小儿氨酚黄那敏颗粒中有关物质的测定方法与流程

1.本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种小儿氨酚黄那敏颗粒中有关物质的测定方法。


背景技术：

2.小儿氨酚黄那敏颗粒曾用名为小儿速效感冒颗粒、小儿速效感冒灵等。该品种为复方制剂，每袋含对乙酰氨基酚125毫克，马来酸氯苯那敏0.5毫克，人工牛黄5毫克。属于复方类感冒药，主要用于感冒引起的头痛、发热、咽喉痛、鼻塞等。不良反应有时有轻度头晕、乏力、恶心、上腹不适、口干、食欲缺乏和皮疹等，可自行恢复。小儿氨酚黄那敏颗粒现行标准为《国家药品标准》化学药品地方标准上升国家标准第三册。现行标准及公示标准均未对有关物质进行控制，由于本品处方中含有大量的糖及对乙酰氨基酚，对乙酰氨基酚如暴露在潮湿的条件下会水解生成有毒的降解产物对氨基酚，然后进一步发生氧化降解等，而本品处方中大量的蔗糖给样品带来易受潮的风险，亦带来质量变化的风险。
3.有关物质是指在生产过程中带入的起始原料、中间体、聚合体、副反应产物，以及贮藏过程中的降解产物等。有关物质与药品质量、安全性及疗效密切相关，含有杂质的化学药物在人体内的药理活性、代谢过程及毒性存在着显著的差异；因此，药物有关物质的控制极其重要。但小儿氨酚黄那敏颗粒的现行标准及公示标准均未对有关物质进行控制，而关于小儿氨酚黄那敏颗粒中有关物质的检测方法方面的研究报道也较少。检索到相关的文献为：1、题名为：《hplc法测定小儿氨酚黄那敏颗粒有关物质》（作者：杨春梅）的公开文献中报道了一种采用hplc法测定小儿氨酚黄那敏颗粒中对氨基酚含量的方法；2、题名为：《hplc法测定小儿氨酚黄那敏颗粒的有关物质》（作者：刘晓颖、肖雪）的公开文献中报道了一种利用hplc方法对小儿氨酚黄那敏颗粒中的有关物质进行测定的方法。
4.但上述两份文献报道的方法都仅是测定小儿氨酚黄那敏颗粒中对氨基酚的含量，对于小儿氨酚黄那敏颗粒中其他的有关物质成分均未进行检测，所公开的方法未能全面、有效的对小儿氨酚黄那敏颗粒中的有关物质进行测定，不利于产品的质量控制。因此，建立一种小儿氨酚黄那敏颗粒中有关物质的测定方法，全面、有效的对小儿氨酚黄那敏颗粒中所含的有关物质（对氨基酚、对氯苯乙酰胺以及其他有关物质）进行测定，对控制小儿氨酚黄那敏颗粒的药品质量，确保小儿氨酚黄那敏颗粒的用药安全具有重要的意义。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于针对现有技术的不足而提供的一种小儿氨酚黄那敏颗粒中有关物质的测定方法，该方法操作简便，灵敏度高，专属性好，结果准确，可同时对小儿氨酚黄那敏颗粒中对氨基酚、对氯苯乙酰胺以及其他有关物质进行全面、有效的测定，采用该方法可有效控制小儿氨酚黄那敏颗粒的药品质量和提高其质量水平，确保临床用药安全。
6.为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：一种小儿氨酚黄那敏颗粒中有关物质的测定方法，采用梯度洗脱hplc法对小儿氨
酚黄那敏颗粒中的有关物质进行测定，具体包括以下步骤：（1）色谱条件：色谱柱: agilent hc-c18 (250mm
×
4.6mm，5μm)，以甲醇为流动相a，以磷酸缓冲液为流动相b，进行梯度洗脱；梯度洗脱程序：0-15分钟，a 10%，15-20分钟，a 10
→
65，20-32分钟，a 65%，32-34分钟，a 65
→
10,34-42分钟，a 10%；进样量为50 μl，紫外检测器，检测波长：对氨基酚232nm、对氯苯乙酰胺248nm、其他有关物质245nm；（2）溶液制备：对照品溶液（临用新配）：分别取对氨基酚、对氯苯乙酰胺、对乙酰氨基酚对照品使用流动相配制成浓度分别为5、0.25、2.5μg/ml的混合对照品溶液，其中对氨基酚、对氯苯乙酰胺先分别使用适量乙醇溶解制成储备液，再使用流动相进行稀释；供试品溶液（临用新配）：取本品10 袋内容物，精密称定，研细，称取相当于50mg对乙酰氨基酚的量，置10ml量瓶中，加入流动相超声使溶解，冷至室温，用流动相稀释至刻度，摇匀，以10000rpm离心10分钟，取上清液，即得；上述对照品溶液和供试品溶液的制备中，所用的流动相为流动相a和b按照10:90的体积比进行混合得到的溶液；（3）测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别注入液相色谱仪，按上述的色谱条件进行测定，记录色谱图；供试品溶液中如检出对氨基酚、对氯苯乙酰胺，以对照品外标法计算，其他杂质含量以对乙酰氨基酚对照品外标法计算；对氨基酚、对氯苯乙酰胺、其他最大单个杂质不能过对乙酰氨基酚标示量的0.1%、0.1%、0.2%，杂质总量不能过对乙酰氨基酚标示量的0.5%。
7.上述的小儿氨酚黄那敏颗粒中有关物质的测定方法，步骤（1）中所述的磷酸缓冲液的配制方法为：称取磷酸氢二钾3.4g, 加 0.05%三乙胺, 加水 1000ml溶解，磷酸调 ph=6.5。
8.本发明的有益效果为：小儿氨酚黄那敏颗粒为儿科常用药，临床用量较大，由于患者年龄较小，对杂质的敏感度更高。目前有关本品的文献较多的着眼于含量，而对有关物质的研究较少，同时测定特定杂质及其他杂质的文献更为少见。本发明首次建立了同时测定小儿氨酚黄那敏颗粒中对氨基酚、对氯苯乙酰胺、其他杂质的有关物质测定方法，该方法操作简便，结果准确，可灵敏、快速的同时对小儿氨酚黄那敏颗粒中的对氨基酚、对氯苯乙酰胺以及其他有关物质进行全面、有效的测定，弥补了该品种质量标准的缺项。
9.采用本发明方法对小儿氨酚黄那敏颗粒中的有关物质进行测定可有效控制小儿氨酚黄那敏颗粒的药品质量和提高其质量水平，保证生产工艺可控，确保临床用药安全，为产品疗效稳定确切提供了可靠保障。本发明通过方法验证证明此方法在考察浓度范围内的线性关系良好，回收率符合规定，该方法操作简便，灵敏度高，专属性好，结果准确，可以作为小儿氨酚黄那敏颗粒有关物质的质量控制方法，是现有质量标准的有力补充。
附图说明
10.图1 专属性实验阴性样品溶液色谱图；图2 对照品溶液色谱图，图中1-对氨基酚，2-对乙酰氨基酚，3-对氯苯乙酰胺；图3小儿氨酚黄那敏颗粒供试品溶液色谱图；
图4 专属性实验氧化破坏供试液色谱图；图5 专属性实验酸破坏供试液色谱图；图6 专属性实验碱破坏供试液色谱图；图7 专属性实验高温破坏供试液色谱图；图8 专属性实验光照破坏供试液色谱图。
具体实施方式
11.下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步的阐述，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件。
12.1.一种小儿氨酚黄那敏颗粒中有关物质的测定方法，采用梯度洗脱hplc法对小儿氨酚黄那敏颗粒中的有关物质进行测定，具体包括以下步骤：（1）色谱条件：色谱柱: agilent hc-c18 (250mm
×
4.6mm，5μm)，以甲醇为流动相a，以磷酸缓冲液(称取磷酸氢二钾3.4g, 加 0.05%三乙胺, 加水 1000ml溶解, 磷酸调 ph=6.5)为流动相b，进行梯度洗脱；梯度洗脱程序：0-15分钟，a 10%，15-20分钟，a 10
→
65，20-32分钟，a 65%，32-34分钟，a 65
→
10,34-42分钟，a 10%；进样量为50 μl，紫外检测器，检测波长：对氨基酚232nm、对氯苯乙酰胺248nm、其他有关物质245nm；（2）溶液制备：对照品溶液（临用新配）：分别取对氨基酚、对氯苯乙酰胺、对乙酰氨基酚对照品使用流动相配制成浓度分别为5、0.25、2.5μg/ml的混合对照品溶液，其中对氨基酚、对氯苯乙酰胺先分别使用适量乙醇溶解制成储备液，再使用流动相进行稀释；供试品溶液（临用新配）：取本品10 袋内容物，精密称定，研细，称取相当于50mg对乙酰氨基酚的量，置10ml量瓶中，加入流动相超声使溶解，冷至室温，用流动相稀释至刻度，摇匀，以10000rpm离心10分钟，取上清液，即得；上述对照品溶液和供试品溶液的制备中，所用的流动相为流动相a和b按照10:90的体积比进行混合得到的溶液；（3）测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别注入液相色谱仪，按上述的色谱条件进行测定，记录色谱图；供试品溶液中如检出对氨基酚、对氯苯乙酰胺，以对照品外标法计算，其他杂质含量以对乙酰氨基酚对照品外标法计算；对氨基酚、对氯苯乙酰胺、其他最大单个杂质不能过对乙酰氨基酚标示量的0.1%、0.1%、0.2%，杂质总量不能过对乙酰氨基酚标示量的0.5%。
13.2.方法学验证本发明所建立的方法经方法学研究工作，包括专属性考察（空白辅料、破坏性实验）、线性关系考察、进样精密度、检测限及稳定性等，验证结果显示该方法简单、准确、灵敏，可用于控制本品质量及提升本品质量。
14.2.1 专属性实验 按照处方配制本品不含主成分的空白辅料溶液、取本品分别进行氧化、酸、碱、高温、光照破坏实验，结果阴性样品对杂质的测定无干扰。各破坏出的杂质均能与主峰分开，说明本方法专属性良好。图谱见附图1～8（245nm为代表）。
15.2.2 波长选择
提取各物质的紫外光谱图，结果对氨基酚、对氯苯乙酰胺、对乙酰氨基酚、分别在232、248、245nm有最大吸收，故选择上述波长作为测定波长。
16.2.3 线性关系考察配制各组分的系列浓度溶液，各组分的线性关系结果见表 1，各组分在对应浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。
17.2.4 精密度试验取对照品溶液平行测定 6 份，计算对氨基酚、对氯苯乙酰胺、对乙酰氨基酚峰面积的 rsd，分别为1.24%、0.88%、0.0329%（n＝6），表明色谱系统精密度良好。
18.2.5稳定性试验精密吸取一定浓度的对照品溶液，于一定间隔时间分别测定峰面积。结果对氯苯乙酰胺、对乙酰氨基酚分别在15、21小时内稳定（rsd分别为0.20%、0.80%），对氨基酚不稳定（峰面积不断减小），故对照品溶液、供试品溶液均临用新配。
19.2.6重复性试验取同一批样品，平行制备6 份供试液测定。结果对氨基酚含量、杂质总量的rsd分别为2.01%、0.48%，表明重复性良好。
20.2.7 回收率试验往空白样品中加入各物质，制备供试液，计算回收率，结果见表2，表明回收率良好。
21.2.8 检出限定量限的测定将对照品溶液逐步稀释测定，以 s/n ≈ 3 确定检出限、s/n ≈ 10 确定定量限，结果对乙酰氨基酚、对氨基酚、对氯苯乙酰胺的检出限分别为0.032、0.0075、0.0081μg
·
ml
－1
，定量限分别为0.11、0.025、0.027μg
·
ml
－1
。
22.3.样品测定取小儿氨酚黄那敏颗粒共10批样品，按照本发明小儿氨酚黄那敏颗粒中有关物质的测定方法测定，测定结果见表3。从结果可见，样品1、3、5杂质含量较高，其中样品1所含对氨基酚杂质含量高于限度，样品5对氨基酚、其他最大单个杂质、杂质总量均高于限度，说明样品1、5质量较差。
23.4.本发明的创新性4.1首次建立同时测定小儿氨酚黄那敏颗粒中对氨基酚、对氯苯乙酰胺、其他杂质的有关物质测定方法。目前文献中未报道有同时测定上述特定杂质及其他杂质的方法。
24.4.2 建立全新的梯度洗脱方法，本发明方法所建立的梯度洗脱方法灵敏、快捷、所花时间较少，所建立的梯度洗脱方法在本品文献中均未见报道。
25.4.3 本发明方法可有效的控制本品的质量，是现有质量标准的有力补充，弥补了本品质量标准的缺项。
26.5 总结小儿氨酚黄那敏颗粒为儿科常用药，临床用量较大，由于患者年龄较小，对杂质的敏感度更高。目前有关本品的文献较多的着眼于含量，而对有关物质的研究较少，同时测定特定杂质及其他杂质的文献更为少见。本发明首次建立的梯度洗脱测定法可灵敏、快速同时测定本品多个杂质，弥补了该品种质量标准缺陷，对提高该药品的安全性有积极的作用。本发明通过方法验证证明此方法在考察浓度范围内的线性关系良好，回收率符合规定，该方法操作简便，灵敏度高，专属性好，结果准确，可以作为小儿氨酚黄那敏颗粒有关物质的质量控制方法。