一种鉴别猕猴桃雌雄株的方法

15min、用体积浓度为95％的乙醇溶液脱水10-15min，用无水乙醇脱水3次，每次10-15min，最后用异戊醇溶液脱水3次，每次10-15min。
18.优选的，s5中，所述干燥具体为：在冷冻干燥机内使温度降至-30℃预冻1-1.5h，然后抽真空使冻干箱内压力为60pa，干燥6-8h，冻干箱内压力到65kpa时将温度升至30℃持续1-1.5h，最后再放入二氧化碳临界点干燥仪直至完全干燥。
19.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明对猕猴桃叶片进行处理，利用扫描电镜对猕猴桃叶片上的表皮进行微形态观察，通过细胞表面是否具有突起及细胞间间隙能完全区分开猕猴桃雌雄株个体，本发明的鉴别方法适用于毛花猕猴桃、中华猕猴桃、美味猕猴桃，通用性好、操作简单、稳定性好、准确性高。
附图说明
20.图1为毛花猕猴桃的叶片腹面上表皮细胞的扫描电镜图，a为雌株，b为雄株；
21.图2为中华猕猴桃的叶片腹面上表皮细胞的扫描电镜图，a为雌株，b为雄株；
22.图3为美味猕猴桃的叶片腹面上表皮细胞的扫描电镜图，a为雌株，b为雄株。
具体实施方式
23.下面对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明各实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
24.实施例1
25.s1、取材：选取5株毛花猕猴桃，每株取三个叶片，用纯净水将叶片两侧清洗干净，在每个叶片腹面用双面刀片取五个2mm
×
5mm的片段。
26.s2、固定：加入质量分数为2.5％(ph＝6.8)的戊二醛固定，使叶片沉于液面以下后，置于4℃冰箱中固定4h。
27.s3、冲洗：用质量分数为0.1％(ph＝6.8)的磷酸缓冲液冲洗三次，每次15min。
28.s4、脱水：分别用体积浓度为30％、50％、70％、80％、95％的乙醇溶液脱水10min，用体积浓度为95％的乙醇溶液脱水15min；用无水乙醇脱水3次，每次15min；最后用异戊醇溶液处理3次，每次15min。
29.s5、将处理的材料放在冷冻干燥机内使温度降至-30℃预冻1h，然后抽真空使冻干箱内压力为60pa进行干燥6h，冻干箱内压力到65kpa时将温度升至30℃持续1h，最后再放入二氧化碳临界点干燥仪，在37℃，72.8个大气压的条件下干燥至完全干燥。
30.s6、粘样：将猕猴桃叶上表皮观察面向上用导电胶带粘贴在扫描电镜样品台上。
31.s7、镀膜：用jfc-1600型离子溅射镀膜仪在样品表面镀上一层15nm厚的金膜。将处理好的样品放入样品盒中，在扫描电镜下观察。
32.s8、记录分析叶片表皮微形态，叶片腹面上表皮细胞表面有突起且细胞间隙线条轮廓模糊为雌株，细胞表面光滑且细胞间隙线条轮廓清晰为雄株。
33.实施例2
34.s1、取材：选取5株中华猕猴桃，每株取三个叶片，用纯净水将叶片两侧清洗干净，
在每个叶片腹面用双面刀片取五个3mm
×
5mm的片段。
35.s2、固定：加入质量分数为2.5％(ph＝6.8)的戊二醛固定，使叶片沉于液面以下后，置于4℃冰箱中固定3.5h。
36.s3、冲洗：用质量分数为0.1％(ph＝6.8)的磷酸缓冲液冲洗三次，每次10min。
37.s4、脱水：分别用体积浓度为30％、50％、70％、80％、95％的乙醇溶液脱水15min，用体积浓度为95％的乙醇溶液脱水10min；用无水乙醇脱水3次，每次10min；最后用异戊醇溶液处理3次，每次10min。
38.s5、将处理的材料放在冷冻干燥机内使温度降至-30℃预冻1.5h，然后抽真空使冻干箱内压力为60pa进行干燥8h，冻干箱内压力到65kpa时将温度升至30℃持续1.5h，最后再放入二氧化碳临界点干燥仪，在38℃，72.8个大气压的条件下干燥至完全干燥。
39.s6、粘样：将猕猴桃叶上表皮观察面向上用导电胶带粘贴在扫描电镜样品台上。
40.s7、镀膜：用jfc-1600型离子溅射镀膜仪在样品表面镀上一层15nm厚的铂膜。将处理好的样品放入样品盒中，在扫描电镜下观察。
41.s8、记录分析叶片表皮细胞微形态，叶片腹面上表皮细胞表面有突起且细胞间隙线条轮廓模糊为雌株，细胞表面光滑且细胞间隙线条轮廓清晰为雄株。
42.实施例3
43.s1、取材：选取5株美味猕猴桃，每株取三个叶片，用纯净水将叶片两侧清洗干净，在每个叶片双面刀片取五个2mm
×
6mm的片段。
44.s2、固定：加入质量分数为2.5％(ph＝6.8)的戊二醛固定，使叶片沉于液面以下后，置于4℃冰箱中固定4h。
45.s3、冲洗：用质量分数为0.1％(ph＝6.8)的磷酸缓冲液冲洗三次，每次13min。
46.s4、脱水：分别用体积浓度为30％、50％、70％、80％、95％的乙醇溶液分别脱水12min，用体积浓度为95％的乙醇溶液脱水13min；用无水乙醇脱水3次，每次13min；最后用异戊醇溶液处理3次，每次13min。
47.s5、将处理的材料放在冷冻干燥机内使温度降至-30℃预冻1.2h，然后抽真空使冻干箱内压力为60pa进行干燥7h，冻干箱内压力到65kpa时将温度升至30℃持续1.3h，最后再放入二氧化碳临界点干燥仪，在36℃，72.8个大气压的条件下干燥至完全干燥。
48.s6、粘样：将猕猴桃叶上表皮观察面向上用导电胶带粘贴在扫描电镜样品台上。
49.s7、镀膜：用jfc-1600型离子溅射镀膜仪在样品表面镀上一层15nm厚的金膜。将处理好的样品放入样品盒中，在扫描电镜下观察。
50.s8、记录分析叶片表皮细胞微形态，叶片腹面上表皮细胞表面有突起且细胞间隙线条轮廓模糊为雌株，细胞表面光滑且细胞间隙线条轮廓清晰为雄株。
51.如图1所示，毛花猕猴桃雌株叶片表皮细胞乳突状细胞，细胞间间隙模糊，细胞表面具有明显的附着物，雄株叶片表皮细胞乳突状细胞，细胞间间隙明显，细胞表面无附着物。
52.如图2所示，中华猕猴桃雌株叶片表皮细胞长椭圆或不规则型，细胞间间隙不明显，细胞表面凹凸明显，雄株叶片表皮细胞长椭圆或不规则型，细胞间间隙明显，细胞表面无明显突起。
53.如图3所示，美味猕猴桃雌株细胞长椭圆或不规则型，细胞间间隙不清楚，细胞表
面凹凸明显，雄株细胞长椭圆或不规则型，细胞间间隙清楚，细胞表面光滑。
54.由上述结果可得，猕猴桃雌株叶片上表皮为乳状突或长椭圆型或不规则型细胞，表皮细胞表面粗糙，密集颗粒状凸起物，细胞间间隙模糊，雄株叶片上表皮为乳状突或长椭圆型或不规则型细胞，细胞表面光滑，无明显其它附着物，细胞间间隙清楚，验证了本发明的鉴别方法，本发明的鉴别方法适用于毛花猕猴桃、中华猕猴桃、美味猕猴桃，通用性好、操作简单、稳定性好、准确性高。
55.需要说明的是，本发明权利要求书中涉及数值范围时，应理解为每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用，为了防止赘述，本发明描述了优选的实施例。
56.尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
57.显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。