为一个热门话题。分子分层治疗方案的数量正在增加，使用生物标志物来指导预测和治疗决策也在增加。因此，确定治疗crc的新型标志物和靶点对于改善疾病预后是必要的。

2、tbc(tre-2/bub2/cdc16，tbc)结构域是一个保守的氨基酸序列，由肿瘤基因tre-2和酵母细胞循环调节器基因bub2和cdc16的结构域组成。tbc-结构域家族成员具有强烈的保守性，同源性高。tbc结构域常常与其他与细胞膜功能相关的结构域串联在一起，这表明tbc结构域蛋白的生物学功能与细胞膜密切相关，并可能介导癌症或其他疾病的发生和发展，事实上，已经发现其中一些蛋白与肿瘤的发展有关联。在一些肺癌中已经观察到高的tbc1d7水平，并与病人的预后不佳相关。在肺癌细胞中对tbc1d7的rnai干扰抑制了细胞的生长；相反，tbc1d7的过度表达促进了肺癌细胞的增殖并促进了小鼠肿瘤的形成。tbc1d16似乎也是黑色素瘤的驱动基因，其过表达可以促进细胞生长和基因表达，影响囊泡运输，进一步影响黑色素瘤的发展。有研究表明，tbc1d8在侵袭性卵巢癌细胞中明显上调，推动了卵巢癌的发生和代谢重编程。然而，关于其在crc中的作用的研究却很少。本研究试图填补这一空白。

技术实现思路

1、发明目的：本发明所要解决的技术问题是克服现有临床诊断中对结直肠癌患者预后判断的生物标志物准确性低、对结直肠癌患者转移预判能力的不足。通过对tbc1d8深入研究，本发明通过大量的转录组数据筛选和临床标本及实验验证，表明tbc1d8可作为人结直肠癌转移的预测性生物标志物，或者作为人结直肠癌或人结直肠癌转移的预测或筛查的试剂盒成分。

2、技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

3、一种人结直肠癌或人结直肠癌转移的预测性生物标志物，其特征在于，它属于细胞色素c氧化酶家族gene cards gene symbol:cox4i2。

4、一种人结直肠癌免疫治疗反应性的预测性生物标志物，其特征在于，它属于tbc1域家族成员gene cards gene symbol:tbc1d8。

5、一种人结直肠癌预后的预测或免疫治疗预后评估的试剂盒，它包括tbc1d8蛋白。

6、本发明所述的tbc1d8蛋白的氨基酸序列为：

7、met-thr-leu-lys-pro-glu-glu-val-leu-leu-lys-asn-ala-leu-lys-leu-trp-val-thr-gln-lys-ser-ser-cys-tyr-phe-ile-leu-gln-arg-arg-arg-gly-his-gly-glu-gly-gly-gly-arg-leu-thr-gly-arg-leu-val-gly-ala-leu-asp-ala-val-leu-asp-ser-asn-ala-arg-val-ala-pro-phe-arg-ile-leu-leu-gln-val-pro-gly-ser-gln-val-tyr-ser-pro-ile-ala-cys-gly-ala-thr-leu-glu-glu-ile-asn-gln-his-trp-asp-trp-leu-glu-gln-asn-leu-leu-his-thr-leu-ser-val-phe-asp-asn-lys-asp-asp-ile-ala-ser-phe-val-lys-gly-lys-val-lys-ala-leu-ile-ala-glu-glu-thr-ser-ser-arg-leu-ala-glu-gln-glu-glu-glu-pro-glu-lys-phe-arg-glu-ala-leu-val-lys-phe-glu-ala-arg-phe-asn-phe-pro-glu-ala-glu-lys-leu-val-thr-tyr-tyr-ser-cys-cys-cys-trp-lys-gly-arg-val-pro-arg-gln-gly-trp-leu-tyr-leu-ser-ile-asn-his-leu-cys-phe-tyr-ser-phe-phe-leu-gly-lys-glu-leu-lys-leu-val-val-pro-trp-val-asp-ile-gln-lys-leu-glu-arg-thr-ser-asn-val-phe-leu-thr-asp-thr-ile-arg-ile-thr-thr-gln-asn-lys-glu-arg-asp-phe-ser-met-phe-leu-asn-leu-asp-glu-val-phe-lys-val-met-glu-gln-leu-ala-asp-val-thr-leu-arg-arg-leu-leu-asp-asn-glu-val-phe-asp-leu-asp-pro-asp-leu-gln-glu-pro-ser-gln-ile-thr-lys-arg-asp-leu-glu-ala-arg-ala-gln-asn-glu-phe-phe-arg-ala-phe-phe-arg-leu-pro-arg-lys-glu-lys-leu-his-ala-val-val-asp-cys-ser-leu-trp-thr-pro-phe-ser-arg-cys-his-thr-thr-gly-arg-met-phe-ala-ser-asp-ser-tyr-ile-cys-phe-ala-ser-arg-glu-asp-gly-cys-cys-lys-ile-ile-leu-pro-leu-arg-glu-val-val-ser-ile-glu-lys-met-glu-asp-thr-ser-leu-leu-pro-his-pro-ile-ile-val-ser-ile-arg-ser-lys-val-ala-phe-gln-phe-ile-glu-leu-arg-asp-arg-asp-ser-leu-val-glu-ala-leu-leu-ala-arg-leu-lys-gln-val-his-ala-asn-his-pro-val-his-tyr-asp-thr-ser-ala-asp-asp-asp-met-ala-ser-leu-val-phe-his-ser-thr-ser-met-cys-ser-asp-his-arg-phe-gly-asp-leu-glu-met-met-ser-ser-gln-asn-ser-glu-glu-ser-glu-lys-glu-lys-ser-pro-leu-met-his-pro-asp-ala-leu-val-thr-ala-phe-gln-gln-ser-gly-ser-gln-ser-pro-asp-ser-arg-met-ser-arg-glu-gln-ile-lys-ile-ser-leu-trp-asn-asp-his-phe-val-glu-tyr-gly-arg-thr-val-cys-met-phe-arg-thr-glu-lys-ile-arg-lys-leu-val-ala-met-gly-ile-pro-glu。

8、有益效果：

9、本发明通过大量实验筛选，通过对tbc1d8蛋白深入研究，然而，到目前为止，关于tbc结构域与肿瘤之间关系的研究是有限的。在这项研究中，本发明通过最小绝对收缩和选择算子(lasso)和cox回归分析确定了tbc1结构域家族成员8(tbc1d8)在结直肠癌(crc)中的致癌基因作用，显示tbc1d8可能独立预测crc的结局。功能富集和单细胞分析显示，tbc1d8水平与缺氧有关，实验也证实在敲减tbc1d8后肠癌细胞的恶性表型被显著抑制，细胞干性相关指标减弱，tbc1d8水平还与m2巨噬细胞浸润呈正相关，共培养实验证实，tbc1d8敲减后与巨噬细胞建立的共配养模型也显示，tbc1d8低表达可以显著抑制免疫抑制性m2巨噬细胞的浸润。综上所述，这些结果表明，tbc1d8基因参与了结直肠癌的发生，其潜在的分子机制可能包括缺氧相关的和免疫抑制性细胞浸润。因此，tbc1d8蛋白可作为直肠癌预后的预测或免疫治疗筛查的标志物，也可以作为治疗靶点，具有重要的应用价值。