一种人参中拟人参皂苷F11的质量检测方法与流程

一种人参中拟人参皂苷f11的质量检测方法
技术领域
1.本发明涉及人参的质量检测方法，特别是一种人参中拟人参皂苷f11的质量检测方法。


背景技术：

2.中药人参为五加科植物人参panax ginseng c.a.mey.的干燥根和根茎；多于秋季采挖，洗净经晒干或烘干。栽培的俗称“园参”；播种在山林野生状态下自然生长的称“林下山参”，习称“籽海”；味甘、微苦，性微温；归脾、肺、心、肾经；具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津养血，安神益智的功效。人参中含有人参皂苷re、人参皂苷rf、人参皂苷rg1、人参皂苷rb1等多种化学成分，现代药理研究表明其具有益智、强心、延缓衰老、增强机体适应性等多种药理活性。多用于体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少，肺虚喘咳，津伤口渴，内热消渴，气血亏虚，久病虚羸，惊悸失眠，阳痿宫冷。人参中皂苷类及多糖类是其发挥药效的主要物质，药用价值极高，广泛用于医药、生物农业领域，因与西洋参理化成分特性相似，市场上易与混淆品西洋参混淆使用，而未公布有两者的确切的区别检验方法，为确保用药质量安全以及便于对人参中拟人参皂苷f11进行质量检测，故创建一种对人参中拟人参皂苷f11检查项质量检验方法。


技术实现要素：

3.本发明的目的在于，提供一种人参中拟人参皂苷f11的质量检验方法。本发明具有准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，能有效的控制该药材的质量，确保药物临床药效的特点。
4.本发明的技术方案：
5.一种人参中拟人参皂苷f11的质量检测方法，所述质量检测方法按照以下步骤进行：
6.(1)对照品溶液的制备：取拟人参皂苷f11对照品，精密称定，加甲醇溶解，即得；
7.(2)供试品溶液的制备：取人参粉末0.5g，精密称定；置具塞锥形瓶中，精密加入40-75％甲醇溶液40-160ml，密塞，称定重量，加热回流0.5-3小时，放冷，再称定重量，用40-75％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液50ml，置蒸发皿中，蒸干，加水10-40ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取3-5次，每次10-50ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤1-3次，每次20-110ml，再用正丁醇饱和水20-110ml洗涤，分取正丁醇液，减压浓缩，回收溶剂至干，加甲醇使溶解，转移至1-5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即为供试品溶液；
8.(3)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈：水溶液＝20-40:60-80；柱温25-35℃；流速：0.6-1.2ml/min；蒸发光检测器：增益：15-55，漂移管温度：30-85℃，雾化器温度：40-80℃，气体压力：15-45psi；理论板数按拟人参皂苷f11计算应不低于3000；
9.(4)分别精密吸取对照品溶液5μl、20μl及供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，按照步骤(3)的色谱条件进行测定，计算拟人参皂苷f11的含量，即得。
10.前述人参中拟人参皂苷f11的质量检测方法，所述步骤(1)中：对照品溶液的制备：取拟人参皂苷f11对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得。
11.前述人参中拟人参皂苷f11的质量检测方法，所述步骤(2)中：供试品溶液的制备：取人参粉末0.5g，精密称定；置具塞锥形瓶中，精密加入50-70％甲醇溶液50-150ml，密塞，称定重量，加热回流0.5-2小时，放冷，再称定重量，用50-70％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液50ml，置蒸发皿中，蒸干，加水20-30ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取3-5次，每次20-40ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤1-3次，每次25-100ml，再用正丁醇饱和水30-100ml洗涤，分取正丁醇液，减压浓缩，回收溶剂至干，加甲醇使溶解，转移至2-5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即为供试品溶液。
12.具体的说，前述人参中拟人参皂苷f11的质量检测方法，所述步骤(2)中：供试品溶液的制备：取人参粉末0.5g，精密称定；置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇溶液100ml，密塞，称定重量，加热回流1.5小时，放冷，再称定重量，用60％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液50ml，置蒸发皿中，蒸干，加水25ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次50ml，再用正丁醇饱和水50ml洗涤，分取正丁醇液，减压浓缩，回收溶剂至干，加甲醇使溶解，转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即为供试品溶液。
13.前述人参中拟人参皂苷f11的质量检测方法，所述步骤(3)中：色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈：水溶液＝25-35:65-75；柱温25-35℃；流速：0.8-1ml/min；蒸发光检测器：增益：20-50，漂移管温度：40-80℃，雾化器温度：35-75℃，气体压力：20-40psi。理论板数按拟人参皂苷f11计算应不低于3000。
14.具体的说，前述人参中拟人参皂苷f11的质量检测方法，所述步骤(3)中：色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈：水溶液＝35:65；柱温35℃；流速：0.9ml/min；蒸发光检测器：增益：30，漂移管温度：45℃，雾化器温度：40℃，气体压力：30psi。理论板数按拟人参皂苷f11计算应不低于3000。
15.前述人参中拟人参皂苷f11的质量检测方法，所述步骤(4)中：分别精密吸取对照品溶液5μl、20μl及供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，按照步骤(3)的色谱条件进行测定，用外标两点法对数方程计算拟人参皂苷f11的含量，即得。
16.本发明有益效果：
17.人参与西洋参理化成分特性相似，市场上易与混淆品西洋参混淆使用，本方法通过检测人参中拟人参皂苷f11，进行判断区分人参与西洋参，在人参中无拟人参皂苷f11成分，而西洋参含有人参皂苷f11成分。该方法的建立，确保用药质量安全以及便于对人参中拟人参皂苷f11进行质量检测。
18.本发明具有准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，能有效的控制该药材的质量，确保药物临床药效的特点。
附图说明：
19.图1：专属性实验拟人参对照品溶液色谱图(5ul进样量)；
20.图2：专属性实验西洋参供试品溶液色谱图；
21.图3：专属性实验拟人参对照品溶液色谱图(20ul进样量)；
22.图4：专属性实验空白溶液色谱图；
23.图5：专属性实验人参供试品溶液色谱图；
24.图6：检测限实验空白溶液色谱图；
25.图7：检测限实验拟人参对照品溶液色谱图2(5ul进样量)；
26.图8：耐用性实验拟人参对照品溶液色谱图(20ul进样量，色谱柱为：安捷伦xdb-c18，250
×
4.6mm，5μm)；
27.图9：耐用性实验拟人参对照品溶液色谱图1(5ul进样量，色谱柱为：安捷伦xdb-c18，250
×
4.6mm，5μm)；
28.图10：耐用性实验拟人参对照品溶液色谱图2(5ul进样量，色谱柱为：安捷伦xdb-c18，250
×
4.6mm，5μm)；
29.图11：耐用性实验拟人参对照品溶液色谱图3(5ul进样量，色谱柱为：安捷伦xdb-c18，250
×
4.6mm，5μm)；
30.图12：耐用性实验人参主根供试品溶液色谱图(10ul进样量，色谱柱为：安捷伦xdb-c18，250
×
4.6mm，5μm)；
31.图13：耐用性实验拟人参对照品溶液色谱图1(5ul进样量，色谱柱为：watersxdb-c18，250
×
4.6mm，5μm)；
32.图14：耐用性实验拟人参对照品溶液色谱图2(5ul进样量，色谱柱为：watersxdb-c18，250
×
4.6mm，5μm)；
33.图15：耐用性实验拟人参对照品溶液色谱图3(5ul进样量，色谱柱为：watersxdb-c18，250
×
4.6mm，5μm)；
34.图16：耐用性实验拟人参对照品溶液色谱图(20ul进样量，色谱柱为：watersxdb-c18，250
×
4.6mm，5μm)；
35.图17：耐用性实验人参主根供试品溶液色谱图(10ul进样量，色谱柱为：waters xdb-c18，250
×
4.6mm，5μm)；
36.图18：耐用性实验拟人参对照品溶液色谱图1(5ul进样量，色谱柱为：岛津ods-3，250
×
4.6mm，5μm)；
37.图19：耐用性实验拟人参对照品溶液色谱图2(5ul进样量，色谱柱为：岛津ods-3，250
×
4.6mm，5μm)；
38.图20：耐用性实验拟人参对照品溶液色谱图3(5ul进样量，色谱柱为：岛津ods-3，250
×
4.6mm，5μm)；
39.图21：耐用性实验拟人参对照品溶液色谱图(20ul进样量，色谱柱为：岛津ods-3，250
×
4.6mm，5μm)；
40.图22：耐用性实验人参主根供试品溶液色谱图(10ul进样量，色谱柱为：岛津ods-3，250
×
4.6mm，5μm)；
具体实施方式
41.下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。
42.本发明的实施例
43.实施例1：
44.1.性状：主根呈纺锤形或圆柱形，长3～15cm，直径1～2cm。表面灰黄色，上部或全体有疏浅断续的粗横纹及明显的纵皱，下部有支根2～3条，并着生多数细长的须根，须根上常有不明显的细小疣状突出。根茎(芦头)长1～4cm，直径0.3～1.5cm，多拘挛而弯曲，具不定根(艼)和稀疏的凹窝状茎痕(芦碗)。质较硬，断面淡黄白色，显粉性，形成层环纹棕黄色，皮部有黄棕色的点状树脂道及放射状裂隙。香气特异，味微苦、甘。
45.或主根多与根茎近等长或较短，呈圆柱形、菱角形或人字形，长1～6cm。表面灰黄色，具纵皱纹，上部或中下部有环纹。支根多为2～3条，须根少而细长，清晰不乱，有较明显的疣状突起。根茎细长，少数粗短，中上部具稀疏或密集而深陷的茎痕。不定根较细，多下垂。
46.2.含量测定：照高效液相色谱法(通则0512)测定：
47.色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水溶液(35:65)为流动相；柱温35℃；流速：0.9ml/min；蒸发光检测器：增益：30，漂移管温度：45℃，雾化器温度：40℃，气体压力：30psi。理论板数按拟人参皂苷f11计算应不低于3000。
48.对照品溶液的制备：取拟人参皂苷f11对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得。
49.供试品溶液的制备：取人参粉末0.5g，精密称定；置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇溶液100ml，密塞，称定重量，加热回流1.5小时，放冷，再称定重量，用60％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液50ml，置蒸发皿中，蒸干，加水25ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次50ml，再用正丁醇饱和水50ml洗涤，分取正丁醇液，减压浓缩，回收溶剂至干，加甲醇适量使溶解，转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即为供试品溶液。
50.测定法：分别精密吸取对照品溶液5μl、20μl及供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算拟人参皂苷f11的含量，即得。
51.含量测定结果：人参未检出拟人参皂苷f11(c
42h72o14
)。
52.人参用法与用量：3-9g,另煎兑服；也可研粉吞服，一次2g，一日两次。
53.实施例2：
54.1.性状：主根呈纺锤形或圆柱形，长3～15cm，直径1～2cm。表面灰黄色，上部或全体有疏浅断续的粗横纹及明显的纵皱，下部有支根2～3条，并着生多数细长的须根，须根上常有不明显的细小疣状突出。根茎(芦头)长1～4cm，直径0.3～1.5cm，多拘挛而弯曲，具不定根(艼)和稀疏的凹窝状茎痕(芦碗)。质较硬，断面淡黄白色，显粉性，形成层环纹棕黄色，皮部有黄棕色的点状树脂道及放射状裂隙。香气特异，味微苦、甘。
55.或主根多与根茎近等长或较短，呈圆柱形、菱角形或人字形，长1～6cm。表面灰黄色，具纵皱纹，上部或中下部有环纹。支根多为2～3条，须根少而细长，清晰不乱，有较明显的疣状突起。根茎细长，少数粗短，中上部具稀疏或密集而深陷的茎痕。不定根较细，多下垂。
56.2.含量测定：照高效液相色谱法(通则0512)测定：
57.色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水溶液(20:70)为流动相；
柱温25℃；流速：0.7ml/min；蒸发光检测器：增益：20，漂移管温度：30℃，雾化器温度：40℃，气体压力：25psi。理论板数按拟人参皂苷f11计算应不低于3000。
58.对照品溶液的制备：取拟人参皂苷f11对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得。
59.供试品溶液的制备：取人参粉末0.5g，精密称定；置具塞锥形瓶中，精密加入40％甲醇溶液40ml，密塞，称定重量，加热回流0.5小时，放冷，再称定重量，用40％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液50ml，置蒸发皿中，蒸干，加水10ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取3次，每次10ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤1次，每次20ml，再用正丁醇饱和水20ml洗涤，分取正丁醇液，减压浓缩，回收溶剂至干，加甲醇适量使溶解，转移至1ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即为供试品溶液。
60.测定法：分别精密吸取对照品溶液5μl、20μl及供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算拟人参皂苷f11的含量，即得。
61.含量测定结果：人参未检出拟人参皂苷f11(c
42h72o14
)。
62.人参用法与用量：3-9g,另煎兑服；也可研粉吞服，一次2g，一日两次。
63.实施例3：
64.1.性状：主根呈纺锤形或圆柱形，长3～15cm，直径1～2cm。表面灰黄色，上部或全体有疏浅断续的粗横纹及明显的纵皱，下部有支根2～3条，并着生多数细长的须根，须根上常有不明显的细小疣状突出。根茎(芦头)长1～4cm，直径0.3～1.5cm，多拘挛而弯曲，具不定根(艼)和稀疏的凹窝状茎痕(芦碗)。质较硬，断面淡黄白色，显粉性，形成层环纹棕黄色，皮部有黄棕色的点状树脂道及放射状裂隙。香气特异，味微苦、甘。
65.或主根多与根茎近等长或较短，呈圆柱形、菱角形或人字形，长1～6cm。表面灰黄色，具纵皱纹，上部或中下部有环纹。支根多为2～3条，须根少而细长，清晰不乱，有较明显的疣状突起。根茎细长，少数粗短，中上部具稀疏或密集而深陷的茎痕。不定根较细，多下垂。
66.2.含量测定：照高效液相色谱法(通则0512)测定：
67.色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水溶液(40:60)为流动相；柱温30℃；流速：1.2ml/min；蒸发光检测器：增益：50，漂移管温度：75℃，雾化器温度：80℃，气体压力：45psi。理论板数按拟人参皂苷f11计算应不低于3000。
68.对照品溶液的制备：取拟人参皂苷f11对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得。
69.供试品溶液的制备：取人参粉末0.5g，精密称定；置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇溶液160ml，密塞，称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，用75％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液50ml，置蒸发皿中，蒸干，加水40ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取5次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次100ml，再用正丁醇饱和水100ml洗涤，分取正丁醇液，减压浓缩，回收溶剂至干，加甲醇适量使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即为供试品溶液。
70.测定法：分别精密吸取对照品溶液5μl、20μl及供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算拟人参皂苷f11的含量，即得。
71.含量测定结果：人参未检出拟人参皂苷f11(c
42h72o14
)。
72.人参用法与用量：3-9g,另煎兑服；也可研粉吞服，一次2g，一日两次。
73.发明人为验证本发明的效果进行了以下实验：
74.实验例：
75.1人参的来源
76.市场自购，产地为吉林省
77.2性状
78.主根呈纺锤形或圆柱形，长3～15cm，直径1～2cm。表面灰黄色，上部或全体有疏浅断续的粗横纹及明显的纵皱，下部有支根2～3条，并着生多数细长的须根，须根上常有不明显的细小疣状突出。根茎(芦头)长1～4cm，直径0.3～1.5cm，多拘挛而弯曲，具不定根(艼)和稀疏的凹窝状茎痕(芦碗)。质较硬，断面淡黄白色，显粉性，形成层环纹棕黄色，皮部有黄棕色的点状树脂道及放射状裂隙。香气特异，味微苦、甘。
79.或主根多与根茎近等长或较短，呈圆柱形、菱角形或人字形，长1～6cm。表面灰黄色，具纵皱纹，上部或中下部有环纹。支根多为2～3条，须根少而细长，清晰不乱，有较明显的疣状突起。根茎细长，少数粗短，中上部具稀疏或密集而深陷的茎痕。不定根较细，多下垂。
80.3含量测定
81.中药人参，收载于《中国药典》2020年版一部,具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津养血，安神益智的功效。人参在日常生活中应用广泛，为能更好的控制该原料药的质量，因此采用高效液相色谱法和蒸发光散射测定拟人参皂苷f11含量，并进行了方法学研究。
82.3.1仪器 岛津lc-2030高效液相色谱仪；lcsolution色谱工作站；美国waters液相色谱仪，包括：2424蒸发光散射检测器、柱温箱、ga-10b低噪音空气泵、empower色谱工作站；超声波中药提取机(型号：ks-500zt,超声功率：500w，超声频率：28/33/40/42/50/59khz；昆山洁力美超声仪器有限公司)。
83.3.2试药 乙腈为色谱纯；正丁醇、甲醇、氨水为分析纯；水为娃哈哈纯净水；拟人参皂苷f11对照品(chengdupurechen-standardco.ltd；批号：200926；供含量测定：98％)
84.3.3色谱条件 色谱柱：watersc18色谱柱(250
×
4.6mm，5μm)、安捷伦xdb-c18色谱柱(250
×
4.6mm，5μm)、岛津ods-3色谱柱(250
×
4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-水溶液(35:65)为流动相；柱温35℃；流速：0.9ml/min；蒸发光检测器：增益：30，漂移管温度：45℃，雾化器温度：40℃，气体压力：30psi。理论板数按拟人参皂苷f11计算应不低于3000。
85.3.4对照品储备液的制备
86.精密称取拟人参皂苷f11对照品适量，加甲醇溶解，制得拟人参皂苷f11对照品溶液的浓度为0.09947mg/ml。
87.3.5供试品溶液的制备
88.取人参粉末0.5g，精密称定；置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇溶液100ml，密塞，称定重量，加热回流1.5小时，放冷，再称定重量，用60％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液50ml，置蒸发皿中，蒸干，加水25ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次50ml，再用正丁醇饱和水50ml洗涤，分取正丁醇液，减压浓缩，回收溶剂至干，加甲醇适量使溶解，转移至2ml量瓶中，加甲
醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
89.3.6西洋参供试品溶液的制备 取西洋参粉末0.5g，精密称定；置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇溶液100ml，密塞，称定重量，加热回流1.5小时，放冷，再称定重量，用60％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液50ml，置蒸发皿中，蒸干，加水25ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次50ml，再用正丁醇饱和水50ml洗涤，分取正丁醇液，减压浓缩，回收溶剂至干，加甲醇适量使溶解，转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
90.3.7空白溶液的制备 精密量取60％甲醇溶液100ml，置具塞锥形瓶中，密塞，称定重量，加热回流1.5小时，放冷，再称定重量，用60％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液50ml，置蒸发皿中，蒸干，加水25ml使溶解，加水饱和正丁醇振摇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次50ml，再用正丁醇饱和水50ml洗涤，分取正丁醇液，减压浓缩，回收溶剂至干，加甲醇适量使溶解，转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
91.3.8专属性实验 分别取拟人参对照品溶液、供试品溶液、西洋参供试品溶液、空白溶液按质量检验方法测定法分别注入液相色谱仪，记录色谱图(见图1至图5)。从图中可见，对照品色谱图中，拟人参皂苷f11在14.1min出峰，阴性样品、空白样品在此处无峰，西洋参样品在此处有峰，即本试验条件下拟人参皂苷f11与其他组分应分离完全，分离度大于1.5，理论塔板数以拟人参皂苷f11计，不低于3000。
92.4检测限
93.精密吸取对照品溶液1ml，置2ml容量瓶中，加甲醇稀释，并定容至刻度，摇匀，作为进样对照品浓度(浓度为：10.15
×
98％
÷
100
×1÷
2mg/ml),结果在5μl进样量下，信噪比为3:1，由此计算拟人参皂苷f11的最低检测限为：0.268475μg,结果见下表表1(见图6至图7)。
94.表1检测限考察表
[0095][0096]
4.1耐用性
[0097]
不同色谱柱的考察：取人参样品,按上述供试品溶液制备方法，用同一供试品溶液，在其他色谱条件不变的基础上，改用不同生产厂家，以考察该方法适用性，结果见下表表2(见图8至图22)。
[0098]
条件1：安捷伦xdb-c18，250
×
4.6mm，5μm
[0099]
条件2：watersxdb-c18，250
×
4.6mm，5μm
[0100]
条件3：岛津ods-3，250
×
4.6mm，5μm
[0101]
表2不同色谱柱考察
[0102]
条件123含量(μg/g)未检出未检出未检出保留时间(min)10.514.317.2