一种抗缪勒管激素的检测复合物、试剂盒及其制备方法与流程

1.本技术涉及生物技术领域，尤其涉及一种抗缪勒管激素的检测复合物、试剂盒及其制备方法。


背景技术：

2.抗缪勒管激素(amh)是由二硫键连接两个完全相同的72kd亚基形成的二聚体糖蛋白，由于amh在男性和女性生长发育的不同阶段表达不同，其生物学作用也存在差异，并且基于其病理生理改变的最主要临床应用是评估女性的卵巢储备，因此amh可以进一步为生殖系统相关疾病的辅助诊断及其他疾病治疗中的女性生育能力评估提供依据。
3.而相比较其他传统的生物学指标，由于amh比促卵泡激素、雌二醇、抑制素b和窦卵泡计数更早反映卵巢储备随年龄下降的趋势，且其水平不受月经周期、激素类避孕药和怀孕的影响。同时amh和其他卵巢储备标志物在不同月经周期间的重复性，amh是满足组内相关系数》0.8的激素，说明amh在月经周期之间的变异也较小，支持在月经周期任意时间检测amh。因此amh是卵巢储备功能指标中最为可靠稳定和临床意义较大的一个。
4.目前针对amh的检测技术包括胶体金免疫层析法、时间分辨免疫层析法、化学发光法，其中，化学发光免疫分析技术具有高度的准确性和特异性，成为检验方法中最为重要的技术之一，但是化学发光免疫分析中由于部分的试剂不稳定，易水解，从而导致灵敏度低，因此如何提高稳定的检测试剂，以提高检测的灵敏度，是目前亟需解决的技术问题。


技术实现要素：

5.本技术提供了一种抗缪勒管激素的检测复合物、试剂盒及其制备方法，以解决现有技术中针对抗缪勒管激素的检测试剂稳定性差的技术问题。
6.第一方面，本技术提供了一种抗缪勒管激素的检测复合物，所述检测复合物包括磁珠载体和包裹磁珠抗体的生物素标记抗体，所述检测复合物为核壳结构，其中，外壳为生物素标记抗体，内核为磁珠载体；
7.所述生物素标记抗体和所述磁珠载体之间通过亲和素结合，以使所述生物素标记抗体和所述磁珠载体之间形成生物素-亲和素系统；
8.所述生物素标记抗体为生物素标记的缪勒管激素抗体。
9.可选的，所述亲和素包括卵白亲和素、链霉亲和素和中性亲和素中的至少一种。
10.可选的，所述生物素标记抗体和所述磁珠载体的质量之比为1～10:1～0.5。
11.可选的，所述磁珠载体包括n种不同粒径的磁珠，n≥2且n为正整数。
12.可选的，所述磁珠载体包括第一磁珠和第二磁珠，所述第一磁珠的粒径＞所述第二磁珠，所述第一磁珠和所述第二磁珠的质量之比为1:3～1:1。
13.可选的，所述磁珠载体的粒径为1μm～5μm。
14.第二方面，本技术提供了一种抗缪勒管激素的检测试剂盒，所述检测试剂盒包括碱性磷酸酶和第一方面所述的检测复合物。
15.可选的，所述检测复合物的浓度为0.01mg/ml～0.20mg/ml。
16.可选的，所述检测试剂盒的原料包括生物素标记抗体、碱性磷酸酶标记抗体、生物素化牛血清白蛋白和含有亲和素的磁珠载体。
17.第三方面，本技术提供了一种抗缪勒管激素的检测试剂盒的制备方法，所述方法包括：
18.对不同粒径的所述磁珠载体进行混合，后在基础缓冲液中进行重悬，得到磁珠母液；
19.向所述磁珠母液中加入生物素标记抗体，得到检测复合物；
20.分别收集所述碱性磷酸酶标记抗体、所述检测复合物和所述生物化牛血清白蛋白，得到检测试剂盒。
21.本技术实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：
22.本技术实施例提供的一种抗缪勒管激素的检测复合物，控制生物素标记抗体和磁珠载体之间通过亲和素结合，由于亲和素上的四个相同的亚基可以分别结合一个生物素，而生物素标记抗体中的生物也能同该亚基结合，使得磁珠载体通过一个亲和素可以结合四个生物素标记抗体，由于这种结合方式是非共价相互作用，并且其结合的能力较抗体和抗原的结合能力强，因此通过亲和素不仅可以使得磁珠载体和生物素标记抗体结合牢固，进而得到生物素标记抗体包被磁珠载体形成核壳结构的检测复合物，还可以放大生物素标记抗体的结合强度，由于生物素标记抗体中含有缪勒管激素抗体，而在检测过程中生物素标记抗体能同缪勒管激素结合，因此通过检测复合物可以稳定的结合缪勒管激素，同时该包被模式不但可增加抗体包被数量，也可减少空间位阻效应，提高抗体的利用效率，同时也提升了试剂的稳定性。
附图说明
23.此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本发明的实施例，并与说明书一起用于解释本发明的原理。
24.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
25.图1为本技术实施例提供的方法的流程示意图。
具体实施方式
26.下面将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明，而非限制本发明。
27.在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。
28.除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
29.本技术的创造性思维为：
30.目前针对amh的检测技术包括胶体金免疫层析法、时间分辨免疫层析法、化学发光法，各自的特点如下：
31.(1)胶体金免疫层析法检测快速，成本低，检测结果直观，但由于采用物理吸附的方法结合，抗体容易从胶体金颗粒表面脱落，导致试剂盒批内、批间差异较大。
32.(2)时间分辨免疫层析法的主要原理是采用稀土-镧系元素标记抗体，当在紫外光源的激发下能发射高强度荧光，且衰变时间长，利用延缓测量时间，待样品基质中自然发生的短寿命荧光全部衰变后，再测量稀土元素的特异性荧光，这样就可以完全排除特异本底荧光的干扰，虽然该项技术具有较高的抗干扰能力和灵敏度，但荧光微球制备工艺复杂，不利于大规模生产。
33.(3)化学发光免疫分析技术具有高度的准确性和特异性，成为检验方法中最为重要的技术之一，虽然它具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染、仪器简单经济等优点，而且目前基于吖啶酯的闪光型化学发光试剂盒测量amh过程中，具有反应迅速，准确度高，背景低的优点，但是由于吖啶酯在缓冲液中不稳定，易水解，同时所需仪器设备昂贵，不利于推广。
34.但是目前基于碱性磷酸酶的辉光型化学发光试剂盒所采用的异硫氰酸荧光素放大体系存在稳定性差、多抗特异性差、需避光保存等缺点。
35.而基于碱性磷酸酶的辉光型化学发光试剂盒所采用的生物素-亲和素体系具有光信号持续时间长、灵敏度高，准确度高、稳定性好等优点，因此可以改善异硫氰酸荧光素放大体系存在的问题。
36.本发明实施例提供的技术方案为解决上述技术问题，总体思路如下：
37.一种抗缪勒管激素的检测复合物，所述检测复合物包括磁珠载体和包裹磁珠抗体的生物素标记抗体，所述检测复合物为核壳结构，其中，外壳为生物素标记抗体，内核为磁珠载体；
38.所述生物素标记抗体和所述磁珠载体之间通过亲和素结合；
39.所述生物素标记抗体为生物素标记的缪勒管激素抗体。
40.在一些可选的实施方式中，所述亲和素包括卵白亲和素、链霉亲和素和中性亲和素中的至少一种，其中，所述亲和素可以是卵白亲和素，还可以是链霉亲和素，也可以是中性亲和素。
41.本技术实施例中，控制亲和素的种类的积极效果是由于卵白亲和素、链霉亲和素和中性亲和素中含有的四个相同的亚基的结合生物素标记抗体的能力较强，因此能通过这类亲和素可以提高磁珠载体和生物素标记抗体之间的非共价作用，从而能够保障生物素标记抗体能同缪勒管激素稳定结合。
42.在一些可选的实施方式中，所述生物素标记抗体和所述磁珠载体的质量之比为1～10:1～0.5。
43.申请实施例中，通过调整生物素标记抗体和磁珠载体的质量之比，可以控制灵敏度、线性等相关试剂盒性能，使得试剂盒能根据具体的情况保障其检测的灵敏度和线性。
44.在一些可选的实施方式中，所述磁珠载体包括n种不同粒径的磁珠，n≥2且n为正整数。
45.本技术实施例中，控制磁珠载体包括不同粒大小，能避免单一粒径的磁珠在固定磁场中磁性弱或者对磁场灵敏度弱的问题，从而使得不同粒径的磁珠载体在磁场中能被均匀的吸附，使得同检测复合物结合的缪勒管激素能够被充分的捕获，提高检测试剂的稳定性。
46.在一些可选的实施方式中，所述磁珠载体包括第一磁珠和第二磁珠，所述第一磁珠的粒径＞所述第二磁珠，所述第一磁珠和所述第二磁珠的质量之比为1:3～1:1。
47.本技术实施例中，控制第一磁珠和第二磁珠的质量之比为1:3～1:1的积极效果是是在该质量之比的范围内，既能保证不同粒径的磁珠载体在磁场中能被均匀的吸附，还能通过不同粒径的磁珠结合大量的生物素标记抗体，以方便后续对样本中缪勒管激素的收集。
48.在一些可选的实施方式中，所述磁珠载体的粒径为1μm～5μm。
49.本技术实施例中，控制磁珠载体的粒径为1μm～5μm的积极效果是通过使用大、小粒径磁珠混用解决了单独使用小粒径磁珠磁性弱、大粒径磁珠精密度差等问题。
50.接下来，描述本技术实施例提供的一种抗缪勒管激素的检测试剂盒，所述检测试剂盒包括碱性磷酸酶和所述检测复合物。
51.由于本技术实施例所介绍的检测试剂盒，其包括的检测复合物为本技术实施例前述提供的检测复合物，故而在此不再赘述检测试剂的化学成分和含量。凡是包括本技术实施例的检测复合物的检测试剂盒都属于本技术所欲保护的范围。
52.在一些可选的实施方式中，所述检测复合物的浓度为0.01mg/ml～0.20mg/ml，其中，所述测复合物的浓度可以是0.01mg/ml，也可以是0.10mg/ml，也可以是0.15mg/ml，也可以是0.20mg/ml。
53.本技术实施例中，控制检测复合物的浓度为0.01mg/ml～0.20mg/ml，可以使仪器发光值保持在合理的区间，从而满足测试要求。
54.在一些可选的实施方式中，所述检测试剂盒的原料包括生物素标记抗体、碱性磷酸酶标记抗体、生物素化牛血清白蛋白和含有亲和素的磁珠载体。
55.本技术实施例中，通过控制试剂盒的原料，并且控制试剂盒原料中含有生物素化牛血清白蛋白，利用生物素化牛血清白蛋白中的生物素对试剂盒使用过程中未结合的生物素标记抗体的磁珠载体，从而减少磁珠载体非特异性的结合碱性磷酸酶标记抗体，从而产生非特异性的信号，影响检测的灵敏度。
56.接下来，如图1所示，描述本技术实施例提供的抗缪勒管激素的检测试剂盒的制备方法，所述方法包括：
57.s1.对不同粒径的所述磁珠载体进行混合，后在基础缓冲液中进行重悬，得到磁珠母液；
58.s2.向所述磁珠母液中加入生物素标记抗体，得到检测复合物；
59.s3.分别收集所述碱性磷酸酶标记抗体、所述检测复合物和所述生物化牛血清白蛋白，得到检测试剂盒。
60.在一些可选的实施方式中，所述生物化牛血清白蛋白的浓度为0.001mg/ml～0.010mg/ml。
61.本技术实施例中，控制生物化牛血清白蛋白的浓度为0.001mg/ml～0.030mg/ml积
极效果是有效封闭未与生物素抗体结合的链霉亲和素磁珠，减少非特异性信号的产生，提高试剂检测灵敏度与准确度，并控制试剂成本。
62.实施例1
63.一种抗缪勒管激素的检测复合物，包括磁珠载体和包裹磁珠抗体的生物素标记抗体，检测复合物为核壳结构，其中，外壳为生物素标记抗体，内核为磁珠载体；
64.生物素标记抗体和磁珠载体之间通过生物素-亲和素体系结合；
65.生物素标记抗体为生物素标记的抗缪勒管激素抗体。
66.亲和素为链霉亲和素。
67.磁珠载体包括粒径为1μm的第一磁珠和粒径为3μm的第二磁珠。
68.一种抗缪勒管激素的制备方法，具体包括：
69.1.标记物制备：
70.(1)磁珠的预处理：
71.先置换上清，用ph7.4的pbs缓冲液清洗三次，然后将第一磁珠和第二磁珠按照1:1比例混合后，重悬至适量的基础缓冲液中制备成磁珠母液，其中，磁珠母液浓度为10mg/ml。
72.(2)生物素标记抗体的制备：
73.先使用ph为7.4的质量浓度为50mm的磷酸缓冲液(pb)替换掉抗体自带的缓冲液，再用无水n，n-二甲基甲酰胺(dmf)将生物素溶解成0.05mg/ml～200mg/ml的生物素母液；
74.在避光条件下，取已置换缓冲液的缪勒管激素抗体和生物素母液按照摩尔浓度1:1～500的比例进行标记，标记所用缓冲液为ph为7.4的质量浓度为50mm的pb溶液，然后在避光条件下悬混标记0.5h～6h，反应结束后使用蛋白纯化仪纯化，得到生物素标记抗体，用超微量分光光度计测定蛋白浓度，再用加有保护剂的缓冲液稀释至0.5mg/ml。
75.(3)生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠的制备：
76.将生物素标记抗体与磁珠母液按照1:5比例混合反应30min后，用ph为7.4的pbs缓冲液清洗三次，最后用加有保护剂的缓冲液稀释至10mg/ml。
77.(4)碱性磷酸酶标记抗体的制备：
78.先使用ph为7.4的质量浓度为50mm的磷酸缓冲液(pb)替换掉抗体自带的缓冲液。
79.称取适量3-(2-吡啶二巯基)丙酸n-羟基琥珀酰亚胺酯(spdp)并用二甲基亚砜(dmso)完全溶解配制成5mg/ml的spdp母液，取已置换缓冲液的抗体和spdp母液按照摩尔浓度1:1～1000的比例进行标记，室温反应1h～8h。
80.称取100mg琥珀酰亚胺4-(n-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸盐(smcc)并用二甲基亚砜(dmso)完全溶解配制成5mg/ml的smcc母液，取碱性磷酸酶和smcc母液按照摩尔浓度1:1～1000的比例进行标记，室温反应1h～8h。
81.称取50mg琥珀酰亚胺4-(n-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸盐(smcc)并用dmso完全溶解，根据预期摩尔比计算smcc用量并加入到碱性磷酸酶溶液中彻底混匀，室温反应1h～2h，称取适量三(2-羧乙基)膦(tcep)等还原剂并配制成1mg/ml的tcep溶液，根据摩尔比1:1～2000加入到抗体溶液中，室温反应10min。
82.将上述制备的已还原的抗体和马来酰亚胺化的碱性磷酸酶按摩尔比1:1进行充分混匀，室温反应5h，已完成抗体和碱性磷酸酶的交联。
83.取适量的n-乙基马来酰亚胺(nem)并配制成1mg/ml的nem溶液，加入至交联后的溶
液中，室温孵育30min。反应结束后用蛋白纯化仪纯化去除溶液中杂质，最终碱性磷酸酶标记抗体用超微量分光光度计测定蛋白浓度，再用加有稳定剂的缓冲液稀释至0.5mg/ml。
84.2.试剂盒组分：
85.(1)ra组份：
86.生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠和生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠稀释液，其中，以质量分数计，生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠稀释液的配方为：
87.n-(2-乙酰胺基)-2-氨基乙磺酸(aces)：50mmol/l～200mmol/l，
88.牛血清白蛋白：0.5％～2％，
89.吐温80：0.05％～0.2％，
90.(1,1,3,3-四甲基丁基)苯基-聚乙二醇(tritonx-114)：0.1％，
91.生物素化牛血清白蛋白：2％，
92.proclin 300：0.1％；
93.制备生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠稀释液后，在ph为6.5的条件下，以0.2μm滤膜过滤，于2℃～8℃条件下保存备用；
94.(2)rb组份：
95.碱性磷酸酶标记抗体；
96.碱性磷酸酶标记抗体稀释液，其中，以质量分数计，碱性磷酸酶标记抗体稀释液的配方为：
97.pb：50mmol/l～100mmol/l，
98.zncl2：0.1mm～0.5mm，
99.mgcl2：1mm～5mm，
100.酪蛋白：0.5％～2％，
101.peg：0.05％～0.2％，
102.胎牛血清：2％，
103.叠氮化钠：0.1％，
104.制备碱性磷酸酶标记抗体稀释液后，在ph为7.0的条件下，以0.5μm滤膜过滤，于2℃～8℃条件下保存备用；
105.实施例2
106.将实施例2和实施例1进行对比，实施例2和和实施例1的区别在于：
107.在生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠稀释液中加入质量分数为3％蔗糖。
108.实施例3
109.将实施例3和实施例1进行对比，实施例3和和实施例1的区别在于：
110.在生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠稀释液中加入质量分数为1％海藻糖。
111.实施例4
112.将实施例4和实施例1进行对比，实施例4和和实施例1的区别在于：
113.将碱性磷酸酶标记抗体稀释液的ph调整为6.5。
114.实施例5
115.将实施例5和实施例1进行对比，实施例5和和实施例1的区别在于：
116.在碱性磷酸酶标记抗体稀释液中添加3％山梨醇。
117.实施例6
118.将实施例6和实施例1进行对比，实施例6和和实施例1的区别在于：
119.将第二磁珠和第一磁珠的比例调整为1:3。
120.实施例6
121.将实施例6和实施例1进行对比，实施例6和和实施例1的区别在于：
122.将第二磁珠和第一磁珠的比例调整为1:3。
123.对比例1
124.将对比例1和实施例1进行对比，对比例1和和实施例1的区别在于：
125.在生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠稀释液中不加入质量分数为2％的生物素化牛血清白蛋白。
126.对比例2
127.将对比例2和实施例1进行对比，对比例2和和实施例1的区别在于：
128.在磁珠的预处理时，不加粒径为1μm的含链霉亲和素的磁珠。
129.对比例3
130.将对比例3和实施例1进行对比，对比例3和和实施例1的区别在于：
131.将含链霉亲和素的磁珠替换成抗异硫氰酸酯荧光素抗体的磁珠，同时将生物素替换成异硫氰酸酯荧光素。
132.相关实验：
133.将实施例1-6和对比例1-3所得的试剂盒防止在全自动化学发光免疫分析仪(型号为：szy-cl2100)上，并按照检测流程，选择缪勒管激素的校准品定标校准，测质控品在靶值范围内后，测试灵敏度和线性等性能指标，结果如表1至表6所示。
134.相关实验的测试方法：
135.最低检测线评价：用零浓度校准品s1作为样本进行检测,重复测定20次,得出20次测量结果的相对发光强度(rlu)值，计算其平均值(m)和标准差(sd)，得出m+2sd，根据零浓度校准品和相邻校准品s2之间的浓度rlu进行两点回归拟合得出一次方程，将m+2sd的rlu值带入上述方程中，求出对应的浓度值，即为最低检测限，结果如表1所示。
136.线性评价：用接近线性区间下限的低浓度样本稀释接近线性区间上限的高浓度样本，混合成至少6个稀释浓度，用实施例1-6、对比例1-3制备好的试剂分别测定以上稀释后的样本，每个稀释浓度测定3次，分别求出每个稀释浓度检测结果的均值，以稀释浓度为自变量，以检测结果均值为因变量求出线性回归方程，并计算线性回归的相关系数(r)，要求r＞0.99，结果如表2所示。
137.试剂加速稳定性：实施例1-6、对比例1-3在37℃的条件下分别放置1天、3天、7天和14天，验证试剂加速稳定性，结果如表3所示。
138.试剂长期稳定性：分别取实施例1-6、对比例1-3在2℃～8℃条件下储存第0个月、第3个月、第6个月、第9个月和第12个月的试剂进行检测，验证试剂长期稳定性，结果如表4所示。
139.样本相关性评价：选择80份线性范围在0ng/ml-30ng/ml内的新鲜血清样本，比较本发明的试剂盒与罗氏试剂盒检测结果的相关性，结果如表5所示。
140.抗生物素干扰能力评价：准备生物素干扰阴性血清(对比例)和生物素干扰阳性血
清(向生物素干扰阴性血清中添加生物素制备而成，生物素含量为100ng/ml)，两个样本各重复测定3次，计算浓度偏差，结果如表6所示。
141.表1最低检测线评价情况表
[0142][0143][0144]
由表1可知，本技术实施例1-6中最低检测线均低于0.10ng/ml的要求，因此本技术实施例所提供的试剂盒能满足实际使用的要求，而对比例1-3中最低检测线均大于0.10ng/ml，不能较好的满足实际使用的要求。
[0145]
表2线性评价情况表
[0146]
[0147][0148]
由表2可知，本技术实施例1-6中线性相关系数大于0.9900，同时相对偏差均小于10％，因此本技术实施例所提供的试剂盒能满足实际使用的要求，而对比例1-3中相对偏差均大于10％，不能较好的满足实际使用的要求。
[0149]
表3试剂加速稳定性情况表
[0150]
试剂加速稳定性第1天第3天第7天第14天实施例199％98％95％93％实施例297％96％91％90％
实施例396％94％93％92％实施例497％92％91％90％实施例599％98％95％91％实施例699％98％97％95％对比例198％93％91％90％对比例295％94％91％90％对比例395％90％88％85％
[0151]
由表3可知，在14天加速稳定性测试中，本技术实施例1-6的试剂盒中的试剂活性保留率均大于90％，满足实际使用的需求，但是对比例3中的异硫氰酸酯体系的试剂活性保留率仅为85％，说明本技术采用的链霉亲和素体系的稳定性更好，性能更稳定。
[0152]
表4试剂长期稳定性情况表
[0153]
试剂加速稳定性第0个月第3个月第6个月第9个月第12个月实施例199％97％93％90％85％实施例298％93％92％91％86％实施例398％96％92％91％88％实施例498％93％93％91％88％实施例598％91％88％84％83％实施例699％96％95％92％91％对比例197％91％81％80％75％对比例299％97％90％88％76％对比例398％92％90％85％79％
[0154]
由表4可知，在12个月的长期稳定性测试中，本技术实施例1-6的试剂盒中试剂的保留率均高于80％，满足实际使用的要求，而对比例1-3的试剂盒中试剂的保留率均低于80％，不满足实际使用的要求。
[0155]
表5样本相关性评价情况表
[0156]
[0157]
[0158]
[0159]
[0160][0161]
由表5可知，在样本相关性评价的80例新鲜临床样本中，本技术实施例1-6的相关系数r均大于0.9900，说明本技术的试剂盒的临床相关性较好，因此能够满足实际使用的要求，而对比例1-3中的试剂盒的相关系数r均小于0.9900，说明对比例1-3的相关系数较差，因此不满足实际使用的要求。
[0162]
表6抗生物素干扰能力评价情况表
[0163][0164]
由表6可知，在抗生物素干扰能力的实验中，对比例1中由于未加入2％的生物素化牛血清白蛋白，测定生物素干扰样本浓度相对偏差大于
±
10％，说明测值过程出现明显偏差，也说明该对比例的试剂盒的抗生物素干扰能力较差，从而证明了本技术实施例中加入2％的生物素化牛血清白蛋白，可以有效提高试剂抗生物素干扰能力。
[0165]
本技术实施例中的一个或多个技术方案，至少还具有如下技术效果或优点：
[0166]
(1)本技术实施例提供的检测复合物采用亲和素-生物素放大体系，由于一个亲合素分子能同时结合4个生物素，且一个抗体可标记多个生物素而产生放大效应，提升检测敏感性，并且该包被模式不但可增加抗体包被数量，也可减少空间位阻效应，提高抗体的利用效率，同时也提升了试剂的稳定性。
[0167]
(2)本技术实施例提供的检测复合物，能替代稳定性差、多抗特异性差、需避光保存的异硫氰酸荧光素放大体系，从而提高检测的准确性。
[0168]
(3)本技术实施例提供的检测复合物，通过采用不同大小粒径的链霉亲和素包被磁珠，不仅解决了单独使用小粒径磁珠磁性弱的问题，还能解决大粒径磁珠灵敏度差的问题。
[0169]
(4)本技术实施例提供的试剂盒，通过加入生物素化牛血清白蛋白来封闭未与生物素抗体结合的游离的链霉亲和素包被磁珠，有效封闭未与生物素抗体结合的链霉亲和素包被磁珠，减少非特异性信号的产生，提高试剂检测灵敏度与准确度。
[0170]
(5)本技术实施例提供的方法，整体操作简单，制备过程简便。
[0171]
需要说明的是，在本文中，诸如“第一”和“第二”等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括
……”
限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
[0172]
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
[0173]
以上所述仅是本发明的具体实施方式，使本领域技术人员能够理解或实现本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所申请的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。